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靶向沉默DNMT3A对小鼠肺成纤维细胞胶原沉积、增殖及迁移活性的影响
1
作者 汪先晨 尤峻柏 +4 位作者 凌辉 范家好 陈齐 陶辉 沙纪名 《安徽医科大学学报》 北大核心 2025年第1期66-72,共7页
目的探讨靶向沉默DNA甲基化转移酶3A(DNMT3A)对小鼠肺成纤维细胞(PFs)胶原沉积、增殖与迁移活性的作用。方法为保证原代成纤维细胞的增殖迁移活性取新生C57乳鼠肺组织,剪碎后提取PFs,在显微镜下观察并鉴定形态。细胞贴壁后使用5 ng/ml T... 目的探讨靶向沉默DNA甲基化转移酶3A(DNMT3A)对小鼠肺成纤维细胞(PFs)胶原沉积、增殖与迁移活性的作用。方法为保证原代成纤维细胞的增殖迁移活性取新生C57乳鼠肺组织,剪碎后提取PFs,在显微镜下观察并鉴定形态。细胞贴壁后使用5 ng/ml TGF-β_(1)作用24 h诱导PFs细胞活化,并用小干扰RNA构建DNMT3A沉默模型;实验分为Control组、TGF-β_(1)组、TGF-β_(1)+siRNA-NC组和TGF-β_(1)+siRNA-DNMT3A组。应用Western blot方法检测DNMT3A、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)的蛋白表达变化;应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)方法检测DNMT3A、α-SMA、CollagenⅠ的mRNA表达变化;CCK-8与EdU染色检测PFs增殖能力;划痕实验与Transwell迁移实验检测PFs迁移能力。结果与Control组相比,TGF-β_(1)诱导活化的PFs细胞组中DNMT3A升高(P<0.01),纤维化与增殖相关指标α-SMA、CollagenⅠ的蛋白及mRNA水平也升高(均P<0.05),同时PFs的增殖与迁移能力升高(均P<0.0001)。而与siRNA-NC组相比,在DNMT3A沉默组中通过Western blot法检测DNMT3A(P<0.0001)及相关指标α-SMA(P<0.01)、CollagenⅠ(P<0.01)的蛋白表达水平均降低,同时通过RT-qPCR法检测DNMT3A、α-SMA及CollagenⅠ的mRNA水平也均降低(P<0.001),并且PFs细胞的增殖(P<0.01)和迁移能力(P<0.05)较对照组下降。结论沉默DNMT3A能够抑制胶原的沉积及PFs的增殖,DNMT3A可以促进PFs的增殖和迁移能力,进而促进PFs的活化以及肺纤维化的发展,这一过程可能受到DNA甲基化修饰的调控。 展开更多
关键词 DNMT3A DNA甲基化 肺成纤维细胞 增殖 迁移 肺纤维化
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基于Notch与Wnt/β-catenin通路探讨黄芪甲苷对人成纤维细胞间质转化的作用 被引量：3
2
作者 龚晓红 李桓 +3 位作者 陆超群 武上雯 邢清桦 李松伟 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2024年第4期60-68,I0019,共10页
目的基于Notch与Wnt/β-catenin通路,探讨黄芪甲苷(astragalosideⅣ,AS-Ⅳ)对类风湿关节炎相关间质性肺病(rheumatoid arthritis associated interstitial lung disease,RA-ILD)体外模型的作用机制。方法用Luminex检测法对RA-ILD模型鼠... 目的基于Notch与Wnt/β-catenin通路,探讨黄芪甲苷(astragalosideⅣ,AS-Ⅳ)对类风湿关节炎相关间质性肺病(rheumatoid arthritis associated interstitial lung disease,RA-ILD)体外模型的作用机制。方法用Luminex检测法对RA-ILD模型鼠支气管肺泡灌洗液中细胞因子进行检测,筛选出关键细胞因子;共培养人髓系白血病单核细胞(human myeloid leukemia mononuclear cells,THP-1)与正常人肺成纤维细胞(normal human lung fibroblast,NHLF)两种细胞系,加入关键细胞因子模拟RA-ILD体外模型,给予不同干预措施。通过RT-PCR、Western blot、COIP、EdU、ELISA以及双荧光素酶报告基因活性检测方法观察Snail、ZEB-1及E-Cadherin的启动子活性及mRNA表达、Notch通路中的关键蛋白表达、β-catenin的核转位水平、NHLF细胞增殖速率、ColⅠ、ColⅢ及Fibronectin的分泌水平以及β-catenin与NICD、β-catenin与LEF、NICD与CSL的相互作用。结果使用细胞因子处理NHLF细胞后,Snail、ZEB-1的启动子活性及mRNA表达明显增高,Notch通路中的关键蛋白表达水平显著上调,β-catenin的核转位明显增加,EdU阳性细胞明显增加;细胞上清中ColⅠ、ColⅢ及Fibronectin分泌水平显著上调,同时β-catenin与NICD、β-catenin与LEF、NICD与CSL的蛋白结合明显增加;使用Notch抑制剂DAPT和Jagged1 shRNA时结果与上述结论相反;AS-Ⅳ能够通过抑制Jagged1进而下调Notch及β-catenin信号通路的过度活化,抑制β-catenin与NICD、β-catenin与LEF、NICD与CSL的蛋白结合,能够剂量依赖性地抑制Snail及ZEB-1并上调E-Cadherin的启动子活性、mRNA和蛋白表达水平,抑制NHLF细胞的过度增殖及Col I、ColⅢ、Fibronectin的分泌。结论AS-Ⅳ可能通过抑制Notch和Wnt/β-catenin信号通路,抑制NHLF细胞增殖,减少ECM过度沉积,从而减缓RA-ILD肺间质纤维化进展。 展开更多
关键词 类风湿关节炎 间质性肺病 成纤维细胞 黄芪甲苷 NOTCH信号通路 Wnt/β-catenin信号通路
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去甲肾上腺素通过肿瘤相关成纤维细胞促进肺癌A549细胞增殖迁移 被引量：1
3
作者 陈曦 汤涛 +1 位作者 俞鹏翼 王辉 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期2093-2098,共6页
目的研究去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)在调控肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)促进肺癌细胞增殖迁移中的作用。方法培养原代CAFs和肺癌A549细胞,RT-PCR和蛋白质印迹检测NE干预后肿瘤相关成纤维细胞VEGF、IL-... 目的研究去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)在调控肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)促进肺癌细胞增殖迁移中的作用。方法培养原代CAFs和肺癌A549细胞,RT-PCR和蛋白质印迹检测NE干预后肿瘤相关成纤维细胞VEGF、IL-6和IL-8表达,并检测NE对共培养的CAFs和肺癌A549细胞中E-cadherin和Vimentin表达的影响,细胞划痕实验验证NE促进肺癌A549细胞的迁移能力。结果NE可诱导CAFs VEGF、IL-8和IL-6的高表达,并呈浓度依赖性。β肾上腺素受体抑制剂普萘诺尔PROP可抑制CAFs表达VEGF、IL-8和IL-6;NE可抑制与CAFs共培养的肺癌A549细胞E-cadherin表达,并促进Vimentin上调,增强A549细胞的迁移能力。结论NE通过CAFs协同促进肺癌A549细胞增殖迁移能力。 展开更多
关键词 肺癌 肿瘤相关成纤维细胞 去甲肾上腺素 增殖 迁移 肿瘤微环境
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Erastin通过MAPK介导的氧化应激信号通路诱导肺成纤维细胞铁死亡 被引量：1
4
作者 王沂然 张诗捷 +3 位作者 关予博 李渺渺 蔡汝忆 武琦 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第5期820-825,共6页
目的探究Erastin对肺成纤维细胞铁死亡的作用机制。方法向小鼠肺成纤维细胞(C57/B6-L)中加入不同浓度的铁死亡诱导剂Erastin,通过细胞计数试剂(CCK-8)检测细胞活性、荧光显微镜观察氧化应激水平,蛋白质印迹法(Western blot)检测丝裂原... 目的探究Erastin对肺成纤维细胞铁死亡的作用机制。方法向小鼠肺成纤维细胞(C57/B6-L)中加入不同浓度的铁死亡诱导剂Erastin,通过细胞计数试剂(CCK-8)检测细胞活性、荧光显微镜观察氧化应激水平,蛋白质印迹法(Western blot)检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关蛋白表达,之后分别加入p38和人细胞外信号调节激酶(ERK)的抑制剂SB203580和U0126,进一步验证Erastin诱导肺成纤维细胞铁死亡的作用机制。结果Erastin在100μmol/L药物浓度时,能够明显诱导肺成纤维细胞铁死亡,同时伴有氧化应激表达增强,此外MAPK通路中的p38和ERK蛋白磷酸化水平升高(P<0.05)。而在加入SB203580、U0126抑制剂后,肺成纤维细胞氧化应激水平明显下降,同时细胞的活性明显升高(P<0.05)。结论Erastin能够诱导肺成纤维细胞铁死亡,其作用机制可能与MAPK信号通路介导的氧化应激有关。 展开更多
关键词 肺纤维化 肺成纤维细胞 铁死亡 活性氧 MAPK信号通路
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普列克底物蛋白2/miR-196a信号轴介导肿瘤微环境中肺癌细胞的通讯机制研究
5
作者 王蔓莉 陈辉 +2 位作者 段智 许奇美 李贞 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期628-638,共11页
背景与目的:阐明介导肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)与肿瘤细胞之间通讯的信号分子仍然是一个巨大的挑战,这些信号分子对癌症转移至关重要。本研究旨在探讨普列克底物蛋白2(pleckstrin-2,PLEK2)/miR-196a信号... 背景与目的:阐明介导肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)与肿瘤细胞之间通讯的信号分子仍然是一个巨大的挑战,这些信号分子对癌症转移至关重要。本研究旨在探讨普列克底物蛋白2(pleckstrin-2,PLEK2)/miR-196a信号轴介导肿瘤微环境中肺癌细胞的通讯机制。方法:选择人肺腺癌细胞系H1299和人胚胎肺细胞MRC-5作为研究对象。用表达PLEK2的慢病毒(PLEK2)和载体对照(Vector)转染H1299细胞,并在转染24 h后分离外泌体(Vector_exo、PLEK2_exo)。采用miR-196a模拟物或抑制剂转染MRC-5细胞。通过蛋白质印迹法(Western blot)分析PLEK2和上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白水平,采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)分析miR-196a表达,采用transwell实验测定细胞转移和侵袭能力。将6只雌性BALB/c-nu小鼠随机分为Vector组和PLEK2组,每组3只。通过尾静脉向各组小鼠注射转染Vector或PLEK2的H1299细胞。4周后,取出肺组织进行H-E染色和免疫组织化学染色分析α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)表达。所有动物实验均经长沙市第一医院(中南大学湘雅医学院附属长沙医院)伦理委员会批准(伦理编号为EI-2021-103)。结果:与Vector组相比,PLEK2组小鼠肺结节数和转移灶中α-SMA表达显著增加(P<0.001)。与Vector组相比,PLEK2组H1229细胞中miR-196a表达水平显著增加(P<0.05),并且PLEK2_exo中miR-196a表达水平显著高于Vector_exo(P<0.05)。与Vector_exo组相比,PLEK2_exo组MRC-5细胞中miR-196a、α-SMA和成纤维细胞活化蛋白(fibroblast activation protein,FAP)表达水平显著增加(P<0.05)。与阴性对照(negative control,NC)相比,miR-196a转染的MRC-5细胞中α-SMA和FAP表达水平显著增加(P<0.05)。相反,通过miR-196a抑制剂(si-miR-196a#1、si-miR-196a#)转染,α-SMA和FAP表达水平被显著抑制(P<0.05)。与NC-CM组相比,miR-196a-CM组H1299细胞的转移、侵袭细胞数和波形蛋白(vimentin)表达均显著增加(P<0.001),E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达显著降低(P<0.001)。此外,与Vector_exo-CM组相比,PLEK2_exo-CM组H1299细胞的转移、侵袭细胞数和vimentin表达均显著增加(P<0.01),E-cadherin表达显著降低(P<0.001)。结论:PLEK2上调能够增强肺癌细胞来源的外泌体miR-196a水平,从而促进CAFs激活。激活的CAFs能够进一步增强肺癌细胞的侵袭能力。 展开更多
关键词 普列克底物蛋白2 肿瘤微环境 肺癌细胞 肿瘤相关成纤维细胞
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枇杷叶三萜酸对TGF-β_1刺激的人胚肺成纤维细胞转分化及ERK通路的影响 被引量：11
6
作者 杨雅茹 黄艳 +5 位作者 李俊 吕雄文 金涌 熊自忠 张磊 刘红 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期341-346,共6页
目的研究枇杷叶三萜酸(Triterpene acids of loquat,TAL)对转化生长因子β1(TGF-β1)刺激人胚肺成纤维细胞转分化、胶原合成及ERK通路的影响。方法体外培养人胚肺成纤维细胞(HFL-Ⅰ),MTT比色法测定TAL对HFL-Ⅰ细胞的增殖抑制率。RT-PCR... 目的研究枇杷叶三萜酸(Triterpene acids of loquat,TAL)对转化生长因子β1(TGF-β1)刺激人胚肺成纤维细胞转分化、胶原合成及ERK通路的影响。方法体外培养人胚肺成纤维细胞(HFL-Ⅰ),MTT比色法测定TAL对HFL-Ⅰ细胞的增殖抑制率。RT-PCR检测每组中结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)、平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原(CⅠ)、Ⅲ型胶原(CⅢ)mRNA的水平,Western blot检测各组细胞中p-ERK1/2和ERK1/2表达水平。结果 TAL呈剂量和时间依赖性抑制HFL-Ⅰ细胞的增殖(P<0.05),并能够降低CⅠ、CⅢ、α-SMA、CTGF的过度表达(P<0.05);Western blot结果显示TAL能降低TGF-β1刺激组p-ERK1/2的表达,而对ERK1/2的表达没有差异。结论 TAL能抑制HFL-Ⅰ的增殖,同时也能使活化后HFL-Ⅰ中的α-SMA生成减少,CTGF、胶原和p-ERK1/2表达降低。 展开更多
关键词 枇杷叶三萜酸 TGF-β1 肺纤维化 人胚肺成纤维细胞 ERK CTGF
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氟伐他汀对大鼠肺成纤维细胞增殖的抑制作用 被引量：11
7
作者 赵峰 戚好文 叶江枫 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期185-188,共4页
目的 :观察氟伐他汀 (fluvastatin,Flu)对体外培养的大鼠肺成纤维细胞 (fibroblast,Fb)增殖的抑制作用。方法 :在体外培养的大鼠肺 Fb中 ,加入 Flu,用计数法和 MTT比色法观察并比较不同浓度的 Flu对培养细胞增殖的抑制作用、对大鼠肺 F... 目的 :观察氟伐他汀 (fluvastatin,Flu)对体外培养的大鼠肺成纤维细胞 (fibroblast,Fb)增殖的抑制作用。方法 :在体外培养的大鼠肺 Fb中 ,加入 Flu,用计数法和 MTT比色法观察并比较不同浓度的 Flu对培养细胞增殖的抑制作用、对大鼠肺 Fb分裂指数及分泌胶原的影响。 结果 :计数法和 MTT比色法均显示 ,Flu对体外培养的大鼠肺 Fb的增殖具有明显的抑制作用 (P<0 .0 1 ) ,并呈剂量依赖效应 ,1 0 - 4mol/ L 的 Flu已可使培养细胞的增殖受到完全抑制。培养的大鼠肺 Fb细胞分裂指数及胶原分泌量在 Flu的作用下也有明显降低 (P<0 .0 1 )。结论 :Flu对体外培养的大鼠肺 Fb的增殖及其胶原分泌具有明显的抑制作用 。 展开更多
关键词 氟伐他汀 大鼠 成纤维细胞 抑制作用 细胞增殖 肺间质纤维化
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氢气水通过升高Nrf2的表达减轻百草枯诱导的肺纤维化 被引量：8
8
作者 李婷 邓树豪 +4 位作者 雷雯 李振坤 吴文娟 张涛 董昭兴 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期233-239,共7页
目的探讨氢气水依赖Nrf2对百草枯诱导的肺成纤维细胞增殖,转化及胶原分泌的影响。方法人肺成纤维细胞(HFL-1)体外培养,采用RNA干扰技术沉默HLC-1细胞中Nrf2的表达,设置对照组、百草枯(PQ)染毒组、PQ+氢气水治疗组、PQ+氢气水+Nrf2siRNA... 目的探讨氢气水依赖Nrf2对百草枯诱导的肺成纤维细胞增殖,转化及胶原分泌的影响。方法人肺成纤维细胞(HFL-1)体外培养,采用RNA干扰技术沉默HLC-1细胞中Nrf2的表达,设置对照组、百草枯(PQ)染毒组、PQ+氢气水治疗组、PQ+氢气水+Nrf2siRNA综合干预组。设置对照组:人肺成纤维细胞(HFL1)正常培养;染毒组:HFL1+600μmol/L PQ 24 h;氢气水治疗组:HFL1+600μmol/L PQ24 h后+氢气水;综合干预治疗组:HFL1转染siRNA+600μmol/LPQ 24 h后+氢气水。MTT法检测细胞的增殖,Western blot、qt-PCR、免疫荧光检测各组肺成纤维细胞Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、α-SMA、Nrf2的表达,同时ELISA检测抗氧化物SOD、CAT、GSH的含量。结果氢气水治疗组较PQ染毒组Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、α-SMA的表达明显降低,干扰Nrf2基因表达后,氢气水疗效较治疗组显著下降(P<0.05)。氢气水治疗组Nrf2表达量较PQ染毒组增加(P<0.05)。结论氢气水可能通过诱导Nrf2的表达促进肺成纤维细胞的增殖和抗氧化物的生成,同时抑制其转化和分泌功能。 展开更多
关键词 肺成纤维细胞 百草枯 氢气水 核转录相关因子2
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弹力蛋白酶和基质金属蛋白酶在肺组织破坏中协同作用的实验研究 被引量：7
9
作者 朱运奎 金远林 +3 位作者 肖永久 汤育瑛 汪莉 李继东 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期784-787,共4页
目的:采用肺成纤维细胞三维立体培养技术,直接观察弹力蛋白酶和基质金属蛋白酶对肺的主要成分之一胶原组织的降解作用。方法:用明胶酶谱法和Westernblotting法测定MMP - 1、2、3、9和TIMP - 1和2 (金属蛋白酶抑制因子) ,同时测定胶原含... 目的:采用肺成纤维细胞三维立体培养技术,直接观察弹力蛋白酶和基质金属蛋白酶对肺的主要成分之一胶原组织的降解作用。方法:用明胶酶谱法和Westernblotting法测定MMP - 1、2、3、9和TIMP - 1和2 (金属蛋白酶抑制因子) ,同时测定胶原含量。结果:TNF -α和IL - 1β诱导培养在立体胶原内的肺成纤维细胞产生MMP- 1、3和9,但是只引起少量胶原降解(2. 8%±1 .5 % ,P >0 .0 5 ) ,同时加入中性粒细胞弹力蛋白酶(NE) ,结果导致胶原完全降解(P <0 . 0 1)。NE使MMP - 1、2、3和9由非活化的形式转化为较小分子量的活化分子,同时,清除TIMP- 1和2。胶原降解后基质发生强烈收缩。结论:基质金属蛋白酶可直接降解肺内胶原和其它间质组织,导致肺组织破坏,中性粒细胞弹力蛋白酶通过活化基质金属蛋白酶引起或加速细胞外基质的破坏。基质金属蛋白酶与弹力蛋白酶的协同作用可能是肺气肿等肺组织破坏的机理。 展开更多
关键词 白细胞弹力蛋白酶 基质金属蛋白酶 肺 成纤维细胞 胶原
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纳米氧化锌对人胚肺成纤维细胞的生物毒性 被引量：9
10
作者 袁金华 李光 +2 位作者 陈慧珍 查河霞 宋黎军 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期170-173,178,共5页
【目的】研究化妆品添加剂-氧化锌纳米粒子对正常人胚肺成纤维细胞(HELF)的生物毒性。【方法】采用MTT法检测氧化锌纳米粒子对体细胞存活率的影响;利用光学显微镜评价细胞的形态学变化;电子显微镜观察细胞与纳米氧化锌作用前后表面微结... 【目的】研究化妆品添加剂-氧化锌纳米粒子对正常人胚肺成纤维细胞(HELF)的生物毒性。【方法】采用MTT法检测氧化锌纳米粒子对体细胞存活率的影响;利用光学显微镜评价细胞的形态学变化;电子显微镜观察细胞与纳米氧化锌作用前后表面微结构的变化。【结果】在测试的2.5～150mg·L-1浓度范围内,氧化锌纳米粒子对HELF细胞均有抑制作用,细胞毒性呈明显的剂量依赖效应关系。浓度在20mg·L-1以上时,氧化锌纳米粒子可致使细胞生存率低于10%。荧光显微镜可见典型的细胞凋亡改变。扫描电子显微镜观察到HELF细胞表面与高浓度纳米粒子作用后产生的纳米级孔。【结论】纳米氧化锌粒子由于小尺寸效应和Zn2+自身毒性的协同作用,高浓度时抑制细胞结活性,致使细胞死亡。在化妆品中添加氧化锌纳米粒子作为紫外屏蔽剂时,建议控制浓度为20mg·L-1以下。旨在对化妆品生产企业在功效添加方面起到警示作用,也为卫生监督提供理论依据。 展开更多
关键词 肺 成纤维细胞细胞 氧化锌纳米粒子 生物毒性 化妆品添加剂
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黄芪多糖对过氧化氢诱导的MRC-5细胞氧化损伤的保护作用 被引量：11
11
作者 陈珏晓 王桂芬 +1 位作者 李丽 张鹏霞 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1062-1066,共5页
目的研究黄芪多糖(APS)在过氧化氢(H2O2)诱导的MRC-5人胚肺成纤维细胞氧化损伤细胞模型中,对无嘌呤/无嘧啶核酸内切酶/氧化还原因子1(APE/Ref-1)和硫氧还蛋白(TRX)水平的影响,分析APS在氧化损伤过程中对MRC-5细胞的保护机制。方法将培养... 目的研究黄芪多糖(APS)在过氧化氢(H2O2)诱导的MRC-5人胚肺成纤维细胞氧化损伤细胞模型中,对无嘌呤/无嘧啶核酸内切酶/氧化还原因子1(APE/Ref-1)和硫氧还蛋白(TRX)水平的影响,分析APS在氧化损伤过程中对MRC-5细胞的保护机制。方法将培养的MRC-5细胞随机分组:空白对照组、不同浓度H2O2组、(200、400、800)mg/L APS处理组。通过H2O2作用于MRC-5细胞建立细胞氧化损伤模型,使用MTT法检测H2O2对MRC-5细胞的增殖抑制率,待H2O2作用的MRC-5细胞氧化损伤模型建立后,用最佳H2O2浓度与不同浓度的APS共同作用于MRC-5细胞,确定APS对氧化损伤MRC-5细胞的最佳作用浓度;采用免疫荧光检测8-羟脱氧鸟苷(8-OHd G)含量反映MRC-5细胞DNA氧化损伤情况;应用流式细胞术检测MRC-5细胞的凋亡;采用反转录PCR分析TRX和APE/Ref-1 mRNA的水平;Western blot法检测TRX和APE/Ref-1蛋白水平的变化。结果实验表明,H2O2孵育MRC-5细胞24 h,可诱导细胞损伤,使细胞存活力下降,且具有浓度依赖性。800μmol/L H2O2浓度时建立细胞氧化损伤模型。与H2O2引起氧化损伤的模型组相比,200 mg/L的APS明显抑制H2O2引起的APE/Ref-1、TRX蛋白表达下调,降低8-OHd G含量,抑制MRC-5细胞凋亡,细胞存活率明显升高。结论 H2O2引起MRC-5细胞氧化损伤,APS促进氧化损伤的MRC-5细胞APE/Ref-1和TRX的表达,APS减轻MRC-5细胞的氧化损伤并抑制其凋亡。 展开更多
关键词 黄芪多糖 人胚肺成纤维细胞 无嘌呤/无嘧啶核酸内切酶/氧化还原因子1 硫氧还蛋白
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高氧、维甲酸对胎鼠肺成纤维细胞c-Jun、c-Fos表达的影响 被引量：7
12
作者 李文斌 常立文 +1 位作者 祝华平 容志惠 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期216-219,共4页
目的　探讨维甲酸对高氧暴露下胎鼠肺成纤维细胞 c- Jun、c- Fos表达的影响。方法　取第 2代胎鼠肺成纤维细胞作体外培养 ,待生长至接近融合状态时 ,随机分为 :空气组 ,空气 +维甲酸组 ,高氧组 ,高氧 +维甲酸组。于培养30 m in和 1、 2... 目的　探讨维甲酸对高氧暴露下胎鼠肺成纤维细胞 c- Jun、c- Fos表达的影响。方法　取第 2代胎鼠肺成纤维细胞作体外培养 ,待生长至接近融合状态时 ,随机分为 :空气组 ,空气 +维甲酸组 ,高氧组 ,高氧 +维甲酸组。于培养30 m in和 1、 2、 6、 12、 2 4、 4 8、 72 h时 ,行细胞固定后 ,应用免疫组化方法检测 c- Jun、c- Fos表达强度并结合计算机图像处理系统进行分析。结果　与空气组相比 ,高氧 1h时 c- Jun表达明显增强 (P<0 .0 1) ,6～ 12 h时达高峰 ,以后开始下降 ,但仍高于正常水平 (P<0 .0 1) ;c- Fos的表达在高氧 30 m in即增强 (P<0 .0 1) ,2～ 6 h达高峰 ,以后开始下降 ,2 4 h后恢复到正常水平。维甲酸能明显下调高氧所诱导的 c- Jun、c- Fos高表达 ,但并不能完全阻止 c- Jun、c- Fos的过度表达。结论　 c- Jun、c- Fos可能参与了高氧暴露下胎鼠肺成纤维细胞的信号转导过程 ;维甲酸可部分抑制由高氧所诱导的 c- Jun、 c- 展开更多
关键词 肺成纤维细胞 胎鼠 氧应激反应 高氧 维甲酸 C-JUN蛋白 C-FOS蛋白
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二色桌片参酶解液对转化细胞的效应 被引量：6
13
作者 陈正明 陈玉强 +2 位作者 曹顺达 吴乔 苏文金 《台湾海峡》 CAS CSCD 1997年第3期270-274,T001,共6页
用二色桌片参（Mensamariaintercedens）酶解液处理转化的人胚肺成纤维细胞（NLF）后，细胞生长受到显著抑制，抑制率达64．84％，光镜下细胞透光性加强，铺展较好，细胞核形更为规则，核畸形现象减少；线粒体结构趋于正常；软琼脂集落... 用二色桌片参（Mensamariaintercedens）酶解液处理转化的人胚肺成纤维细胞（NLF）后，细胞生长受到显著抑制，抑制率达64．84％，光镜下细胞透光性加强，铺展较好，细胞核形更为规则，核畸形现象减少；线粒体结构趋于正常；软琼脂集落实验表明，细胞集落形成率由23ｘ10－5下降至12．5ｘ10－5，裸小鼠致瘤实验显示抑瘤率为82．39％，差异显著（p＜5％）。结果提示，二色桌片参酶解液可能逆转转化的HLF细胞的恶性表型，对其有一定的诱导分化作用。 展开更多
关键词 二色桌片参 转化细胞 抗癌效应 酶解液 海参
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γ射线对C57BL/6J和C3H/HeN小鼠肺成纤维细胞生物学行为影响的比较研究 被引量：4
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作者 刘英 李杨 +4 位作者 彭瑞云 王水明 高亚兵 马俊杰 宋良文 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期295-298,共4页
目的比较C57BL/6J和C3H/HeN两种小鼠肺成纤维细胞以不同剂量的60Coγ射线照射后生物学行为的异同。方法原代分离培养C57BL/6J和C3H/HeN两种小鼠肺成纤维细胞(LF),应用2、4、6和8Gy的60Coγ射线照射后,通过MTT比色法、流式细胞术、AgNOR... 目的比较C57BL/6J和C3H/HeN两种小鼠肺成纤维细胞以不同剂量的60Coγ射线照射后生物学行为的异同。方法原代分离培养C57BL/6J和C3H/HeN两种小鼠肺成纤维细胞(LF),应用2、4、6和8Gy的60Coγ射线照射后,通过MTT比色法、流式细胞术、AgNOR染色和免疫荧光细胞化学染色法,检测照射后两种LF的增殖活力、细胞周期以及a-平滑肌肌动蛋白(a-SMA)、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)表达的变化。结果以2~8Gy照射后,C57BL/6J和C3H/HeN小鼠的LF增殖活力与正常对照组相比较未见明显增强。照射后,C57BL/6J小鼠的LF非整倍体增多,a-SMA高表达,MMP-1的表达呈弱阳性,TIMP-1的表达呈增强趋势。照射后,C3H/HeN小鼠的LF出现G2-M期阻滞,a-SMA的表达减弱至消失,MMP-1和TIMP-1的表达均呈增强趋势。结论以60Coγ射线照射后,C57BL/6J和C3H/HeN两种小鼠的LF生物学行为不同,C57BL/6J小鼠的LF呈“活化”状态,为该种小鼠易发生肺纤维化的细胞学基础提供了实验依据。 展开更多
关键词 肺成纤维细胞 细胞周期 A-SMA MMP-1 TIMP-1
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TGFβ1对照射的人肺成纤维细胞细胞周期的影响及其信号转导机制 被引量：4
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作者 李杨 王德文 +4 位作者 宋良文 彭瑞云 崔雪梅 高亚兵 谷庆阳 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期286-289,共4页
目的 :检测转化生长因子β1(TGFβ1)对正常及γ射线照射的人肺成纤维细胞 (HLF)的增殖活力及细胞周期的影响 ,并初步探讨其信号转导机制。方法 :培养HLF ,经 3Gyγ射线照射后 ,应用 0 .0 1、0 .1、1和 10 μg/L的TGFβ1处理。采用MTT比... 目的 :检测转化生长因子β1(TGFβ1)对正常及γ射线照射的人肺成纤维细胞 (HLF)的增殖活力及细胞周期的影响 ,并初步探讨其信号转导机制。方法 :培养HLF ,经 3Gyγ射线照射后 ,应用 0 .0 1、0 .1、1和 10 μg/L的TGFβ1处理。采用MTT比色法、DNA倍体分析、免疫酶 /荧光细胞化学及流式细胞仪蛋白质分析等方法 ,检测细胞增殖活力、细胞周期的变化 ,以及信号蛋白Smad3和Smad4表达的变化。结果 :γ射线照射的HLF经 10 μg/L的TGFβ1处理后 ,其增殖活力增强 ,处于S期的细胞增多 ,信号蛋白Smad4发生核转位 ,同时信号蛋白Smad3表达增加。结论 :一定剂量的TGFβ1可通过调控γ射线照射的HLF的细胞周期促进其增殖 。 展开更多
关键词 转化生长因子-Β 人肺成纤维细胞 细胞周期 smad3/4 信号转导
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激活蛋白-1调控转化生长因子β_1诱导的人肺成纤维细胞Ⅰ型胶原分泌 被引量：4
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作者 胡永斌 曾庆富 +2 位作者 冯德云 李翔 彭劲武 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期776-781,共6页
目的:探讨核转录因子激活蛋白-1(activator protein-1,AP-1)在转化生长因子β1(transfor-ming growth factor-β1,TGF-β1)诱导人肺成纤维细胞Ⅰ型胶原分泌中的作用。方法:以人肺成纤维细胞HLF-02细胞系为研究对象,给予10μg/L的TGF-β... 目的:探讨核转录因子激活蛋白-1(activator protein-1,AP-1)在转化生长因子β1(transfor-ming growth factor-β1,TGF-β1)诱导人肺成纤维细胞Ⅰ型胶原分泌中的作用。方法:以人肺成纤维细胞HLF-02细胞系为研究对象,给予10μg/L的TGF-β1刺激,于不同时间点收集细胞,采用RT-PCR和Wester blot检测细胞Ⅰ型胶原转录和分泌;阻断实验中选用AP-1抑制剂姜黄素为阻断剂,凝胶阻滞实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检测细胞内AP-1的DNA结合活性变化,同时Western印迹检测Ⅰ型胶原分泌变化。结果:TGF-β1能诱导HLF-02细胞Ⅰ型胶原mRNA的转录和分泌(P<0.05);TGF-β1能提高HLF-02细胞AP-1的DNA结合活力(P<0.05);姜黄素能明显抑制TGF-β1诱导的HLF-02细胞AP-1的DNA结合活力,抑制率分别为17.1%,17.6%,24.2%,31.3%(P<0.05);同时,姜黄素能明显抑制TGF-β1诱导的HLF-02细胞Ⅰ型胶原的分泌,抑制率分别为62.1%,58.8%,62.1%,59.6%(P<0.05)。结论:核转录因子AP-1参与TGF-β1刺激的HLF-02细胞Ⅰ型胶原的分泌调控。 展开更多
关键词 转化生长因子β1 肺成纤维细胞 I型胶原 激活蛋白
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IL-22在支气管哮喘患者血清中的表达及其受体IL-22R1在人气道细胞中的表达 被引量：5
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作者 张旃 罗雅玲 +6 位作者 周丽丽 赖文岩 徐建 黎振兴 任敦强 叶涵 钟浩海 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1291-1295,共5页
目的检测IL-22在支气管哮喘患者血清中的表达,检测IL-22R1在人气道上皮细胞、气道平滑肌细胞、肺成纤维细胞中的表达,寻找IL-22作用的靶细胞。方法应用ELISA法检测36例支气管哮喘患者及20例正常对照者血清IL-22及IL-17的表达,同时检测3... 目的检测IL-22在支气管哮喘患者血清中的表达,检测IL-22R1在人气道上皮细胞、气道平滑肌细胞、肺成纤维细胞中的表达,寻找IL-22作用的靶细胞。方法应用ELISA法检测36例支气管哮喘患者及20例正常对照者血清IL-22及IL-17的表达,同时检测36例患者肺通气功能,根据1秒率(FEV1/FVC)及FEV1占预计值的百分比将支气管哮喘患者分为支气管激发试验阳性组(17例)和支气管舒张试验阳性组(19例)。应用实时定量PCR检测人气道平滑肌细胞、人肺成纤维细胞、人气道上皮细胞IL-22R1 mRNA的表达,用免疫荧光以及蛋白质印迹法检测IL-22R1蛋白在上述3种细胞中的表达。结果支气管哮喘患者血清IL-22及IL-17水平与正常对照组相比差异无统计学意义,但支气管舒张试验阳性组患者血清IL-22和IL-17水平高于支气管激发试验阳性组(P<0.05)。IL-22R1mRNA及蛋白在上述3种细胞均有表达。结论 IL-22可能涉及支气管哮喘的发生发展过程,气道平滑肌细胞、肺成纤维细胞、人气道上皮细胞可能均是IL-22发挥作用的靶细胞。 展开更多
关键词 IL-22 IL-22R1 气道上皮细胞 气道平滑肌细胞 肺成纤维细胞
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瘦素促进肺成纤维细胞向肌纤维母细胞的转分化 被引量：3
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作者 陈碧 吕茜 +3 位作者 张淼 张毛为 刘文静 朱述阳 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期199-202,共4页
目的探讨瘦素对肺成纤维细胞向肌纤维母细胞转分化的影响及其作用机制。方法体外培养HFL-1人胚肺成纤维细胞，用（0—200）ng／mL重组人瘦素（rHL）干预或联合转化生长因子β1（TGF-β1）处理HFL-1细胞，Western blot法测定α平滑肌肌... 目的探讨瘦素对肺成纤维细胞向肌纤维母细胞转分化的影响及其作用机制。方法体外培养HFL-1人胚肺成纤维细胞，用（0—200）ng／mL重组人瘦素（rHL）干预或联合转化生长因子β1（TGF-β1）处理HFL-1细胞，Western blot法测定α平滑肌肌动蛋白（OL．SMA）、蛋白激酶B（AKT）、磷酸化的AKT（p-AKT）的表达。CCK-8法测定细胞增殖，ELISA测定细胞上清液1型胶原蛋白含量。结果（50、100、200）ng／mL的rHL处理HFL-1细胞48h，α-SMA的蛋白表达水平均较对照组明显上调；与200ng／mL rHL或5ng／mLTGF—β1单独处理的细胞相比，200ng／mL rHL和5ng／mLTGF-β1联合处理HFL-1细胞48h，HFL-1细胞α-SMA蛋白表达水平显著上调。rHL能够上调HFL-1细胞P-AKT的表达，LY294002可抑制rHL对HFL-1细胞α-SMA表达的诱导作用。与对照组相比，（12．5、25、50、100、200）ng／mL作用72h，细胞存活率无显著性差异。（50—200）ng／mLrHL作用48h，细胞上清液中1型胶原蛋白含量明显升高。结论瘦素能够促进肺成纤维细胞向肌纤维母细胞转分化，其作用机制与激活P13K／AKT信号通路有关。 展开更多
关键词 瘦素 肺成纤维细胞 肌纤维母细胞 转分化
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红景天素抗老化作用的实验研究 被引量：27
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作者 王淑兰 王宜 +3 位作者 李淑连 何为惠 吴胜东 马兴元 《白求恩医科大学学报》 CSCD 1991年第6期542-544,共3页
本实验以体内、外相结合的研究方法,探讨了药用植物红景天提取物—红景天素对体外培养人胚肺二倍体成纤维细胞(2BS)和大鼠肝脏的影响,观察了红景天素对2BS细胞生长和增殖的影响,以及对大鼠肝脏细胞形态和组化改变和肝组织中过氧化脂质(L... 本实验以体内、外相结合的研究方法,探讨了药用植物红景天提取物—红景天素对体外培养人胚肺二倍体成纤维细胞(2BS)和大鼠肝脏的影响,观察了红景天素对2BS细胞生长和增殖的影响,以及对大鼠肝脏细胞形态和组化改变和肝组织中过氧化脂质(LPO)与肝血清超氧化物歧化酶(SOD)的变化。实验结果是红景天素能促进2BS细胞生长和增殖,降低大鼠肝组织LPO及肝细胞内脂褐素含量及酸性磷酸酶活性(ACPase)。结果证明红景天素有延缓细胞老化抗退变作用。 展开更多
关键词 红景天素 大鼠 肝 抗老化
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槲皮素对矽肺纤维化细胞外基质的保护作用 被引量：4
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作者 彭海兵 吴爱萍 +2 位作者 刘燕 田家莉 王建行 《医药导报》 CAS 北大核心 2013年第6期695-698,共4页
目的观察槲皮素对二氧化硅(SiO2)活化的矽肺患者肺泡巨噬细胞(AM)介导的人胚肺成纤维细胞(HELF)外基质金属蛋白酶(MMP)表达的保护作用。方法收集矽肺患者支气管肺泡灌洗液中AM,进行SiO2体外染尘,取其上清液。将HELF分为空白对照组,对照... 目的观察槲皮素对二氧化硅(SiO2)活化的矽肺患者肺泡巨噬细胞(AM)介导的人胚肺成纤维细胞(HELF)外基质金属蛋白酶(MMP)表达的保护作用。方法收集矽肺患者支气管肺泡灌洗液中AM,进行SiO2体外染尘,取其上清液。将HELF分为空白对照组,对照组,处理组,槲皮素10,20,40μmol·L-1组,各组分别于6,12,18,24,36,48 h取出细胞爬片。应用免疫细胞化学法检测HELF中MMP-1和TIMP-1的表达。结果加入不同浓度的槲皮素后,MMP-1表达增加,与同期处理组相比,均差异有统计学意义(P<0.05),与同期对照组相比,20和40μmol·L-1槲皮素组差异有统计学意义(P<0.05)。不同浓度的槲皮素组随着培养时间的增加TIMP-1表达增加,但是与同期处理组相比减少,均差异有统计学意义(P<0.05)。结论槲皮素对矽肺纤维化细胞外基质金属蛋白酶有一定的保护作用。 展开更多
关键词 槲皮素 二氧化硅 基质金属蛋白酶 肺纤维化 人胚肺成纤维细胞
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