骨结核是一种严重危害人体健康的骨科感染性疾病,其病灶组织破坏的最大特点是骨质的吸收及破坏,其中破骨细胞是骨吸收的主要细胞。破骨细胞是由造血干细胞分化而来的多核细胞,通常是由核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of ...骨结核是一种严重危害人体健康的骨科感染性疾病,其病灶组织破坏的最大特点是骨质的吸收及破坏,其中破骨细胞是骨吸收的主要细胞。破骨细胞是由造血干细胞分化而来的多核细胞,通常是由核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)与核因子κB受体活化因子(receptor activator for nuclear factor-κB,RANK)调控产生。结核分枝杆菌可以通过RANKL信号通路激活破骨细胞生成转录因子,以增强破骨细胞对骨质的吸收。笔者通过综述RANKL信号通路的结构及破骨细胞的研究进展,以及它们在骨结核临床治疗中可能发挥的潜在作用,为该领域的研究提供新的思路。展开更多
目的探讨丹酚酸A(Sal A)对氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)损伤的BV2细胞炎症反应和氧化应激的影响及可能机制。方法用含Na_(2)S_(2)O_(4)10 mmol·L^(-1)的无糖Earle′s平衡盐缓冲液建立BV2细胞的OGD/R损伤模型,加入Na_(2)S_(2)O_(4)无糖Ea...目的探讨丹酚酸A(Sal A)对氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)损伤的BV2细胞炎症反应和氧化应激的影响及可能机制。方法用含Na_(2)S_(2)O_(4)10 mmol·L^(-1)的无糖Earle′s平衡盐缓冲液建立BV2细胞的OGD/R损伤模型,加入Na_(2)S_(2)O_(4)无糖Earle′s平衡盐缓冲液,置培养箱(37℃,5%CO_(2))中培养1.5 h(氧糖剥夺)后换为正常培养基培养24 h(再灌注)。随后实验分为细胞对照组、OGD/R组、OGD/R+Sal A 1,5和10μmol·L^(-1)组、OGD/R+ML385组、OGD/R+ML385+Sal A 1,5和10μmol·L^(-1)组及OGD/R+依达拉奉(Eda,50μmol·L^(-1))组,继续培养24 h。(1)CCK8法测定细胞存活率。(2)ELISA检测细胞上清中白细胞介素1β(IL^(-1)β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL^(-1)0、IL-4、转化生长因子β(TGF-β)含量;化学荧光法检测细胞活性氧(ROS)含量;比色法测定细胞丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和氯霉素乙酰转移酶(CAT)活性。(3)Western印迹法检测Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)、核因子红系2相关因子(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)、前醌氧化还原酶1(NQO1)蛋白表达水平及核因子κB p65蛋白磷酸化(p-NF-κB p65)水平。结果(1)与细胞对照组相比,OGD/R组细胞存活率显著降低(P<0.01);与OGD/R组相比,OGD/R+Sal A 1,5和10μmol·L^(-1)组细胞存活率显著升高(P<0.05,P<0.01)。(2)与细胞对照组相比,OGD/R组IL^(-1)β,IL-6和TNF-α含量显著升高,IL^(-1)0,IL-4和TGF-β含量显著降低,ROS和MDA含量显著升高,SOD,CAT和GSH-Px活性显著降低(P<0.01);与OGD/R组相比,OGD/R+Sal A 1,5和10μmol·L^(-1)和OGD/R+Eda组IL-6含量显著降低,IL^(-1)0,IL-4和TGF-β含量显著增加,ROS和MDA含量显著降低,SOD,CAT和GSH-Px活性显著升高(P<0.05,P<0.01)。(3)与细胞对照组相比,OGD/R组p-NF-κB p65蛋白表达显著升高(P<0.01);与OGD/R组相比,OGD/R+Sal A 5和10μmol·L^(-1)和OGD/R+Eda组Keap1和胞浆Nrf2蛋白表达显著降低,胞核Nrf2,HO-1和NQO1蛋白表达显著升高,p-NF-κB p65蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。OGD/R+ML385组与OGD/R组相比,OGD/R+ML385+Sal A 1,5和10μmol·L^(-1)组分别与OGD/R+Sal A 1,5和10μmol·L^(-1)组相比,Keap1蛋白表达显著升高,Nrf2胞浆和胞核、HO-1和NQO1蛋白表达显著降低,p-NF-κB p65蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论Sal A减轻OGD/R损伤的BV2细胞炎症反应和氧化应激,其作用机制可能是激活Keap1/Nrf2通路和抑制NF-κB通路。展开更多
目的:探讨右美托咪定(DEX)对保护肠源性脓毒症大鼠肠道功能的影响,并基于E2F转录因子1(E2F1)/核因子κB(NF-κB)信号通路初步探讨其潜在作用机制。方法:60只SD大鼠,其中50只大鼠以盲肠结扎穿孔法建立肠源性脓毒症大鼠模型,其余10只大鼠...目的:探讨右美托咪定(DEX)对保护肠源性脓毒症大鼠肠道功能的影响,并基于E2F转录因子1(E2F1)/核因子κB(NF-κB)信号通路初步探讨其潜在作用机制。方法:60只SD大鼠,其中50只大鼠以盲肠结扎穿孔法建立肠源性脓毒症大鼠模型,其余10只大鼠作为假手术组,假手术组大鼠仅分离盲肠远端,不结扎和穿孔。将40只造模成功的大鼠随机分为模型组、低剂量DEX组、中剂量DEX组和高剂量DEX组,每组10只。低、中和高剂量DEX组大鼠即刻腹腔注射20、40及60μg·kg-1DEX,假手术组和模型组大鼠腹腔注射等剂量生理盐水。给药24 h后检测各组大鼠肠道肌电活动情况,检测各组大鼠盲肠中大肠埃希菌、乳酸杆菌和双歧杆菌菌落数,HE染色检测各组大鼠小肠组织的病理形态表现,试剂盒检测各组大鼠小肠组织匀浆上清中分泌型免疫球蛋白A(sIgA)水平和血清中二胺氧化酶(DAO)及D-乳酸水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组大鼠小肠组织中巨噬细胞极化标志物mRNA表达水平,Western blotting法检测各组大鼠小肠组织中巨噬细胞极化标志物和E2F1、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)及NF-κB p65蛋白表达水平。结果:与假手术组比较,模型组大鼠肠道平滑肌慢波频率和振幅降低(P<0.05);与模型组比较,低剂量DEX组大鼠肠道平滑肌慢波振幅升高(P<0.05),中和高剂量DEX组大鼠肠道平滑肌慢波频率及振幅升高(P<0.05);与低剂量DEX组比较,中和高剂量DEX组大鼠肠道平滑肌慢波频率及振幅升高(P<0.05);与中剂量DEX组比较,高剂量DEX组大鼠肠道平滑肌慢波频率和振幅升高(P<0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠肠道大肠埃希菌菌落数增加(P<0.05),双歧杆菌和乳酸杆菌菌落数减少(P<0.05);与模型组比较,低剂量DEX组大鼠肠道双歧杆菌菌落数增加(P<0.05),中和高剂量DEX组大鼠肠道大肠埃希菌菌落数减少(P<0.05),双歧杆菌和乳酸杆菌菌落数增加(P<0.05);与低剂量DEX组比较,中和高剂量DEX组大鼠肠道大肠埃希菌菌落数减少(P<0.05),双歧杆菌和乳酸杆菌菌落数增加(P<0.05);与中剂量DEX组比较,高剂量DEX组大鼠肠道大肠埃希菌菌落数减少(P<0.05),双歧杆菌和乳酸杆菌菌落数增加(P<0.05)。HE染色,假手术组大鼠小肠黏膜组织结构正常且完好;模型组大鼠小肠黏膜上皮细胞坏死,绒毛受损、塌陷、排列紊乱;与模型组比较,低、中和高剂量DEX组大鼠小肠组织的病理学明显改善。与假手术组比较,模型组大鼠小肠组织匀浆上清中sIgA水平降低(P<0.05),血清中DAO和D-乳酸蛋白水平升高(P<0.05);与模型组比较,低剂量DEX组大鼠血清中DAO水平降低(P<0.05),中和高剂量DEX组大鼠小肠组织匀浆上清中sIgA水平升高(P<0.05),血清中DAO和D-乳酸蛋白水平降低(P<0.05);与低剂量DEX组比较,中和高剂量DEX组大鼠小肠组织匀浆上清中sIgA水平升高(P<0.05),血清中DAO和D-乳酸蛋白水平降低(P<0.05);与中剂量DEX组比较,高剂量DEX组大鼠小肠组织匀浆上清中sIgA水平升高(P<0.05),血清中DAO和D-乳酸蛋白水平降低(P<0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠小肠组织中CD86、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)和CD80 m RNA及蛋白表达水平升高(P<0.05),CD206、白细胞介素(IL-4)和CD163 m RNA及蛋白表达水平降低(P<0.05);与模型组比较,低剂量DEX组大鼠小肠组织中CD80 m RNA、CD86蛋白和MCP-1蛋白表达水平降低(P<0.05),IL-4 m RNA、CD163 m RNA、CD206蛋白和CD163蛋白表达水平降低(P<0.05),中和高剂量DEX组大鼠小肠组织中CD86、MCP-1和CD80 m RNA及蛋白表达水平降低(P<0.05),CD206、IL-4和CD163 m RNA及蛋白表达水平升高(P<0.05);与低剂量DEX组比较,中和高剂量DEX组大鼠小肠组织中CD86、MCP-1和CD80 m RNA及蛋白表达水平降低(P<0.05),CD206、IL-4和CD163 m RNA及蛋白表达水平升高(P<0.05);与中剂量DEX组比较,高剂量DEX组大鼠小肠组织中CD86、MCP-1和CD80 m RNA及蛋白表达水平降低(P<0.05),CD206、IL-4和CD163 m RNA及蛋白表达水平升高(P<0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠小肠组织中E2F1蛋白表达水平降低(P<0.05),p-NF-κB p65/NF-κB p65比值升高(P<0.05);与模型组比较,低、中和高剂量DEX组大鼠小肠组织中E2F1蛋白表达水平和p-NF-κB p65/NF-κB p65比值降低(P<0.05);与低剂量DEX组比较,中和高剂量DEX组大鼠小肠组织中E2F1蛋白表达水平升高(P<0.05),p-NF-κB p65/NF-κB p65比值降低(P<0.05);与中剂量DEX组比较,高剂量DEX组大鼠小肠组织中E2F1蛋白表达水平升高(P<0.05),p-NF-κB p65/NF-κB p65比值降低(P<0.05)。结论:DEX对肠源性脓毒症大鼠小肠黏膜损伤具有改善作用,并促进小肠组织中巨噬细胞向M2型极化转变,其机制可能与DEX调控E2F1/NF-κB信号通路有关。展开更多
文摘骨结核是一种严重危害人体健康的骨科感染性疾病,其病灶组织破坏的最大特点是骨质的吸收及破坏,其中破骨细胞是骨吸收的主要细胞。破骨细胞是由造血干细胞分化而来的多核细胞,通常是由核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)与核因子κB受体活化因子(receptor activator for nuclear factor-κB,RANK)调控产生。结核分枝杆菌可以通过RANKL信号通路激活破骨细胞生成转录因子,以增强破骨细胞对骨质的吸收。笔者通过综述RANKL信号通路的结构及破骨细胞的研究进展,以及它们在骨结核临床治疗中可能发挥的潜在作用,为该领域的研究提供新的思路。
文摘目的探讨丹酚酸A(Sal A)对氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)损伤的BV2细胞炎症反应和氧化应激的影响及可能机制。方法用含Na_(2)S_(2)O_(4)10 mmol·L^(-1)的无糖Earle′s平衡盐缓冲液建立BV2细胞的OGD/R损伤模型,加入Na_(2)S_(2)O_(4)无糖Earle′s平衡盐缓冲液,置培养箱(37℃,5%CO_(2))中培养1.5 h(氧糖剥夺)后换为正常培养基培养24 h(再灌注)。随后实验分为细胞对照组、OGD/R组、OGD/R+Sal A 1,5和10μmol·L^(-1)组、OGD/R+ML385组、OGD/R+ML385+Sal A 1,5和10μmol·L^(-1)组及OGD/R+依达拉奉(Eda,50μmol·L^(-1))组,继续培养24 h。(1)CCK8法测定细胞存活率。(2)ELISA检测细胞上清中白细胞介素1β(IL^(-1)β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL^(-1)0、IL-4、转化生长因子β(TGF-β)含量;化学荧光法检测细胞活性氧(ROS)含量;比色法测定细胞丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和氯霉素乙酰转移酶(CAT)活性。(3)Western印迹法检测Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)、核因子红系2相关因子(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)、前醌氧化还原酶1(NQO1)蛋白表达水平及核因子κB p65蛋白磷酸化(p-NF-κB p65)水平。结果(1)与细胞对照组相比,OGD/R组细胞存活率显著降低(P<0.01);与OGD/R组相比,OGD/R+Sal A 1,5和10μmol·L^(-1)组细胞存活率显著升高(P<0.05,P<0.01)。(2)与细胞对照组相比,OGD/R组IL^(-1)β,IL-6和TNF-α含量显著升高,IL^(-1)0,IL-4和TGF-β含量显著降低,ROS和MDA含量显著升高,SOD,CAT和GSH-Px活性显著降低(P<0.01);与OGD/R组相比,OGD/R+Sal A 1,5和10μmol·L^(-1)和OGD/R+Eda组IL-6含量显著降低,IL^(-1)0,IL-4和TGF-β含量显著增加,ROS和MDA含量显著降低,SOD,CAT和GSH-Px活性显著升高(P<0.05,P<0.01)。(3)与细胞对照组相比,OGD/R组p-NF-κB p65蛋白表达显著升高(P<0.01);与OGD/R组相比,OGD/R+Sal A 5和10μmol·L^(-1)和OGD/R+Eda组Keap1和胞浆Nrf2蛋白表达显著降低,胞核Nrf2,HO-1和NQO1蛋白表达显著升高,p-NF-κB p65蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。OGD/R+ML385组与OGD/R组相比,OGD/R+ML385+Sal A 1,5和10μmol·L^(-1)组分别与OGD/R+Sal A 1,5和10μmol·L^(-1)组相比,Keap1蛋白表达显著升高,Nrf2胞浆和胞核、HO-1和NQO1蛋白表达显著降低,p-NF-κB p65蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论Sal A减轻OGD/R损伤的BV2细胞炎症反应和氧化应激,其作用机制可能是激活Keap1/Nrf2通路和抑制NF-κB通路。
文摘目的:探讨右美托咪定(DEX)对保护肠源性脓毒症大鼠肠道功能的影响,并基于E2F转录因子1(E2F1)/核因子κB(NF-κB)信号通路初步探讨其潜在作用机制。方法:60只SD大鼠,其中50只大鼠以盲肠结扎穿孔法建立肠源性脓毒症大鼠模型,其余10只大鼠作为假手术组,假手术组大鼠仅分离盲肠远端,不结扎和穿孔。将40只造模成功的大鼠随机分为模型组、低剂量DEX组、中剂量DEX组和高剂量DEX组,每组10只。低、中和高剂量DEX组大鼠即刻腹腔注射20、40及60μg·kg-1DEX,假手术组和模型组大鼠腹腔注射等剂量生理盐水。给药24 h后检测各组大鼠肠道肌电活动情况,检测各组大鼠盲肠中大肠埃希菌、乳酸杆菌和双歧杆菌菌落数,HE染色检测各组大鼠小肠组织的病理形态表现,试剂盒检测各组大鼠小肠组织匀浆上清中分泌型免疫球蛋白A(sIgA)水平和血清中二胺氧化酶(DAO)及D-乳酸水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组大鼠小肠组织中巨噬细胞极化标志物mRNA表达水平,Western blotting法检测各组大鼠小肠组织中巨噬细胞极化标志物和E2F1、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)及NF-κB p65蛋白表达水平。结果:与假手术组比较,模型组大鼠肠道平滑肌慢波频率和振幅降低(P<0.05);与模型组比较,低剂量DEX组大鼠肠道平滑肌慢波振幅升高(P<0.05),中和高剂量DEX组大鼠肠道平滑肌慢波频率及振幅升高(P<0.05);与低剂量DEX组比较,中和高剂量DEX组大鼠肠道平滑肌慢波频率及振幅升高(P<0.05);与中剂量DEX组比较,高剂量DEX组大鼠肠道平滑肌慢波频率和振幅升高(P<0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠肠道大肠埃希菌菌落数增加(P<0.05),双歧杆菌和乳酸杆菌菌落数减少(P<0.05);与模型组比较,低剂量DEX组大鼠肠道双歧杆菌菌落数增加(P<0.05),中和高剂量DEX组大鼠肠道大肠埃希菌菌落数减少(P<0.05),双歧杆菌和乳酸杆菌菌落数增加(P<0.05);与低剂量DEX组比较,中和高剂量DEX组大鼠肠道大肠埃希菌菌落数减少(P<0.05),双歧杆菌和乳酸杆菌菌落数增加(P<0.05);与中剂量DEX组比较,高剂量DEX组大鼠肠道大肠埃希菌菌落数减少(P<0.05),双歧杆菌和乳酸杆菌菌落数增加(P<0.05)。HE染色,假手术组大鼠小肠黏膜组织结构正常且完好;模型组大鼠小肠黏膜上皮细胞坏死,绒毛受损、塌陷、排列紊乱;与模型组比较,低、中和高剂量DEX组大鼠小肠组织的病理学明显改善。与假手术组比较,模型组大鼠小肠组织匀浆上清中sIgA水平降低(P<0.05),血清中DAO和D-乳酸蛋白水平升高(P<0.05);与模型组比较,低剂量DEX组大鼠血清中DAO水平降低(P<0.05),中和高剂量DEX组大鼠小肠组织匀浆上清中sIgA水平升高(P<0.05),血清中DAO和D-乳酸蛋白水平降低(P<0.05);与低剂量DEX组比较,中和高剂量DEX组大鼠小肠组织匀浆上清中sIgA水平升高(P<0.05),血清中DAO和D-乳酸蛋白水平降低(P<0.05);与中剂量DEX组比较,高剂量DEX组大鼠小肠组织匀浆上清中sIgA水平升高(P<0.05),血清中DAO和D-乳酸蛋白水平降低(P<0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠小肠组织中CD86、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)和CD80 m RNA及蛋白表达水平升高(P<0.05),CD206、白细胞介素(IL-4)和CD163 m RNA及蛋白表达水平降低(P<0.05);与模型组比较,低剂量DEX组大鼠小肠组织中CD80 m RNA、CD86蛋白和MCP-1蛋白表达水平降低(P<0.05),IL-4 m RNA、CD163 m RNA、CD206蛋白和CD163蛋白表达水平降低(P<0.05),中和高剂量DEX组大鼠小肠组织中CD86、MCP-1和CD80 m RNA及蛋白表达水平降低(P<0.05),CD206、IL-4和CD163 m RNA及蛋白表达水平升高(P<0.05);与低剂量DEX组比较,中和高剂量DEX组大鼠小肠组织中CD86、MCP-1和CD80 m RNA及蛋白表达水平降低(P<0.05),CD206、IL-4和CD163 m RNA及蛋白表达水平升高(P<0.05);与中剂量DEX组比较,高剂量DEX组大鼠小肠组织中CD86、MCP-1和CD80 m RNA及蛋白表达水平降低(P<0.05),CD206、IL-4和CD163 m RNA及蛋白表达水平升高(P<0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠小肠组织中E2F1蛋白表达水平降低(P<0.05),p-NF-κB p65/NF-κB p65比值升高(P<0.05);与模型组比较,低、中和高剂量DEX组大鼠小肠组织中E2F1蛋白表达水平和p-NF-κB p65/NF-κB p65比值降低(P<0.05);与低剂量DEX组比较,中和高剂量DEX组大鼠小肠组织中E2F1蛋白表达水平升高(P<0.05),p-NF-κB p65/NF-κB p65比值降低(P<0.05);与中剂量DEX组比较,高剂量DEX组大鼠小肠组织中E2F1蛋白表达水平升高(P<0.05),p-NF-κB p65/NF-κB p65比值降低(P<0.05)。结论:DEX对肠源性脓毒症大鼠小肠黏膜损伤具有改善作用,并促进小肠组织中巨噬细胞向M2型极化转变,其机制可能与DEX调控E2F1/NF-κB信号通路有关。
