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柴胡总皂苷对四氯化碳急性肝损伤小鼠CYP2E1酶活性及mRNA的影响
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作者 杨贝 邹心意 +3 位作者 王子怡 张潇童 贺文婷 唐亮 《特产研究》 2025年第3期49-54,共6页
为探讨柴胡总皂苷对四氯化碳致急性肝损伤小鼠的保护作用,本研究使用60只KM小鼠作为试验对象,适应性饲养一周后随机分为正常对照组,模型对照组,阳性对照组(双环醇),柴胡总皂苷低剂量组(15 mg/kg)、中剂量组(75 mg/kg)和高剂量组(150 mg/... 为探讨柴胡总皂苷对四氯化碳致急性肝损伤小鼠的保护作用,本研究使用60只KM小鼠作为试验对象,适应性饲养一周后随机分为正常对照组,模型对照组,阳性对照组(双环醇),柴胡总皂苷低剂量组(15 mg/kg)、中剂量组(75 mg/kg)和高剂量组(150 mg/kg),每组10只。对于柴胡总皂苷的高、中、低剂量组,每天给每只小鼠灌服0.18 mL的柴胡总皂苷。正常对照组和模型组给予与各给药组等剂量的生理盐水,每天接受一次给药,持续7 d。在最后一次给药后的1 h,除正常对照组外,其余各组通过腹腔注射的方式向小鼠一次性注入四氯化碳花生油(浓度为0.1%,剂量为10 mg/kg),以此诱导急性肝损伤。造模后采用HE染色检测肝脏病理变化;采用ELISA法检测谷草转氨酶(AST),谷丙转氨酶(ALT)含量,测定CYP2E1酶活性;Western Blot法检测CYP2E1蛋白表达;RT-PCR法检测CYP2E1 mRNA的表达。正常对照组的肝细胞展现出典型的形态结构,这些肝细胞围绕中央静脉呈辐射状分布。模型组有不同程度的细胞水肿,柴胡总皂苷各剂量组病理学形态均有不同程度改善。与正常对照组相比,模型组AST、ALT水平均升高(P <0.01)。与正常对照组相比,柴胡总皂苷高剂量组CYP2E1的酶活性以及mRNA表达显著降低(P <0.01)。本研究表明高剂量的柴胡总皂苷(150 mg/kg)能够明显缓解CCl4小鼠的急性肝损伤,并且能够下调CYP2E1的表达,通过抑制CYP2E1酶的活性来实现对CCl4致急性肝损伤小鼠肝损伤的有效防护。 展开更多
关键词 柴胡总皂苷 四氯化碳 急性肝损伤 CYP2e1
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前列腺素E2对雌性小鼠下丘脑视前区正中核热敏神经元放电活动的影响及其机制
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作者 侯晓钰 李娅 +3 位作者 宋宜安 何田慧 张洁 胥建辉 《吉林大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第1期17-25,共9页
目的:探讨致热介质前列腺素E_(2)(PGE_(2))对雌性小鼠下丘脑视前区正中核(MnPO)热敏神经元(WSNs)放电活动的影响,并阐明其作用机制。方法:制作雌性小鼠MnPO冠状脑片,灌流含有突触阻断剂(STBs)的人工脑脊液(ACSF),改变灌流液温度的同时... 目的:探讨致热介质前列腺素E_(2)(PGE_(2))对雌性小鼠下丘脑视前区正中核(MnPO)热敏神经元(WSNs)放电活动的影响,并阐明其作用机制。方法:制作雌性小鼠MnPO冠状脑片,灌流含有突触阻断剂(STBs)的人工脑脊液(ACSF),改变灌流液温度的同时应用膜片钳技术检测神经元的放电频率,鉴定WSNs。32个MnPO WSNs分为基础放电组(n=32)和PGE_(2)组(n=32),采用膜片钳技术检测MnPO WSNs分别灌流ACSF和1μmol·L-1PGE_(2)后的放电频率。选择灌流PGE_(2)后放电频率明显改变且活性良好的MnPO WSNs(n=21),分为PGE_(2)受体E系列前列腺素受体(EP)1拮抗剂(EP1 ant)+PGE_(2)组(n=7)、EP3 ant+PGE_(2)组(n=7)和EP4 ant+PGE_(2)组(n=7),采用膜片钳技术检测MnPO WSNs分别灌流3μmol·L-1EP1 ant和1μmol·L-1PGE_(2)混合液、10μmol·L-1EP3 ant和1μmol·L-1PGE_(2)混合液及10μmol·L-1EP4 ant和1μmol·L-1PGE_(2)混合液后的放电频率。结果:灌流含有STBs的ACSF后,共有188个雌性小鼠的MnPO神经元进行了内在温度敏感系数(以m值表示)的鉴定,其中32个神经元的m值≥0.8,被鉴定为MnPO WSNs,占所有记录神经元的17%。与基础放电频率比较,加入PGE_(2)后MnPO的放电频率明显降低(P<0.05);与PGE_(2)组比较,EP3 ant+PGE_(2)组MnPO WSNs的放电频率百分比改变降低(P<0.05);与PGE_(2)组比较,EP1 ant+PGE_(2)组MnPO WSNs的放电频率的百分比改变差异无统计学意义(P>0.05);与PGE_(2)组比较,EP4 ant+PGE_(2)组MnPO WSNs的放电频率的百分比改变差异无统计学意义(P>0.05)。结论:雌性小鼠MnPO存在约17%的WSNs;PGE_(2)可通过突触后的机制经EP3受体直接抑制雌性小鼠MnPO WSNs的放电活动。 展开更多
关键词 发热 前列腺素e2 视前区正中核 热敏神经元 eP3受体
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核因子E2相关因子2信号转导通路激活对氧糖剥夺星形胶质细胞的保护作用及其机制研究
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作者 高雨田 王克健 +1 位作者 吴成吉 黄作义 《中国现代神经疾病杂志》 北大核心 2025年第5期434-440,共7页
目的探讨核因子E2相关因子2(Nrf2)信号转导通路激动剂特丁基对苯二酚(tBHQ)对氧糖剥夺星形胶质细胞的保护作用及其作用机制。方法将常规培养的CTX⁃TNA2大鼠脑Ⅰ型星形胶质细胞系分为对照组、氧糖剥夺组和tBHQ组,采用CCK⁃8法检测细胞增... 目的探讨核因子E2相关因子2(Nrf2)信号转导通路激动剂特丁基对苯二酚(tBHQ)对氧糖剥夺星形胶质细胞的保护作用及其作用机制。方法将常规培养的CTX⁃TNA2大鼠脑Ⅰ型星形胶质细胞系分为对照组、氧糖剥夺组和tBHQ组,采用CCK⁃8法检测细胞增殖活性,酶标仪检测细胞氧化水平[超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量],实时荧光定量聚合酶链反应测定细胞焦亡相关基因Caspase⁃1、NLRP3、IL⁃1β、IL⁃18及抗氧化相关基因HO⁃1、NQO1的相对表达量。结果上述不同处理组星形胶质细胞增殖活性(F=8.676,P=0.003),SOD活性(F=5.818,P=0.013)和MDA含量(F=9.049,P=0.004),细胞焦亡相关基因Caspase⁃1(F=17.926,P=0.003)、NLRP3(F=10.164,P=0.012)、IL⁃1β(F=13.472,P=0.006)、IL⁃18(F=8.292,P=0.019)及抗氧化相关基因HO⁃1(F=30.468,P=0.001)、NQO1(F=29.621,P=0.001)相对表达量差异具有统计学意义,两两比较发现,氧糖剥夺后星形胶质细胞增殖活性降低(t=4.114,P=0.001),SOD活性降低(t=2.149,P=0.029),MDA含量升高(t=⁃2.852,P=0.015),细胞焦亡相关基因Caspase⁃1(t=⁃3.759,P=0.009)、NLRP3(t=⁃4.119,P=0.006)、IL⁃1β(t=⁃4.747,P=0.003)、IL⁃18(t=⁃3.122,P=0.021)相对表达量升高,抗氧化相关基因HO⁃1(t=3.816,P=0.009)、NQO1(t=5.303,P=0.002)相对表达量降低;经tBHQ干预后,星形胶质细胞增殖活性升高(t=2.621,P=0.019),SOD活性增加(t=3.292,P=0.005),MDA含量降低(t=⁃4.160,P=0.001),Caspase⁃1(t=⁃5.916,P=0.001)、NLRP3(t=⁃3.647,P=0.011)、IL⁃1β(t=⁃4.193,P=0.006)、IL⁃18(t=⁃3.825,P=0.009)相对表达量降低,HO⁃1(t=7.805,P=0.000)、NQO1(t=7.483,P=0.000)相对表达量升高。结论氧糖剥夺可抑制抗氧化相关基因HO⁃1和NQO1表达,促进星形胶质细胞焦亡及氧化水平,进而抑制细胞增殖活性;Nrf2通路激动剂tBHQ则可促进HO⁃1和NQO1基因表达,提高氧糖剥夺星形胶质细胞抗氧化水平,逆转星形胶质细胞焦亡,对细胞具有保护作用。 展开更多
关键词 缺血性卒中 细胞低氧 葡萄糖 星形细胞 NF⁃e2相关因子2 细胞增殖 细胞焦亡 细胞 培养的
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猪瘟病毒E2基因部分表位区重组猪伪狂犬病病毒的构建及生物学特性研究
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作者 王林青 张刘辉 +3 位作者 陈曦艋 马世杰 宋月 陈红英 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第4期1815-1824,共10页
【目的】猪瘟病毒(Classical swine fever virus, CSFV)和猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus, PRV)是当前影响生猪产业发展的两种重要病原,目前无高效的药物治疗方法,主要依靠疫苗接种进行预防。本试验旨在构建含有CSFV E2基因部分表... 【目的】猪瘟病毒(Classical swine fever virus, CSFV)和猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus, PRV)是当前影响生猪产业发展的两种重要病原,目前无高效的药物治疗方法,主要依靠疫苗接种进行预防。本试验旨在构建含有CSFV E2基因部分表位区的重组PRV毒株,并探究其生物学特性,为开发同时预防CSFV和PRV的二联疫苗提供参考。【方法】首先使用基因工程技术将包含CSFV E2蛋白B/C/D/A 4个表位区的一段基因插入pG-EGFP重组质粒的BamHⅠ位点,构建重组质粒pG-E2AD-EGFP;然后将质粒转染已接种PRV三基因缺失毒株rPRV NY-gE^(-)/gI^(-)/TK^(-)的ST细胞,在ST细胞内发生同源重组,利用蚀斑纯化法拯救出带绿色荧光蛋白的重组病毒rPRV-E2AD-EGFP。使用CRISPR/Cas9敲除载体敲除EGFP基因,经蚀斑纯化得到无荧光的重组病毒rPRV-E2AD。利用PCR扩增和Western blotting检测重组病毒rPRV-E2AD的E2基因A-D表位区表达情况。通过半数组织培养感染剂量(TCID50)法检测不同理化性质处理后病毒增殖情况,对重组病毒培养特性、理化特性进行评价。【结果】通过细胞内同源重组和病毒蚀斑纯化,得到了同时表达CSFV E2AD抗原和EGFP的重组病毒rPRV-E2AD-EGFP。通过CRISPR/Cas9技术敲除EGFP基因,得到了无EGFP基因表达的重组病毒rPRV-E2AD。Western blotting检测结果显示,该毒株表达蛋白大小约27 ku,与预期CSFV E2AD抗原大小一致。rPRV-E2AD毒株与亲本株在ST、IPEC-J2、PK-15、Vero细胞中生长特性基本一致,均在感染后12 h引起细胞融合,36 h出现细胞脱落。理化特性检测结果显示,重组毒株与亲本株在相同理化条件处理下,培养特性相似。【结论】本研究成功获得重组病毒rPRV-E2AD,且外源基因不影响亲本株的增殖特性,试验结果为研发重组CSFV E2基因活载体疫苗提供了候选毒株,也为PRV活载体疫苗的开发提供了研究基础。 展开更多
关键词 猪瘟病毒(CSFV) 伪狂犬病病毒(PRV) 重组病毒 e2基因
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小鼠抗西方马脑炎病毒E2蛋白胞外区(E2ecto)单克隆抗体的制备
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作者 武福星 董阳超 +6 位作者 张剑 薛潘 袁若栋 陈洋 元航 李宝莉 雷迎峰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期62-68,共7页
目的制备针对西方马脑炎病毒(WEEV)E2包膜糖蛋白胞外区(E2ecto)的小鼠特异性单克隆抗体(mAb)。方法构建表达WEEV E2ecto的原核表达质粒pET-28a-WEEV E2ecto,转化BL21(DE3)感受态细胞后,IPTG诱导表达,主要为包涵体形式。包涵体纯化后,通... 目的制备针对西方马脑炎病毒(WEEV)E2包膜糖蛋白胞外区(E2ecto)的小鼠特异性单克隆抗体(mAb)。方法构建表达WEEV E2ecto的原核表达质粒pET-28a-WEEV E2ecto,转化BL21(DE3)感受态细胞后,IPTG诱导表达,主要为包涵体形式。包涵体纯化后,通过变性、复性、超滤等制备得到E2ecto蛋白;以QuickAntibody-Mouse5W为佐剂,将E2ecto蛋白肌肉免疫BALB/c小鼠,间隔21 d加强1次。免疫后35 d,取效价超过1×104的小鼠腹腔接种1次E2ecto蛋白,3 d后取小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合。通过有限稀释法筛选稳定分泌特异性mAb的杂交瘤细胞,接种小鼠腹腔后制备腹水;利用ELISA检测抗体亚型及腹水中抗体效价的水平;将真核表达质粒pCAGGS-WEEV-CE3E2E1转染BHK-21细胞,通过免疫荧光法(IFA)鉴定上述mAb的生物学活性;利用东方马脑炎病毒(EEEV)、委内瑞拉马脑炎病毒(VEEV)的E2ecto蛋白进行ELISA鉴定上述抗体的特异性。结果成功表达及复性获得了纯化的WEEV E2ecto蛋白;制备了3G6G10、3D7G2、3B9E8、3D5B7四株mAb,其亚型分别为IgG2c(κ)、IgM(κ)、IgM(κ)、IgG1(κ);3G6G10、3B9E8、3D7G2腹水抗体效价均为105,3D5B7达到107;该4株抗体与VEEV和EEEV等其他脑炎甲病毒无交叉反应。结论成功制备了4株特异性结合WEEVE2ecto的小鼠mAb。 展开更多
关键词 西方马脑炎病毒(WeeV) e2包膜糖蛋白胞外区(e2ecto) 原核表达 单克隆抗体(mAb)
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副干酪乳酪杆菌CCFM1317激活Keap1/Nrf2通路缓解小鼠阴道加德纳菌感染
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作者 林如梦 黄小艳 +4 位作者 崔树茂 毛丙永 唐鑫 赵建新 张秋香 《食品与发酵工业》 北大核心 2025年第3期21-27,共7页
乳杆菌有助于调节机体抗氧化信号通路,上调抗氧化酶类的表达缓解氧化损伤。该研究旨在探讨特定益生菌对宿主抗氧化能力的提升,及其在调节阴道加德纳菌(Gardnerella vaginalis,GV)感染造成的氧化应激中的作用。通过建立炎症模型和筛选具... 乳杆菌有助于调节机体抗氧化信号通路,上调抗氧化酶类的表达缓解氧化损伤。该研究旨在探讨特定益生菌对宿主抗氧化能力的提升,及其在调节阴道加德纳菌(Gardnerella vaginalis,GV)感染造成的氧化应激中的作用。通过建立炎症模型和筛选具有抗氧化潜力的乳杆菌,该研究采用1.25μg/mL的脂多糖处理VK2/E6E7细胞24 h,使用CCK-8法确定具有抗氧化潜力的乳杆菌。在动物实验中,采用颈部皮下注射5 mg/mL戊酸雌二醇和阴道注射20μL 1010 CFU/mL的GV建立小鼠感染模型,随后连续10 d灌胃100μL 109 CFU/mL的乳杆菌菌悬液。实验结束后,对不同组别小鼠阴道进行GV载量检测、病理组织切片观察以及抗氧化信号通路Kelch-like ECH-associated protein 1(Keap1)/Nuclear factor erythroid 2-related factor 2(Nrf2)表达检测。研究结果显示,副干酪乳酪杆菌CCFM1317在体外试验中可显著上调细胞活力至109.0%。在动物试验中,口服CCFM1317后,GV载量下降了40.6%,阴道组织的病理切片结果也显示良好表征。进一步地,检测阴道组织Keap1/Nrf2信号通路表达情况,发现CCFM1317可使Keap1 mRNA水平表达显著降低48.6%,Nrf2 mRNA水平表达显著上调(P<0.0001),同时Nrf2含量上升了1.9倍。综上,该研究筛选的副干酪乳酪杆菌CCFM1317具有增强阴道抗氧化能力的特性,能够帮助机体缓解氧化应激。 展开更多
关键词 乳杆菌 阴道加德纳菌 氧化应激 Keap1/Nrf2信号通路 VK2/e6e7
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E2A-PBX1融合基因阳性儿童急性淋巴细胞白血病临床特点及预后分析
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作者 贾明 胡波飞 +3 位作者 徐晓军 徐卫群 张晶樱 汤永民 《中国实验血液学杂志》 北大核心 2025年第2期319-324,共6页
目的:探讨儿童E2A-PBX1融合基因阳性急性淋巴细胞白血病(ALL)的临床特点、治疗反应及预后特征。方法:回顾性分析2010年7月至2017年11月于本院初诊的ALL患儿837例,实时荧光定量PCR技术检测出E2A-P BX1阳性患儿48例,收集其临床资料进行分... 目的:探讨儿童E2A-PBX1融合基因阳性急性淋巴细胞白血病(ALL)的临床特点、治疗反应及预后特征。方法:回顾性分析2010年7月至2017年11月于本院初诊的ALL患儿837例,实时荧光定量PCR技术检测出E2A-P BX1阳性患儿48例,收集其临床资料进行分析。结果:48例E2A-PBX1融合基因阳性患儿中男26例,女22例,发病年龄9个月-13岁。初诊低危、中危及高危分别为2例(4.2%)、32例(66.7%)和14例(29.1%)。初诊外周血白细胞数<50×10^(9)/L者25例(53.2%),(50-100)×10^(9)/L者11例(23.4%),≥100×10^(9)/L者11例(23.4%)。免疫表型主要是以common-B ALL为主(44例,占91.7%)。48例E2A-PBX1阳性患儿未检测到BCR-ABL1、MLL-AF4、TEL-AML1等其他白血病融合基因。所有患儿均接受中国儿童急性淋巴细胞白血病2008方案治疗,其中,泼尼松反应不良者5例(10.4%)。48例患儿在诱导治疗结束后均获得完全缓解。至随访截止时间(2023年4月30日),共5例患儿出现复发,其中中危1例、高危4例,高危组患儿的复发率明显高于中、低危组(均P<0.05);绝大多数复发患儿初诊白细胞数较高,其中4例≥100×10^(9)/L,初诊白细胞数≥100×10^(9)/L组患儿的复发率明显高于<100×10^(9)/L组(P<0.01)。本组共有4例患儿死亡,其中因白血病复发导致死亡的患儿有3例。48例E2A-PBX1融合基因阳性患儿10年无事件生存率及10年总生存率分别为87.5%±4.8%、91.7%±4.0%。结论:在E2A-PBX1融合基因阳性ALL患儿中,初诊白细胞计数高及危险度分层较高的患儿更容易出现复发,复发是患儿的主要死亡原因,建议此类患儿接受更高强度的化疗或尽早进行造血干细胞移植以进一步改善其预后。 展开更多
关键词 e2A-PBX1融合基因 急性淋巴细胞白血病 复发 预后
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猪瘟病毒E2蛋白单克隆抗体的制备及抗原表位的鉴定
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作者 林琪虹 李长尧 +2 位作者 张朝霞 宋厚辉 翁长江 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第2期179-184,共6页
为制备猪瘟病毒(CSFV)鼠源E2蛋白单克隆抗体(MAb)并鉴定其抗原表位,本研究通过昆虫细胞杆状病毒表达系统表达并纯化了重组E2蛋白(rE2),将其免疫BALB/c小鼠后通过间接ELISA方法筛选到1株能够稳定分泌E2蛋白MAb的杂交瘤细胞株3D5。经MAb... 为制备猪瘟病毒(CSFV)鼠源E2蛋白单克隆抗体(MAb)并鉴定其抗原表位,本研究通过昆虫细胞杆状病毒表达系统表达并纯化了重组E2蛋白(rE2),将其免疫BALB/c小鼠后通过间接ELISA方法筛选到1株能够稳定分泌E2蛋白MAb的杂交瘤细胞株3D5。经MAb亚类鉴定试剂盒检测结果显示3D5 MAb为IgM型。采用western blot检测制备的3D5 MAb与293T细胞中过表达的E2蛋白及CSFV感染猪肾细胞(PK-15细胞)后(感染后不同时间)天然表达E2蛋白的反应性;采用间接免疫荧光试验(IFA)检测3D5 MAb与PK-15细胞中天然表达E2蛋白的反应性。Western blot结果显示,过表达E2蛋白的293T细胞和感染CSFV的PK-15细胞中(感染后12 h)均出现了40 ku左右的特异性条带。IFA结果显示,感染CSFV的PK-15细胞中出现红色荧光。以上结果表明,制备的3D5 MAb均能够与过表达的和天然表达的E2蛋白有较强的反应性。利用一系列表达截短的重组E2片段,通过western blot鉴定3D5 MAb识别的抗原表位,结果显示,E2蛋白氨基酸序列中的157REKPFPHRMD167为3D5 MAb的抗原表位。本研究首次制备了CSFV E2蛋白的MAb,并对其进行了表位鉴定,为进一步深入研究CSFV E2蛋白的结构、功能、抗原表位的筛选及新疫苗的研制提供参考依据。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 e2蛋白 单克隆抗体 抗原表位
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牛病毒性腹泻病毒单克隆抗体的制备及捕获ELISA检测方法的建立
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作者 宋京格 周佳莹 +5 位作者 夏欣悦 王孟孟 李园 宋厚辉 徐义刚 王静 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第5期473-479,共7页
为建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的检测方法,本研究采用纯化的BVDV作为抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术筛选获得一株稳定分泌单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞株5C7,采用抗体分型试剂盒鉴定其亚类为IgG2α,经IFA鉴定显示MAb 5C7能够特异性... 为建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的检测方法,本研究采用纯化的BVDV作为抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术筛选获得一株稳定分泌单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞株5C7,采用抗体分型试剂盒鉴定其亚类为IgG2α,经IFA鉴定显示MAb 5C7能够特异性识别BVDV,利用间接ELISA测定其抗体效价为1:10^(6)。利用该BVDV特异性MAb作为检测抗体,兔源BVDV E2蛋白多克隆抗体(PAb)作为捕获抗体,经各反应条件的优化,建立了检测BVDV的抗原捕获ELISA(AC-ELISA)方法。采用该方法分别检测BVDV、牛传染性鼻气管炎病毒、牛细小病毒、牛轮状病毒、牛呼吸道合胞体病毒和牛副流感病毒3型等病毒,分析该方法的特异性;将10^(6.7)TCID_(50)的BVDV 10倍倍比稀释(10^(0)~10^(6)倍)稀释后,采用建立的AC-ELISA检测,评估该方法的敏感性;利用同一批次和不同批次E2蛋白PAb包被的酶标板,采用建立的AC-ELISA方法检测BVDV阳性及阴性样品,评估该方法的重复性。结果显示,该方法仅能检测到BVDV,与其余病毒均无交叉反应;对病毒BVDV的检测限为10~2TCID_(50);批内、批间重复性试验的变异系数均小于5%。利用该方法对618份牛血清和352份腹泻犊牛粪便样品检测,结果显示两种样品的阳性检出率分别为25.7%(159/618)和38.9%(137/352),与RT-PCR方法检测结果的符合率均达100%。此外,RT-PCR分析显示,阳性样品中BVDV-1的检出率为29.6%,为主要流行基因型,BVDV-2的检出率为0.9%。本研究建立的AC-ELISA方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可有效用于BVDV的检测,为BVDV的流行病学调查提供了技术支撑。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 抗原捕获eLISA e2蛋白 单克隆抗体
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H9N2亚型禽流感病毒多拷贝M2e蛋白单克隆抗体的制备
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作者 张民秀 谢芝勋 +5 位作者 李孟 罗思思 谢志勤 谢丽基 李丹 阮志华 《中国家禽》 北大核心 2024年第11期45-51,共7页
为制备H9N2亚型禽流感病毒(AIV)多拷贝M2e蛋白单克隆抗体,试验将纯化的3M2e重组蛋白免疫BALB/c小鼠;取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合,采用间接ELISA筛选出分泌抗体的杂交瘤细胞株;将获得的杂交瘤细胞株腹腔注射BALB/c小鼠制备腹水;... 为制备H9N2亚型禽流感病毒(AIV)多拷贝M2e蛋白单克隆抗体,试验将纯化的3M2e重组蛋白免疫BALB/c小鼠;取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合,采用间接ELISA筛选出分泌抗体的杂交瘤细胞株;将获得的杂交瘤细胞株腹腔注射BALB/c小鼠制备腹水;采用间接ELISA测定腹水效价,鼠源单克隆抗体亚类鉴定试剂盒检测单克隆抗体腹水,三株单克隆抗体重链亚型均为IgG1;Westernblot鉴定单克隆抗体的特异性;使用IFA鉴定3M2e蛋白在Sf9细胞的表达和检测H9N2亚型AIV在MDCK细胞的感染。结果显示:获得了3株分泌多拷贝M2e抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为4C7-B11、4E10-A10和5A12-B5;获得腹水的效价均为1∶1000000;三株单克隆抗体重链亚型均为IgG1;Westernblot鉴定三株单克隆抗体均能与2M2e、3M2e和4M2e原核重组蛋白及在Sf9细胞表达的3M2e发生特异性反应;IFA鉴定结果也显示三株单克隆抗体均能检测3M2e蛋白在Sf9细胞的表达,并且能检测到H9N2亚型AIV在MDCK细胞上的感染,出现特异性的绿色荧光;三株单克隆抗体重链亚型均为IgG1。研究获得了H9N2亚型AIV多拷贝M2e单克隆抗体,可用于Westernblot和IFA鉴定,为靶向M2e蛋白H9N2亚型禽流感疫苗的研究提供特异性的检测工具。 展开更多
关键词 禽流感病毒 M2e蛋白 蛋白表达 单克隆抗体
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猪瘟病毒E2蛋白纳米颗粒的制备及在家兔上的免疫原性分析
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作者 张晓玲 何兴林 +6 位作者 张梦迪 李鹏飞 孙玉梅 马海龙 朱红梅 张梦佳 李文涛 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第5期2301-2311,共11页
本研究旨在开发一种猪瘟E2纳米颗粒疫苗,并对其免疫原性进行分析。以猪瘟病毒石门株E2基因序列为模板,对其胞外域进行人源密码子优化,通过293F哺乳动物细胞真核表达系统制备E2、E2-pFc(E2与猪源抗体的Fc片段融合表达)、SpyTag-E2(E2与Sp... 本研究旨在开发一种猪瘟E2纳米颗粒疫苗,并对其免疫原性进行分析。以猪瘟病毒石门株E2基因序列为模板,对其胞外域进行人源密码子优化,通过293F哺乳动物细胞真核表达系统制备E2、E2-pFc(E2与猪源抗体的Fc片段融合表达)、SpyTag-E2(E2与SpyTag融合表达)以及纳米骨架蛋白LS(lumazine synthase-protein A),原核表达系统纯化纳米骨架蛋白mi3(mi3-SpyCatcher),进一步组装成纳米颗粒LS-E2-pFc NP和mi3-E2 NP,并通过透射电镜和动态光散射试验进行鉴定,各组蛋白分别与ISA201佐剂乳化,制备亚单位疫苗。选用1.5~2.0 kg重的日本长耳大白兔35只,随机分为7组,包括空白对照组(n=3)、PBS阴性对照组(n=3)、E2组(n=5)、E2-pFc组(n=5)、LS-E2-pFc NP组(n=5)、mi3-E2 NP组(n=5)和CSFV E2商业化亚单位疫苗组(n=3)。于0、21 d进行肌肉注射免疫,42 d将CSFV C株经耳缘静脉按照100 RID50·只-1进行攻毒,通过阻断ELISA、中和试验、体温监测和RT-qPCR等试验评估兔的特异性抗体水平、中和抗体水平、兔体定型热反应以及脾脏病毒载量。结果显示,各组分蛋白成功表达,纯化后的蛋白条带单一,纯度较高。透射电镜可观察到粒径在10~70 nm的纳米颗粒结构,动态光散射试验观察到mi3-E2平均粒径(68 nm)大于mi3(42.73 nm),LS-E2-pFc平均粒径(42.4 nm)大于LS(13 nm)。免疫试验结果表明,E2、E2-pFc、LS-E2-pFc NP、mi3-E2 NP疫苗和商业化亚单位疫苗均有良好的免疫效果,攻毒前7 d,血清中特异性抗体阻断率均在89%以上,组间差异不显著(P>0.05)。攻毒后,PBS阴性对照组出现典型的兔体定型热反应,其余免疫组的体温变化不明显;攻毒后7 d,E2、E2-pFc、LS-E2-pFc NP、mi3-E2 NP疫苗和商业化亚单位疫苗组的中和抗体效价分别为1∶10392.4、1∶37168.4、1∶75473.6、1∶20201.8、1∶2407,其中,LS-E2-pFc NP组的中和抗体水平最高。RT-qPCR结果显示,E2组有一只兔检出低拷贝的病毒载量,拷贝数为5.83 copies·μL^(-1),其余免疫组未检到病毒载量。以上结果显示LS-E2-pFc NP免疫组效果最好,中和抗体水平最高。这种“标记”疫苗可以对自然感染和免疫接种的动物进行鉴别诊断,有助于猪场净化猪瘟。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 e2亚单位疫苗 自组装纳米疫苗 中和抗体
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毛冬青皂苷E通过HIF-2α调控细胞焦亡对心肌梗死后心肌损伤的影响
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作者 喻丽 金静 +3 位作者 刘芷静 曾曼钰 陈悠优 徐琪 《西安交通大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第4期599-605,共7页
目的探究毛冬青皂苷E调控缺氧诱导因子-2α(HIF-2α)介导的心肌细胞焦亡对心肌梗死(MI)后心肌损伤的影响及其可能的作用机制。方法将30只大鼠随机分为假手术组、MI组及毛冬青皂苷E组,每组10只。培养大鼠心肌细胞系H9C2并分为对照组、缺... 目的探究毛冬青皂苷E调控缺氧诱导因子-2α(HIF-2α)介导的心肌细胞焦亡对心肌梗死(MI)后心肌损伤的影响及其可能的作用机制。方法将30只大鼠随机分为假手术组、MI组及毛冬青皂苷E组,每组10只。培养大鼠心肌细胞系H9C2并分为对照组、缺氧组、毛冬青皂苷E组及过表达HIF-2α组。Masson染色观察心肌组织纤维化水平及梗死面积。Western blotting检测HIF-2α、NLRP3、Caspase-1及GSDMD蛋白表达。RT-qPCR检测HIF-2α、NLRP3、Caspase-1及GSDMD mRNA表达。EdU试剂盒检测心肌细胞增殖能力。免疫荧光染色检测心肌细胞中NLRP3、Caspase-1及GSDMD蛋白表达。结果与假手术组相比,MI组大鼠心肌纤维化水平增高,梗死面积增加(P<0.05),心肌组织中HIF-2α蛋白表达增加,焦亡相关蛋白NLRP3、Caspase-1及GSDMD蛋白表达增加(P<0.05);与MI组相比,毛冬青皂苷E组大鼠心肌纤维化水平降低,梗死面积减少(P<0.05),心肌组织中HIF-2α蛋白表达增加,NLRP3、Caspase-1及GSDMD蛋白表达减少(P<0.05)。与对照组相比,缺氧组H9C2细胞增殖能力降低,心肌细胞中HIF-2α、NLRP3、Caspase-1及GSDMD mRNA与蛋白表达增加(P<0.05);与缺氧组相比,毛冬青皂苷E组H9C2细胞增殖能力增加,心肌细胞中HIF-2α、NLRP3、Caspase-1及GSDMD mRNA表达减少(P<0.05),过表达HIF-2α组H9C2细胞中HIF-2α蛋白表达增加,NLRP3、Caspase-1及GSDMD蛋白表达减少(P<0.05)。结论毛冬青皂苷E可能通过上调HIF-2α抑制心肌细胞焦亡而改善心肌损伤。 展开更多
关键词 心肌梗死(MI) 毛冬青皂苷e 缺氧诱导因子-2α(HIF-2α) 细胞焦亡 缺氧
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虫草素对RSL3诱导肝癌HepG2细胞铁死亡的增强作用及其机制
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作者 林涵 杨秋燕 +2 位作者 钟洁月 陈博伦 童汪霞 《吉林大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第3期576-589,共14页
目的:探讨虫草素对铁死亡诱导剂RSL3诱导肝癌HepG2细胞铁死亡的增强作用,并阐明其潜在的作用机制。方法:HepG2细胞分为对照组,RSL3组,低、中和高剂量虫草素组,RSL3组+低、中和高剂量虫草素组,RSL3+虫草素(中剂量)+铁死亡抑制剂Ferrostat... 目的:探讨虫草素对铁死亡诱导剂RSL3诱导肝癌HepG2细胞铁死亡的增强作用,并阐明其潜在的作用机制。方法:HepG2细胞分为对照组,RSL3组,低、中和高剂量虫草素组,RSL3组+低、中和高剂量虫草素组,RSL3+虫草素(中剂量)+铁死亡抑制剂Ferrostatin-1(Fer-1)组和RSL3+虫草素(中剂量)+铁死亡抑制剂Liproxstatin-1 (Lip-1)组。采用0、1、5、10、15和20μmol·L^(-1)RSL3分别干预HepG2、Huh-7及HCCLM3细胞24、48以及72 h,采用细胞计数试剂盒8 (CCK-8)法检测各细胞活性,筛选RSL3最佳作用浓度和作用时间。分别采用0、50、100、200、400、600、800、1 000和1 200μmol·L^(-1)虫草素干预HepG2细胞24、48及72 h,采用CCK-8法检测细胞存活率,计算半数抑制浓度(IC50)值,筛选虫草素最佳作用浓度和作用时间。使用凋亡抑制剂Z-VAD-FMK、细胞自噬抑制剂Chloroquine (CQ)、细胞坏死性凋亡抑制剂Necrostatin-1 (Nec-1)、 Fer-1、 Lip-1、Deferasirox和四甲基哌啶氧化物(TEMPO)分别干预HepG2细胞,计算HepG2细胞存活率。2',7'-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针法检测各组HepG2细胞中活性氧(ROS)水平,C11 BODIPY 581/591荧光探针法检测各组HepG2细胞中脂质过氧化(LPO)水平,Fe Rho Nox-1荧光探针法检测各组HepG2细胞中亚铁离子(Fe2+)水平,试剂盒检测HepG2细胞中谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)水平,Western blotting法检测各组HepG2细胞中铁死亡相关蛋白、核转录因子E2相关因子2 (Nrf2)和血红素氧合酶1 (HO-1)蛋白表达水平,透射电镜观察各组HepG2细胞超微结构形态表现。结果:CCK-8法,0.56μmol·L^(-1)RSL3干预细胞时,3种细胞活性差异较明显。与0μmol·L^(-1)RSL3组比较,6.4和12.8μmol·L^(-1)RSL3组3种细胞存活率均明显降低(P<0.05)。HepG2细胞的IC50值最大,因此选择HepG2细胞进行后续实验。与0μmol·L^(-1)虫草素组比较,200、400、600、800、1 000和2 000μmol·L^(-1)虫草素组HepG2细胞存活率均明显降低(P<0.05或P<0.01)。选择0.5倍IC50值(267.9μmol·L^(-1))、1倍IC50值(535.8μmol·L^(-1))和1.5倍IC50值(803.7μmol·L^(-1))分别作为低、中及高剂量虫草素组,干预时间为24 h。与对照组比较,低、中和高剂量虫草素组HepG2细胞存活率均明显降低(P<0.05或P<0.01)。与低、中和高剂量虫草素组比较,Z-VAD-FMK+低、中和高剂量虫草素组HepG2细胞存活率均明显升高(P<0.05或P<0.01),Fer-1+中和高剂量虫草素组及Lip-1+低、中和高剂量虫草素组HepG2细胞存活率均明显升高(P<0.05)。与对照组比较,RSL3组、 RSL3+低、中和高剂量虫草素组、RSL3+虫草素+Fer-1组和RSL3+虫草素+Lip-1组HepG2细胞存活率均明显降低(P<0.05或P<0.01);与RSL3组比较,RSL3+低、中和高剂量虫草素组HepG2细胞存活率均明显降低(P<0.05)。DCFH-DA荧光探针法,与对照组比较,中和高剂量虫草素组、RSL3组和RSL3+低、中和高剂量虫草素组细胞中ROS水平均明显升高(P<0.05或P<0.01);与RLS3组比较,RSL3+低、中和高剂量虫草素组HepG2细胞中ROS水平均明显升高(P<0.05或P<0.01)。C11 BODIPY 581/591荧光探针法,与对照组比较,中和高剂量虫草素组、RSL3组和RSL3+低、中和高剂量虫草素组HepG2细胞中LPO水平均明显升高(P<0.05或P<0.01);与RSL3组比较,RSL3+低、中和高剂量虫草素组HepG2细胞中LPO水平均明显升高(P<0.05或P<0.01)。Fe Rho Nox-1荧光探针法,与对照组比较,中和高剂量虫草素组、 RSL3组和RSL3+低、中和高剂量虫草素组HepG2细胞中Fe2+水平均明显升高(P<0.05或P<0.01);与RSL3组比较,RSL3+低、中和高剂量虫草素组HepG2细胞中Fe2+水平均明显升高(P<0.05或P<0.01)。与对照组比较,高剂量虫草素组、RSL3组和RSL3+低、中和高剂量虫草素组HepG2细胞中MAD水平均明显升高(P<0.05或P<0.01);与RSL3组比较,RSL3+低、中和高剂量虫草素组HepG2细胞中MAD水平均明显升高(P<0.05或P<0.01)。与对照组比较,中和高剂量虫草素组、RSL3组和RSL3+低、中和高剂量虫草素组HepG2细胞中GSH水平均明显降低(P<0.05或P<0.01);与RSL3组比较,RSL3+低、中和高剂量虫草素组HepG2细胞中GSH水平均明显降低(P<0.05)。与对照组比较,低和中剂量虫草素组HepG2细胞超微结构变化不明显,高剂量虫草素组部分细胞线粒体嵴减少,线粒体膜可见轻度肿胀和膜密度增高,线粒体膜中内膜结构轻度扭曲,RSL3组和RSL3+低、中及高剂量虫草素组均表现出铁死亡细胞超微结构变化;与RSL3组比较,RSL3+低、中和高剂量虫草素组表现为细胞线粒体膜破裂并伴有膜密度增高,线粒体膜中的内膜结构异常扭曲或扩张,线粒体嵴减少甚至消失。Western blotting法,与对照组比较,中和高剂量虫草素组HepG2细胞中FTH1和GPX4蛋白表达水平均明显降低(P<0.05或P<0.01),Nrf2和HO-1蛋白表达水平均明显降低(P<0.05或P<0.01),RSL3组和RSL3+虫草素+Fer-1组HepG2细胞中GPX4蛋白表达水平均明显降低(P<0.05或P<0.01);与RSL3组比较,RSL3+低、中和高剂量虫草素组HepG2细胞中GPX4蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。结论:虫草素具有明显增强RSL3诱导肝癌HepG2细胞铁死亡的作用,并能够下调HepG2细胞中Nrf2和HO-1蛋白表达。 展开更多
关键词 肝细胞癌 虫草素 铁死亡 RSL3 核因子e2相关因子2/血红素氧合酶1信号通路
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2型糖尿病患者使用E-health管理疾病意愿与影响机制
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作者 陈子砚 张晓悦 +1 位作者 顾亦梧 常春 《北京大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第3期522-528,共7页
目的:探讨2型糖尿病患者对于E-health技术,如应用程序(application,APP)或微信小程序的使用意愿及其影响因素,分析具体的作用机制。方法:使用扩展的技术接受模型为理论依据,于2024年11—12月选取全国东中西部地区6省或直辖市的2型糖尿... 目的:探讨2型糖尿病患者对于E-health技术,如应用程序(application,APP)或微信小程序的使用意愿及其影响因素,分析具体的作用机制。方法:使用扩展的技术接受模型为理论依据,于2024年11—12月选取全国东中西部地区6省或直辖市的2型糖尿病患者559例进行横断面问卷调查,调查患者使用APP或微信小程序的意愿及影响因素,使用相关分析和结构方程模型分析患者的使用意愿影响因素,并探究影响机制。结果:共调查559例患者,平均使用意愿得分为10.68分(总分15分),年龄与文化程度是使用意愿的影响因素,年龄较低、文化程度为高中/大专者使用意愿更强,差异有统计学意义(P<0.05);Spearman相关性分析显示感知有用性、感知易用性、疾病感知、社会支持、自我效能、外部线索均与使用意愿正相关,感知障碍与使用意愿呈负相关,差异均有统计学意义(P<0.05)。结构方程模型显示感知有用性(β=0.375,P<0.001)、疾病感知(β=-0.240,P<0.001)、自我效能(β=0.313,P=0.019)、社会支持(β=-0.336,P=0.042)、外部线索(β=0.609,P<0.001)对于患者的使用意愿有直接影响。感知易用性以感知有用性为中介,对使用意愿有间接影响,总效应为0.374;自我效能通过疾病感知的部分中介效应影响使用意愿;外部线索通过感知有用性的部分中介效应影响使用意愿;感知障碍以感知有用性为中介影响使用意愿;以上差异均有统计学意义(P<0.05),对使用意愿的影响总效应最高为外部线索(β=0.672)。结论:2型糖尿病患者对于E-health技术如APP或微信小程序有较高的使用意愿,年龄较低、文化程度为高中/大专者使用意愿更强,患者感知有用性、自我效能、外部线索的增加有利于提升使用意愿,而高疾病感知与高社会支持者的使用意愿有所下降,感知易用性、自我效能等也可通过多重机制影响使用意愿。 展开更多
关键词 糖尿病 e-HeALTH 使用意愿 结构方程模型 技术接受模型
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小鼠间充质干细胞SENP3缺失通过GLI2/COX2信号通路促进破骨细胞形成
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作者 李甜甜 刘志强 《中国生物化学与分子生物学报》 北大核心 2025年第6期862-870,共9页
间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)通过分泌核因子受体激活因子-κB配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand, RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(marcrophage CSF,M-CSF)等关键细胞因子来诱导多个单核巨噬细胞融... 间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)通过分泌核因子受体激活因子-κB配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand, RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(marcrophage CSF,M-CSF)等关键细胞因子来诱导多个单核巨噬细胞融合,形成多核巨噬细胞,从而支持破骨细胞生成。SUMO特异性蛋白酶3(SUMO-specific protease 3,SENP3)通过去SUMO化修饰蛋白质,进而影响底物蛋白质的稳定性、定位和活性。在本实验室前期工作基础上,我们发现在MSC中敲除SENP3的小鼠破骨细胞数量增加(P<0.001),进一步探究其机制,利用免疫荧光以及Western印迹检测发现,SENP3敲除激活刺猬因子(Hedgehog, Hh)信号通路提高了转录因子Gli家族锌指2(glioma-associated oncogene homolog 2,Gli2)的表达。CHIP-qPCR结果显示,Gli2通过结合环氧化酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)启动子区域-1 235~-1 249和-1 158~-1 172促进COX2转录(P<0.05);同时通过ELISA法检测COX2主要分泌产物前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)的水平,发现敲除SENP3的MSC的培养基上清中PGE2的含量增加(P<0.001)。已知PGE2通过前列腺素E受体2(E-type prostanoid receptor 2,EP2)和前列腺素E受体4(E-type prostanoid receptor 4,EP4)介导细胞迁移和破骨细胞生成,在研究中发现,EP4受体在分化的破骨细胞中表达升高(P<0.01)。使用EP4受体的抑制剂能够显著降低活化T细胞核因子(nuclear factor-activated T cell 1, NFATc1)、组织蛋白酶K(cathepsin K, CTSK)和抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase, TRAP)基因的表达,减少破骨细胞生成(P<0.001),结果表明,EP4受体在PGE2介导的破骨细胞分化中发挥关键作用。总之,小鼠间充质干细胞SENP3缺失通过激活Hh信号通路促进COX2转录和PGE2分泌,从而促进破骨细胞形成。 展开更多
关键词 间充质干细胞 破骨细胞 SUMO特异性蛋白酶3 环氧化酶2 Gli家族锌指2 前列腺素e受体4
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UBE2O: A Unique Ubiquitin-conjugating Enzyme with Diverse Biological andPathophysiological Activities
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作者 MAO Chen-Yu WANG Ya-Li MAO Xin-Liang 《中国生物化学与分子生物学报》 北大核心 2025年第6期783-797,共15页
UBE2O is a distinctive ubiquitin-conjugating enzyme characterized by its large size(1292 residues)and dual E2/E3 enzymatic activities,enabling diverse ubiquitylation types.Unlike typical E2 enzymes(150~200 residues),U... UBE2O is a distinctive ubiquitin-conjugating enzyme characterized by its large size(1292 residues)and dual E2/E3 enzymatic activities,enabling diverse ubiquitylation types.Unlike typical E2 enzymes(150~200 residues),UBE2O’s multifunctionality allows it to regulate substrate degradation,subcellular localization,and functional modulation.Emerging studies highlight its critical roles in protein quality control,erythroid differentiation,metabolic regulation,and maintenance of circadian rhythm.Dysregulation of UBE2O is implicated in various diseases,including cancers,neurodegenerative disorders,and metabolic diseases.This review extensively discusses the unique structural features,diverse biological functions,and pathological roles of UBE2O,as well as its therapeutic potential for associated diseases. 展开更多
关键词 protein ubiquitylation ubiquitin-conjugating enzyme e2O(UBe2O) monoubiquitylation multi-monoubiquitylation polyubiquitylation
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E2F家族对肌肉骨骼系统发育和相关疾病的影响
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作者 王舒莞 汪琢 《生物化学与生物物理进展》 北大核心 2025年第4期915-929,共15页
E2F家族是介导腺病毒E1a诱导E2基因的转录因子家族,在调控细胞周期进程、调节细胞增殖、诱导细胞凋亡的过程中起着至关重要的作用。鉴于其功能主要与细胞增殖分化有关,早期关于E2F家族的研究多集中于E2F与癌症的关系。随着研究范围的不... E2F家族是介导腺病毒E1a诱导E2基因的转录因子家族,在调控细胞周期进程、调节细胞增殖、诱导细胞凋亡的过程中起着至关重要的作用。鉴于其功能主要与细胞增殖分化有关,早期关于E2F家族的研究多集中于E2F与癌症的关系。随着研究范围的不断扩大,研究者发现,E2F家族在肌肉骨骼系统的发育过程以及相关疾病的作用机制中独立发挥作用。E2F家族可以通过调控干细胞、成骨细胞、破骨细胞、软骨细胞和成肌细胞的细胞周期和增殖过程,并且作为多个通路下游以及微RNA (microRNA)的靶点基因,减缓或加重肌肉骨骼系统疾病进展。目前关于E2F家族在肌肉骨骼系统中的作用还没有系统的总结和梳理,本文主要就E2F家族在肌肉骨骼系统中的生理学功能和E2F家族在肌肉骨骼系统相关疾病中的作用机制进行综述,希望为后续研究和疾病诊疗提供依据。 展开更多
关键词 e2F家族 肌肉 骨肉瘤 骨关节炎
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基于重组E^(rns)和E2蛋白的检测猪瘟病毒抗体的间接ELISA的建立
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作者 向蕊 朱利塞 +3 位作者 赵小刚 应碧云 王贵平 贾爱卿 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第1期134-140,共7页
本研究利用原核系统表达了猪瘟病毒(CSFV)E^(rns)和E2串联蛋白,通过切胶纯化的方法得到高纯度的目的蛋白作为包被抗原,经过各反应条件的优化初步建立ELISA方法,并对方法的特异性、敏感性和重复性进行检验,与商品化试剂盒以及IFA试验进... 本研究利用原核系统表达了猪瘟病毒(CSFV)E^(rns)和E2串联蛋白,通过切胶纯化的方法得到高纯度的目的蛋白作为包被抗原,经过各反应条件的优化初步建立ELISA方法,并对方法的特异性、敏感性和重复性进行检验,与商品化试剂盒以及IFA试验进行平行比较,评估方法的准确性。结果表明建立了一种特异性强、敏感性好、准确率高且适用于临床猪瘟抗体检测的间接ELISA方法。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 e2蛋白 e^(rns)蛋白 串联表达 eLISA
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LncRNA CASC9/miR-195-5p/E2F7信号通路在二氢杨梅素抑制食管鳞状细胞癌增殖和转移中的作用研究
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作者 郑璇 黄兰香 +4 位作者 崔逸爽 吴亚男 洪紫谦 张梦诗 孙国贵 《中华中医药学刊》 北大核心 2025年第8期65-70,I0013-I0018,共12页
目的探讨二氢杨梅素(dihydromyricetin,DMY)对食管鳞癌(Esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)增殖和转移的影响及是否由LncRNA CASC9/miR-195-5p/E2F7轴介导。方法采用梯度浓度(0、25、50、100μmol/L)的DMY处理ESCC细胞,以探究DMY... 目的探讨二氢杨梅素(dihydromyricetin,DMY)对食管鳞癌(Esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)增殖和转移的影响及是否由LncRNA CASC9/miR-195-5p/E2F7轴介导。方法采用梯度浓度(0、25、50、100μmol/L)的DMY处理ESCC细胞,以探究DMY对ESCC细胞增殖、迁移和侵袭的影响。利用生物信息学手段预测了ESCC中LncRNA CASC9/miR-195-5p/E2F7轴之间是否存在相互作用。实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)实验检测细胞中LncRNA CASC9、miR-195-5p和E2F7的表达,RT-qPCR、蛋白免疫印迹(Western blot)和双荧光素酶报告基因实验进一步验证其调控关系。通过细胞计数试剂盒-8(Cell counting kit-8,CCK-8)、集落形成、划痕以及Transwell侵袭实验分别检测细胞活性、增殖、迁移以及侵袭能力。应用Western blot实验检测上皮间充质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)标志物如E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-Cadherin)、波形蛋白(Vimentin)的表达。结果DMY可以显著抑制ESCC细胞增殖、迁移和侵袭。生物信息学分析及细胞水平验证发现LncRNA CASC9在ESCC中高表达,DMY处理后可通过下调ESCC细胞中LncRNA CASC9的表达水平,从而抑制ESCC细胞增殖、迁移和侵袭。此外,miR-195-5p在ESCC中表达下调,而E2F7表达上调。RT-qPCR、Western blot和双荧光素酶报告基因实验进一步证实LncRNA CASC9通过吸附miR-195-5p进而调控E2F7的表达。敲低E2F7可以逆转敲低miR-195-5p对ESCC细胞增殖、转移以及EMT进程的促进作用,而过表达E2F7可逆转过表达miR-195-5p产生的抑制作用。结论DMY可通过LncRNA CASC9/miR-195-5p/E2F7轴抑制ESCC的增殖和转移。 展开更多
关键词 二氢杨梅素 LncRNA CASC9 miR-195-5p e2F7 食管鳞癌 转移
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麦角硫因激活核因子E2相关因子2/血红素加氧酶1信号通路改善血管性痴呆大鼠认知功能障碍研究
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作者 刘青芳 韦有仕 +4 位作者 肖斐 周春香 刘群 袁慧 曹天然 《中国全科医学》 北大核心 2025年第17期2156-2162,共7页
背景麦角硫因与阿尔茨海默病患者认知功能障碍的严重程度有关,并具有神经保护的作用。但其是否能改善血管性痴呆(VD)大鼠认知功能障碍暂不明晰,且其具体作用机制尚不清楚。目的探讨麦角硫因通过激活核因子E2相关因子2/血红素加氧酶1(NRF... 背景麦角硫因与阿尔茨海默病患者认知功能障碍的严重程度有关,并具有神经保护的作用。但其是否能改善血管性痴呆(VD)大鼠认知功能障碍暂不明晰,且其具体作用机制尚不清楚。目的探讨麦角硫因通过激活核因子E2相关因子2/血红素加氧酶1(NRF2/HO-1)信号通路改善VD大鼠认知功能障碍的作用机制。方法于2021年8月—2023年9月,选取成年雄性SD大鼠48只,随机分为对照组、模型组、麦角硫因组、麦角硫因+NRF2抑制剂(ML385)组,每组12只。除对照组外,其他各组采用双侧颈总动脉永久性结扎法建立VD大鼠模型,麦角硫因组于造模前2周开始每天腹腔注射麦角硫因2 mg/kg,持续4周;麦角硫因+ML385组在造模前2周开始每天腹腔注射麦角硫因2 mg/kg和ML38530 mg/kg,持续4周。通过Morris水迷宫测试、HE染色以及TUNEL染色检测麦角硫因对VD大鼠认知功能障碍的影响;Western blotting法检测各蛋白质表达水平,ELISA法检测氧化应激因子及炎症因子水平。结果本研究成功建立了VD大鼠模型。与对照组比较,模型组大鼠的逃避潜伏期延长,目标象限停留时间百分比降低(P<0.05),大鼠海马组织中神经元数量减少,细胞萎缩,形态异常,细胞核深度染色,脑组织神经元凋亡率增加(P<0.05),海马组织中NRF2、HO-1和醌氧化还原酶1(NQO1)蛋白表达水平降低(P<0.05),超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平降低,丙二醛(MDA)水平增加(P<0.05),白介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平增加(P<0.05);与模型组比较,麦角硫因组大鼠逃避潜伏期缩短,目标象限停留时间百分比升高(P<0.05),海马组织病理程度减轻,脑组织神经元凋亡率降低(P<0.05),海马组织NRF2、HO-1和NQO1蛋白表达水平升高(P<0.05),SOD、GSH-Px水平升高,MDA水平降低(P<0.05),IL-1β、TNF-α和IL-6水平降低(P<0.05);与麦角硫因组比较,麦角硫因+ML385组大鼠逃避潜伏期延长,目标象限停留时间百分比降低(P<0.05),海马组织损伤严重,脑组织神经元凋亡率增加(P<0.05),海马组织NRF2、HO-1和NQO1蛋白表达水平降低(P<0.05),SOD、GSH-Px水平降低,MDA水平升高(P<0.05),IL-1β、TNF-α和IL-6水平升高(P<0.05)。结论麦角硫因通过激活NRF2/HO-1信号通路改善VD大鼠认知功能障碍。 展开更多
关键词 血管性痴呆 核因子e2相关因子2/血红素加氧酶1信号通路 氧化应激反应 炎症损伤 麦角硫因
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