期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到283篇文章
< 1 2 … 15 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
高内涵分析及Western blotting法在蛋白质核质分布研究中的应用及比较研究 被引量：4
1
作者 纪晓方 李丽英 常娜 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2016年第5期616-620,共5页
目的使用不同方法对蛋白质的核质分布进行检测并比较差异。方法细胞经免疫荧光染色后使用高内涵分析(high content analysis,HCA)对蛋白质的细胞质或细胞核总荧光强度进行分析;分别提取胞质及胞核蛋白,使用Western blotting法对核质组... 目的使用不同方法对蛋白质的核质分布进行检测并比较差异。方法细胞经免疫荧光染色后使用高内涵分析(high content analysis,HCA)对蛋白质的细胞质或细胞核总荧光强度进行分析;分别提取胞质及胞核蛋白,使用Western blotting法对核质组分中的蛋白质含量进行鉴定。结果两种方法均可检测到蛋白质的出核转运;经定量分析,HCA法检测到的HuR蛋白质/核比升高倍数小于Western blotting法。结论使用HCA法检测蛋白质核质定位具有准确、客观、成本低、快捷、多参数等特点,不失为Western blotting的有效补充及替代方法。 展开更多
关键词 高内涵分析 western blotting 蛋白质核质分布
在线阅读 下载PDF
新孢子虫和弓形虫ELISA及western blot检测方法的建立及应用 被引量：7
2
作者 陈亮 闫双 +3 位作者 刘启生 曹雯丽 王真 巴音查汗 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期558-562,共5页
为建立牛新孢子虫和弓形虫的免疫学检测方法,并调查新疆部分地区牛新孢子虫和弓形虫的感染情况,本研究应用纯化的新孢子虫重组蛋白SRS2(NcSRS2)和弓形虫重组蛋白SAG2(TgSAG2)作为包被抗原,分别建立新孢子虫和弓形虫的ELISA和western blo... 为建立牛新孢子虫和弓形虫的免疫学检测方法,并调查新疆部分地区牛新孢子虫和弓形虫的感染情况,本研究应用纯化的新孢子虫重组蛋白SRS2(NcSRS2)和弓形虫重组蛋白SAG2(TgSAG2)作为包被抗原,分别建立新孢子虫和弓形虫的ELISA和western blot血清学检测方法,并进行特异性和重复性试验,以其检测662份疑似样品,并与商品化试剂盒检测结果比较验证。特异性和重复性试验结果表明,建立的方法特异性强、重复性良好。采用建立的两种ELISA方法对662份临床样品的检测结果表明,新孢子虫和弓形虫的抗体阳性率分别为13.44%(89/662)和5.29%(35/662);与IDEXX试剂盒和永辉试剂盒的符合率分别为94.11%和95.92%。此外,western blot检测的新孢子虫和弓形虫抗体阳性率分别为5.14%(34/662)和3.17%(21/662);与建立的ELISA检测方法的符合率分别为91.69%和97.89%。本研究为分析奶牛流产的原因提供了一定的依据。 展开更多
关键词 流产奶牛 重组蛋白 ELISA 蛋白印记 检测
在线阅读 下载PDF
棉花GhCOMT1基因原核表达载体构建及蛋白纯化和Western鉴定 被引量：6
3
作者 李波 倪志勇 +1 位作者 李晓东 范玲 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1971-1976,共6页
为进一步研究GhCOMT1基因的功能,构建了原核表达载体pET-28a-GhCOMT1,酶切鉴定并测序后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,在0.2mmol/L IPTG浓度条件下分别进行不同温度梯度诱导,用蛋白标记亲和层析柱(His TrapTM HP)对重组蛋白进行纯化,并用SD... 为进一步研究GhCOMT1基因的功能,构建了原核表达载体pET-28a-GhCOMT1,酶切鉴定并测序后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,在0.2mmol/L IPTG浓度条件下分别进行不同温度梯度诱导,用蛋白标记亲和层析柱(His TrapTM HP)对重组蛋白进行纯化,并用SDS-PAGE和Western blotting方法鉴定表达产物。结果表明:16℃诱导12h、30℃诱导3h和37℃诱导3h后融合蛋白均以包涵体的形式表达,其中16℃诱导12h的蛋白表达量最大;SDS-PAGE检测目的蛋白相对分子量约为39.748kD;Western blotting分析表明,目的蛋白能与His多克隆抗体起特异性反应。 展开更多
关键词 GhCOMT1 原核表达 蛋白纯化 western blotting
在线阅读 下载PDF
赤点石斑鱼诺达病毒的纯化及其衣壳蛋白的Western-blot分析 被引量：9
4
作者 黄剑南 林蠡 +2 位作者 翁少萍 冯娟 何建国 《南方水产》 2005年第5期33-36,共4页
采用差速离心,蔗糖(10%～40%,W/V)密度梯度离心和氯化铯(30%～40%,W/W)等密度梯度离心法,对赤点石斑鱼诺达病毒大亚湾株(RGCN)进行了纯化,测定计算其浮密度为1.3102～1.3243g·cm-3。通过Westernblot法检测到的病毒的结构蛋白的分... 采用差速离心,蔗糖(10%～40%,W/V)密度梯度离心和氯化铯(30%～40%,W/W)等密度梯度离心法,对赤点石斑鱼诺达病毒大亚湾株(RGCN)进行了纯化,测定计算其浮密度为1.3102～1.3243g·cm-3。通过Westernblot法检测到的病毒的结构蛋白的分子量为37和31kDa,而以31kDa的蛋白为主。 展开更多
关键词 赤点石斑鱼诺达病毒 衣壳蛋白 纯化 western-blot分析
在线阅读 下载PDF
组织细胞中胶原蛋白的提取及ECL-Western blot分析 被引量：3
5
作者 刘德莉 徐蓉 +2 位作者 吴娟娟 夏万尧 商庆新 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期290-291,297,共3页
目的建立一种可简便、有效的胶原蛋白提取、纯化及型别分析的测定方法。方法用破碎、酶解和盐析3步法提纯胶原,用ECL-Westernblot测定细胞基质胶原(200例)、正常组织及工程化修复组织中的胶原(30例)。结果该法提取胶原的时间周期短,得... 目的建立一种可简便、有效的胶原蛋白提取、纯化及型别分析的测定方法。方法用破碎、酶解和盐析3步法提纯胶原,用ECL-Westernblot测定细胞基质胶原(200例)、正常组织及工程化修复组织中的胶原(30例)。结果该法提取胶原的时间周期短,得率高于传统方法的2.5倍,纯度达到了PAGE纯化的水平。结论该法具有简便、快速、灵敏和无放射性污染等优点,为组织工程胶原的深入研究提供了有价值的测试手段。 展开更多
关键词 Ⅰ型胶原 Ⅱ型胶原 胶原提取 ECL-western BLOT
在线阅读 下载PDF
显微切割联合全自动Western blot在小鼠大脑标记神经元微量蛋白定量中的应用 被引量：1
6
作者 杨楠 谭思维 +2 位作者 彭艳 周元国 宁亚蕾 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第20期1846-1850,共5页
目的构建及评价收集特定部位的标记神经元,对这类神经元的微量蛋白水平采用定量的方法,并将此方法初步应用于小鼠颅脑创伤后海马亚区神经元中。方法硫堇染色未固定处理的冰冻切片脑组织神经元,激光显微切割收集海马CA1区和DG区神经元,... 目的构建及评价收集特定部位的标记神经元,对这类神经元的微量蛋白水平采用定量的方法,并将此方法初步应用于小鼠颅脑创伤后海马亚区神经元中。方法硫堇染色未固定处理的冰冻切片脑组织神经元,激光显微切割收集海马CA1区和DG区神经元,全自动毛细管Western blot检测收集细胞的磷酸化蛋白激酶A(p-PKA)蛋白水平。结果全自动毛细管Western blot对低浓度蛋白的检测下限低于传统Western blot 1个数量级,其线性相关系数为98. 85%,日内和日间精密度分别为2. 50%和4. 09%。本方法应用于颅脑创伤小鼠脑组织,发现伤后1 d海马DG区神经元p-PKA显著增高(P <0. 01),CA1区无变化。结论本方法基于激光显微切割和全自动毛细管Western blot,能够实现精确收集指定神经元并准确定量微量蛋白,成功应用于目标神经元蛋白定量,具有在细胞类型众多且混杂分布的组织中进行细胞和分子水平研究的应用前景。 展开更多
关键词 激光显微切割 全自动毛细管western blot 蛋白质定量
在线阅读 下载PDF
人血清P21蛋白的Western印迹测定 被引量：6
7
作者 贾定武 吴逸明 +1 位作者 陈琛 高亚胜 《河南医科大学学报》 1995年第1期17-20,共4页
建立了Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法测定人血清中ｒａｓ癌基因蛋白的方法，检测限值为３ｍｇ／Ｌ血清。丽春红Ｓ染色后裁掉非靶蛋白部分硝酸纤维素膜，可大量节约一抗的用量；微波炉促进免疫结合，加速显色过程；用国产碱性磷酸酶ＡＢＣ试剂，... 建立了Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法测定人血清中ｒａｓ癌基因蛋白的方法，检测限值为３ｍｇ／Ｌ血清。丽春红Ｓ染色后裁掉非靶蛋白部分硝酸纤维素膜，可大量节约一抗的用量；微波炉促进免疫结合，加速显色过程；用国产碱性磷酸酶ＡＢＣ试剂，可降低成本；实验结果可用５６０ｎｍ波长的色谱扫描或血清系列稀释法进行定量，并已用于职业肿瘤高危人群的筛检。 展开更多
关键词 蛋白 印迹 western印迹 血清 P21蛋白
在线阅读 下载PDF
柑橘叶片蛋白质高效提取与溃疡病PthA蛋白质Western blot分析
8
作者 李娜 覃磊 +2 位作者 严佳文 陈佩 邓子牛 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期300-303,共4页
利用三氯乙酸-丙酮法、Tris-HCl提取法、改良PBS法提取柑橘叶片蛋白质,对提取蛋白质进行SDS-PAGE电泳、质谱鉴定和Western blot分析,结果表明,用改良PBS法提取的蛋白质质量浓度达30μg/μL,其SDS-PAGE电泳条带清晰,无杂质干扰,能达到质... 利用三氯乙酸-丙酮法、Tris-HCl提取法、改良PBS法提取柑橘叶片蛋白质,对提取蛋白质进行SDS-PAGE电泳、质谱鉴定和Western blot分析,结果表明,用改良PBS法提取的蛋白质质量浓度达30μg/μL,其SDS-PAGE电泳条带清晰,无杂质干扰,能达到质谱对样品的要求.Western blot分析结果表明,与抗柑橘溃疡病相关的PthA蛋白质在转pthA-nls基因糖橙和转pthA-nls基因冰糖橙中成功表达,pthA-nls基因已整合进甜橙基因组,表达蛋白质具有免疫反应活性. 展开更多
关键词 柑橘叶片 蛋白质 溃疡病 免疫印记
在线阅读 下载PDF
非放射性Western印迹技术改进的研究 被引量：1
9
作者 丰艳 吴景兰 +1 位作者 苏安英 丁一 《河南医科大学学报》 1996年第1期10-12,共3页
应用不同蛋白质复性剂、封闭剂和标记物的对比方法以探讨Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹技术的改进。结果表明：①经　（ＴｒｉｔｏｎＸ－１００）＝０．３％，５ｍｉｎ和ＳＢＢ２０ｍｉｎ的蛋白质复性处理后，可使第一免疫血清稀释度１：１００改... 应用不同蛋白质复性剂、封闭剂和标记物的对比方法以探讨Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹技术的改进。结果表明：①经　（ＴｒｉｔｏｎＸ－１００）＝０．３％，５ｍｉｎ和ＳＢＢ２０ｍｉｎ的蛋白质复性处理后，可使第一免疫血清稀释度１：１００改为１：１０００使用；②应用　（Ｔｗｅｅｎ２０）＝０．０５％作为封闭液效果最好；③金标法及酶标法都可用于Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹技术，酶标法主带清晰，而金标法灵敏度高。 展开更多
关键词 印迹技术 非放射性 蛋白质复性 分子生物学
在线阅读 下载PDF
甘草酸对海人藻酸癫痫大鼠模型癫痫发作及海马神经元损伤的影响
10
作者 陈艳 余艳华 +2 位作者 陈季南 李圣华 李军荣 《中国现代神经疾病杂志》 北大核心 2025年第4期303-310,共8页
目的探讨甘草酸对海人藻酸癫痫大鼠癫痫发作和海马神经元损伤的影响及可能作用机制。方法于大鼠海马组织注射海人藻酸制备癫痫模型,随机分为假手术组、癫痫模型组和甘草酸干预组(25 mg/kg组和50 mg/kg组),观察各组癫痫发作潜伏期及严重... 目的探讨甘草酸对海人藻酸癫痫大鼠癫痫发作和海马神经元损伤的影响及可能作用机制。方法于大鼠海马组织注射海人藻酸制备癫痫模型,随机分为假手术组、癫痫模型组和甘草酸干预组(25 mg/kg组和50 mg/kg组),观察各组癫痫发作潜伏期及严重程度、监测急性发作期异常脑电活动,免疫组化染色和免疫印迹法检测海马CA3区神经元损伤程度及高迁移率族蛋白1(HMGB1)表达变化。结果与模型组相比,甘草酸25 mg/kg组和50 mg/kg组大鼠癫痫发作潜伏期延长[(109.33±42.84)min对(51.17±22.31)min,t=-2.950,P=0.015;(109.50±35.79)min对(51.17±22.31)min,t=-3.388,P=0.007],模型制备后6 h内达≥Ⅳ级发作频次减少[(2.83±0.75)次对(5.00±1.55)次,t=3.081,P=0.012;(2.67±1.75)次对(5.00±1.55)次,t=2.445,P=0.035],脑电图痫样放电减少。癫痫发作急性期,模型组大鼠海马CA3区神经元数目减少且少于假手术组[(40.33±5.69)个对(72.33±7.51)个;t=5.886,P=0.004],甘草酸25 mg/kg组和50 mg/kg组神经元数目增加且多于模型组[(58.33±2.52)个对(40.33±5.69)个,t=-5.014,P=0.007;(57.00±6.25)个对(40.33±5.69)个,t=-3.418,P=0.027]。免疫组化染色显示,模型组大鼠海马CA3区HMGB1表达水平[积分光密度值(IOD)]升高且高于假手术组[(3.79±0.50)×10^(6)IOD对(2.16±0.45)×10^(6)IOD;t=-4.216,P=0.014],甘草酸25 mg/kg组和50 mg/kg组海马CA3区HMGB1表达水平下降且低于模型组[(2.50±0.52)×10^(6)IOD对(3.79±0.50)×10^(6)IOD,t=3.090,P=0.037;(2.66±0.44)×10^(6)IOD对(3.79±0.50)×10^(6)IOD,t=2.955,P=0.042]。免疫印迹法显示,模型组大鼠海马组织HMGB1表达水平(相对灰度值)高于假手术组(1.19±0.17对0.54±0.14;t=-5.078,P=0.007),甘草酸25 mg/kg组和50 mg/kg组海马组织HMGB1表达降低且低于模型组(0.65±0.04对1.19±0.17,t=5.286,P=0.028;0.58±0.13对1.19±0.17,t=4.953,P=0.008)。结论甘草酸可延长癫痫模型大鼠发作潜伏期、降低发作严重程度、减少脑电图痫样放电,并缓解海马神经元损伤,其作用机制可能与抑制海马组织HMGB1表达有关。 展开更多
关键词 癫痫 红藻氨酸 甘草酸 海马 神经元 高迁移率族蛋白质类 免疫组织化学 印迹法 蛋白质 大鼠 疾病模型 动物
在线阅读 下载PDF
茶树叶片类脱水素蛋白的Western-blot分析 被引量：4
11
作者 舒锡婷 欧阳娜 +2 位作者 江昌俊 邓威威 李叶云 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期2448-2454,共7页
为了解茶树脱水素种类与功能,采用Western-blot技术,研究了不同季节及越冬过程中茶树叶片脱水素蛋白家族的表达模式。结果显示：（1）茶树叶片总蛋白提取采用酚-甲醇/醋酸铵沉淀法,用时短、蛋白浓度高、SDSPAGE电泳条带清晰,背景干净,... 为了解茶树脱水素种类与功能,采用Western-blot技术,研究了不同季节及越冬过程中茶树叶片脱水素蛋白家族的表达模式。结果显示：（1）茶树叶片总蛋白提取采用酚-甲醇/醋酸铵沉淀法,用时短、蛋白浓度高、SDSPAGE电泳条带清晰,背景干净,满足茶树Western-blot技术要求。（2）在不同季节及越冬期中发现14～95kD共9种不同分子量的茶树类脱水素蛋白,其中95、65、48、37、34和14kD等6种蛋白表达量较为稳定,季节与越冬期变化不明显;58kD脱水素仅在冬季表达,越冬期不断上升,2月份增加到最高,表达丰度高;28kD脱水素蛋白在冬季表达量高,越冬期与茶树抗寒力变化规律一致;21kD脱水素在夏季和越冬期后期有较高的表达。研究表明,这3种脱水素可能在茶树抗逆中起着重要作用。 展开更多
关键词 茶树 脱水素 蛋白质提取 蛋白质印迹法
在线阅读 下载PDF
果梅CCoAOMT蛋白Western-blot体系建立与优化
12
作者 张勇 侍婷 +1 位作者 吴欣欣 高志红 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期977-982,共6页
[目的]本文旨在建立一套适合于果梅(Prunus mume)Western-blot的蛋白质提取和技术体系。[方法]以果梅品种‘小绿萼’花芽为试验材料,以咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶(CCo AOMT)为目标蛋白,分别采用Tris-HCl法和SDS上样缓冲液直接提取法,比较... [目的]本文旨在建立一套适合于果梅(Prunus mume)Western-blot的蛋白质提取和技术体系。[方法]以果梅品种‘小绿萼’花芽为试验材料,以咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶(CCo AOMT)为目标蛋白,分别采用Tris-HCl法和SDS上样缓冲液直接提取法,比较2种提取方法的优劣,并通过设置不同的蛋白上样量(20、30、40、50及60μg)、转膜时间(40、60及90 min)、一抗稀释比例(1∶500、1∶1 000、1∶2 000及1∶5 000)以及一抗孵育时间(室温1 h、室温2 h及4℃过夜)等组合,研究适合果梅花芽CCo AOMT蛋白Western-blot的最佳体系。[结果]成功建立了快速、灵敏、特异的Western-blot体系,确定了果梅花芽CCoAOMT蛋白的Western-blot试验条件。SDS上样缓冲液直接提取法提取蛋白快速、高效,最佳条件为以蛋白上样量30μg、转膜1 h、一抗稀释比例1∶1 000以及一抗孵育2 h。[结论]本试验建立了简单、快速和重复性好的SDS上样缓冲液直接提取法以及优化的上样量、转膜时间和抗体浓度等Western-blot体系,为梅等木本植物开展Western-blot研究提供依据。 展开更多
关键词 果梅 花芽 蛋白提取 咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶(CCoAOMT) western-BLOT
在线阅读 下载PDF
蛋白质酪氨酸磷酸化-免疫沉淀及Western印迹两种方法的比较 被引量：2
13
作者 陈沙力 刘树铮 《白求恩医科大学学报》 CSCD 1997年第6期678-680,共3页
为了深入了解在细胞信息传递中蛋白质酪氨酸磷酸化研究的较佳方法，采用免疫沉淀法及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法对电离辐射诱导的小鼠胸腺细胞蛋白质磷酸化进行了比较分析。免疫沉淀结果表明，照射后１７５００、２２０００、２８０００、３... 为了深入了解在细胞信息传递中蛋白质酪氨酸磷酸化研究的较佳方法，采用免疫沉淀法及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法对电离辐射诱导的小鼠胸腺细胞蛋白质磷酸化进行了比较分析。免疫沉淀结果表明，照射后１７５００、２２０００、２８０００、３２０００、４００００、４３０００及５３０００蛋白分子发生酪氨酸磷酸化。Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹结果表明，照射后２８０００、３２０００蛋白分子发生酪氨酸磷酸化。提示在蛋白质酪氨酸磷酸化的研究中，免疫沉淀法优于Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法。 展开更多
关键词 蛋白质 磷酸化 免疫沉淀 免疫印迹 western印迹
在线阅读 下载PDF
电转移中蛋白质的透膜现象及其对蛋白质印迹结果的影响 被引量：9
14
作者 董燕 张枫 +2 位作者 梅柱中 刘斌 孙志贤 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第3期449-453,共5页
探讨了电转移中蛋白质的透膜现象及其对蛋白质印迹结果的影响 .采用抗凋亡抑制蛋白 Survivin的抗体 ,对细胞裂解液进行蛋白质印迹 .与常规操作方法不同之处是 :在电转移的凝胶“三明治”中 ,重叠放置两张硝酸纤维素膜 .电转移后 ,对两... 探讨了电转移中蛋白质的透膜现象及其对蛋白质印迹结果的影响 .采用抗凋亡抑制蛋白 Survivin的抗体 ,对细胞裂解液进行蛋白质印迹 .与常规操作方法不同之处是 :在电转移的凝胶“三明治”中 ,重叠放置两张硝酸纤维素膜 .电转移后 ,对两张膜同时进行免疫印迹 .在特定的转移条件下 ,两张膜的免疫印迹都出现了Survivin蛋白的特异印迹带 ,证实了电转移中存在着蛋白质的透膜现象 .转移时间、电流强度和蛋白质的分子质量 ,都是影响蛋白质透膜的相关因素 .电转移中蛋白质的透膜 ,可以产生“印迹复制失真”的效应 ,从而最终影响蛋白质印迹定性和定量的结果 .所得实验结果和结论 ,揭示了蛋白质印迹技术方法学中一个需要加以充分关注的问题 。 展开更多
关键词 蛋白质 透膜现象 电转移 免疫印迹 假阴性
在线阅读 下载PDF
梭子蟹变应原的分离、纯化与鉴定 被引量：11
15
作者 赵绮华 王锡忠 +2 位作者 陈丽金 李文 刘永平 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期256-259,共4页
目的：对梭子蟹（Portunus pelogicus（Linnaeus））变应原进行分离,鉴定其主要及次要变应原,采用蛋白纯化技术获取梭子蟹天然的主要变应原并进行鉴定,为标准化变应原疫苗的研制提供理论依据.方法：取常规方法制备梭子蟹浸出液,经SDS-P... 目的：对梭子蟹（Portunus pelogicus（Linnaeus））变应原进行分离,鉴定其主要及次要变应原,采用蛋白纯化技术获取梭子蟹天然的主要变应原并进行鉴定,为标准化变应原疫苗的研制提供理论依据.方法：取常规方法制备梭子蟹浸出液,经SDS-PAGE分离,测定各组分的相对分子量;同时用26例对蟹过敏的病人血清进行Western blot,鉴定其主要及次要变应原;利用快速制备液相色谱（FPLC）纯化技术（凝胶过滤层析和离子交换层析）获取主要变应原并作鉴定.结果：SDS-PAGE显示梭子蟹有19条可辨蛋白带,分子量在13 000～90 000之间,其中主带有9条,分子量是20 900、24 200、27 100、29 200、33 700、38 900、48 700、74 700、89 100;Western blot结果表明,26例蟹过敏患者血清全部呈阳性反应,浸出液中共有5条致敏条带,其中分子量在74 400、48 700的是主要变应原,阳性反应率均为100%;纯化后获取了74400、48700的主要变应原;经过免疫鉴定证实其具有免疫活性.结论：梭子蟹74 400和48 700的变应原为主要变应原,层析技术可以对分子量为74400和48700的主要变应原成分进行纯化. 展开更多
关键词 梭子蟹 变应原 SDS-PAGE western BLOT FPLC
在线阅读 下载PDF
从毕赤酵母中提取外源重组蛋白的超声破碎条件及优化 被引量：12
16
作者 戴佳锟 李燕 +5 位作者 马齐 关正君 张超 张艳婷 赵荣荣 尉亚辉 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第10期57-60,共4页
建立适用于从毕赤酵母菌中提取外源重组蛋白的超声破碎方法。采用Western Blotting免疫印记技术检测从毕赤酵母菌中提取的外源人脂联素蛋白活性,并以外源人脂联素蛋白活性作为考察指标,采用单因素和L9(33)正交试验设计,对超声破碎条件... 建立适用于从毕赤酵母菌中提取外源重组蛋白的超声破碎方法。采用Western Blotting免疫印记技术检测从毕赤酵母菌中提取的外源人脂联素蛋白活性,并以外源人脂联素蛋白活性作为考察指标,采用单因素和L9(33)正交试验设计,对超声破碎条件进行优化。结果表明:在外源人脂联素蛋白活性最高的情况下,超声破碎条件为超声破碎功率450W、时间25min、时间间隔(工作时间:间歇时间)10:10(s/s),此时细胞破碎率为(67.8±2.1)%。若在超声破碎时添加1mmol/L PMSF,虽对细胞破碎率并无显著影响,但外源人脂联素蛋白活性将会明显增高。 展开更多
关键词 毕赤酵母 超声破碎法 人脂联素蛋白 western blotting免疫印记技术
在线阅读 下载PDF
游仆虫Rab蛋白基因的克隆表达与纯化 被引量：8
17
作者 樊俊蝶 王伟 +2 位作者 柴宝峰 智慧 梁爱华 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期200-205,共6页
为对单细胞原生动物纤毛虫中Rab蛋白的功能进行研究 ,进而探讨以胞吞和胞吐为主要物质交换途径的纤毛虫中囊泡定向运输的机理 .利用PCR技术从游仆虫大核DNA及cDNA中扩增出rab基因 ,并进行了序列分析 ,该基因全长为 783bp ,两端为端粒序... 为对单细胞原生动物纤毛虫中Rab蛋白的功能进行研究 ,进而探讨以胞吞和胞吐为主要物质交换途径的纤毛虫中囊泡定向运输的机理 .利用PCR技术从游仆虫大核DNA及cDNA中扩增出rab基因 ,并进行了序列分析 ,该基因全长为 783bp ,两端为端粒序列 ,编码框为 6 2 4bp ,编码 2 0 7个氨基酸 ,开放读框中有 3个TGA ,在此编码半胱氨酸 .利用定点突变将rab基因中 3个TGA突变为通用半胱氨酸密码子TGC .将游仆虫Rab蛋白基因构建于原核表达载体pGEX 4T 2中 ,得到的重组质粒pGEX Eorab1转化至大肠杆菌BL2 1(DE3)中 ,IPTG诱导表达 .表达产物与抗GST抗体在 4 9kD处有很强的交叉反应 .融合蛋白GST EoRab1通过亲和层析柱纯化和凝血酶的切割 ,再经两步纯化得到电泳纯的游仆虫Rab蛋白 . 展开更多
关键词 游仆虫 RAB蛋白 基因 克隆 表达 纯化 western印迹 纤毛虫
在线阅读 下载PDF
水稻U-Box蛋白质在不同发育时期的表达分析 被引量：9
18
作者 陈浩 李莉云 +3 位作者 白辉 曹英豪 王宪云 刘国振 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第9期1208-1214,共7页
真核生物基因组中广泛存在U-Box基因,其编码蛋白大部分是泛素系统中决定底物特异性识别的E3蛋白,其构象与RING-finger极其相似.U-Box蛋白质能促进底物蛋白泛素化降解,对细胞内异常蛋白的降解及质量控制方面发挥着重要的作用.水稻基因组... 真核生物基因组中广泛存在U-Box基因,其编码蛋白大部分是泛素系统中决定底物特异性识别的E3蛋白,其构象与RING-finger极其相似.U-Box蛋白质能促进底物蛋白泛素化降解,对细胞内异常蛋白的降解及质量控制方面发挥着重要的作用.水稻基因组中有77个U-Box蛋白质,系统了解它们的表达可为功能研究提供数据.制备针对水稻U-Box蛋白质的抗体,了解水稻中U-Box蛋白质在不同发育时期的表达信息,为功能研究积累数据.选取了4个水稻U-Box蛋白质,其共同结构特点为U-Box结构在N端,C端有ARM结构.用计算机软件预测抗原决定簇,细菌体系体外表达、纯化U-Box蛋白质的片段,免疫动物制备多克隆抗体,用Westernblotting检测U-Box蛋白质在水稻品种93-11苗期地上部和地下部、分蘖期根和茎、孕穗期剑叶和幼穗、开花期剑叶和穗子、成熟期剑叶和种子中的表达,并与EST数据库中公布的U-Box蛋白质EST数据进行了比较分析.体外克隆表达后,获得了纯化的蛋白质,制备的抗体特异性强,蛋白质印迹(Westernblotting)检测可见一条明显的主带,其中Os06g01304和Os12g38210两个蛋白质的表观分子质量与预测分子质量相符,Os01g66130和Os08g01900两个蛋白质的表观分子质量低于预测分子质量.4个U-Box蛋白质在水稻生长发育的不同时期或部位基本上是组成型表达,且表达量接近.对NCBI上公布的来自274个文库100万条以上的EST进行分析,可以看出4个U-Box蛋白质EST的数量分布大致均匀,与Westernblotting结果揭示的组成型表达平行,与ATPase、HSP81-3、EGF-1alpha和RuBisCo等对照基因相比,U-Box基因的EST数目相对很少,说明它们属于低丰度转录的基因.选取了4个水稻U-Box蛋白质,通过抗原决定簇预测,表达片段蛋白,制备了特异性抗体,证明了这一技术路线的可行性.利用抗体对水稻不同发育时期材料进行蛋白质表达谱研究,发现这些U-Box蛋白质呈组成型表达,与EST数据揭示的结果具有平行性.所制备的抗体也为相关功能研究,如免疫共沉淀、ChIP-on-chip、Pull-down以及在抗病、抗逆反应中U-Box蛋白质的表达等,积累了资源. 展开更多
关键词 水稻 U—Box 蛋白质表达 蛋白质印迹
在线阅读 下载PDF
低浓度Pb^(2+)、Cd^(2+)对鲫鱼肝脏组织中HSP70诱导的影响 被引量：8
19
作者 沈骅 王晓蓉 +2 位作者 张景飞 刘晓华 赵永娟 《环境污染与防治》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期244-246,共3页
以鲫鱼 ( Carassius auratus)作为实验对象 ,经过 40 d Pb2 +、Cd2 +不同浓度的暴露后 ,运用 SDS-PAGE和 Western Blot-ting方法检测鱼肝脏组织内应激蛋白 HSP70的诱导表达情况。结果表明 ,在实验浓度下 ,与对照组相比 ,Pb2 + 、Cd2 + ... 以鲫鱼 ( Carassius auratus)作为实验对象 ,经过 40 d Pb2 +、Cd2 +不同浓度的暴露后 ,运用 SDS-PAGE和 Western Blot-ting方法检测鱼肝脏组织内应激蛋白 HSP70的诱导表达情况。结果表明 ,在实验浓度下 ,与对照组相比 ,Pb2 + 、Cd2 + 对鱼肝脏内HSP70有显著的诱导 ( P<0 .0 5 ) ,但在 Cd2 +浓度为 0 .2 mg/ L 有停止表达 HSP70的现象 ,可能是由于浓度过高造成了组织病理损伤而破坏了诱导表达机制。实验还发现 ,在实验浓度低于国家渔业用水标准时 ,HSP70仍然表现为明显诱导 ( P<0 .0 5 ) ,充分说明运用分子生物学指标要比传统的环境检测指标敏感 。 展开更多
关键词 HSP70 诱导 肝脏组织 实验 鱼肝 暴露后 对照组 CD^2+ PB^2+ 污染物
在线阅读 下载PDF
一种分析叶绿体类囊体膜色素蛋白复合物的蓝绿温和胶电泳系统 被引量：17
20
作者 李贝贝 郭进魁 +2 位作者 周云 张珠珠 张立新 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第4期639-643,共5页
采用蓝绿温和胶电泳系统可以非常有效地分离叶绿体蛋白质复合物 ,包括PSⅠ ,PSⅡ ,ATP合酶 ,细胞色素b6f复合物 ,捕光色素复合物和 1,5 二磷酸核酮糖羧化酶 .还结合SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳将叶绿体多亚基复合物的 5 0多种蛋白质分开 ,... 采用蓝绿温和胶电泳系统可以非常有效地分离叶绿体蛋白质复合物 ,包括PSⅠ ,PSⅡ ,ATP合酶 ,细胞色素b6f复合物 ,捕光色素复合物和 1,5 二磷酸核酮糖羧化酶 .还结合SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳将叶绿体多亚基复合物的 5 0多种蛋白质分开 ,利用免疫印迹对蛋白质复合物进行了初步鉴定 ,同时还应用蓝色温和胶电泳分析基质。 展开更多
关键词 叶绿体 类囊体膜色素蛋白复合物 蓝绿温和胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳 免疫印迹
在线阅读 下载PDF
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 2 … 15 下一页 到第 页
关于我们 | 版权声明 | 联系我们 | 帮助中心| 意见反馈
主办单位：上海市教育委员会
技术支持：重庆维普资讯有限公司
渝公网安备 50019002500403号
使用帮助 返回顶部