目的研究线粒体转录因子A(TFAM)对宫颈癌HeLa细胞及骨肉瘤U2OS细胞的线粒体功能、自噬、增殖、侵袭、迁移的影响。方法HeLa、U2OS细胞转染TFAM小干扰片段(si-TFAM)下调TFAM表达,Mito-Tracker Red CMXRos染色结合激光共聚焦显微镜检测线...目的研究线粒体转录因子A(TFAM)对宫颈癌HeLa细胞及骨肉瘤U2OS细胞的线粒体功能、自噬、增殖、侵袭、迁移的影响。方法HeLa、U2OS细胞转染TFAM小干扰片段(si-TFAM)下调TFAM表达,Mito-Tracker Red CMXRos染色结合激光共聚焦显微镜检测线粒体膜电位(MMP)、MitoSOX^(TM)Red标记法检测线粒体活性氧(mtROS)水平、实时定量PCR检测线粒体DNA(mtDNA)的表达,免疫荧光细胞化学染色检测自噬体数量的变化。Western blot法检测TFAM、微管相关蛋白1轻链3A/B(LC3A/B)、自噬相关基因2A(ATG2A)、ATG2B、ATG9A、锌指转录因子Snail、基质金属蛋白酶2(MMP2)和MMP9的表达。CCK-8法、平板集落形成实验检测细胞增殖,Transwell^(TM)实验、划痕愈合实验检测细胞侵袭、迁移的变化。结果下调TFAM表达导致HeLa及U2OS细胞MMP减少,mtDNA拷贝数减少,mtROS产生量增加。LC3A/B蛋白含量较对照组明显下降,胞质内自噬体数量明显减少,自噬早期阶段蛋白ATG2B、ATG9A表达量明显减少。HeLa及U2OS细胞Snail、MMP2和MMP9蛋白表达均减少。干扰TFAM表达,抑制HeLa及U2OS细胞的增殖、侵袭、迁移能力。结论下调TFAM表达抑制线粒体功能,延缓自噬进程,降低宫颈癌细胞及骨肉瘤细胞的增殖、侵袭、迁移能力。展开更多
目的:本研究旨在深入了解ALOX12P2在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)中的表达和定位,以及其对口腔鳞状细胞癌细胞活力、迁移及侵袭产生的影响。方法:(1)通过数据库UALCAN(the University of Alabama at Birmingham c...目的:本研究旨在深入了解ALOX12P2在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)中的表达和定位,以及其对口腔鳞状细胞癌细胞活力、迁移及侵袭产生的影响。方法:(1)通过数据库UALCAN(the University of Alabama at Birmingham cancer data analysis portal),对头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)组织中ALOX12P2的表达及其与临床病理特征的相关性进行分析;利用GDC和UCSC Xena数据库分析ALOX12P2在OSCC中的表达和对生存预后的影响。(2)对OSCC细胞系中ALOX12P2的表达进行实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测。(3)ALOX12P2的亚细胞定位通过RNA核质分离实验检测。(4)对CAL-27细胞建立AL-OX12P2敲减组(SS-ALOX12P2组)和敲减对照组(SS-NC组);对HN30细胞建立ALOX12P2过表达组(ALOX12P2组)和过表达对照组(vector组);由CCK-8和Transwell评估ALOX12P2对细胞活力、迁移和侵袭能力的影响。(5)由Western blot实验检测ALOX12P2表达水平改变后对上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关基因以及PI3K/AKT通路的影响。结果:与正常组织相比,ALOX12P2在HNSCC和OSCC组织中的表达较高,其表达与不良预后有关;RT-qPCR结果显示,在6种OSCC细胞系中,ALOX12P2的相对表达水平均高于正常细胞(P<0.05);RNA核质分离结果显示,ALOX12P2定位于细胞核;与SS-NC组比较,SS-ALOX12P2组中ALOX12P2相对表达量明显降低(P<0.01),细胞活力、迁移及侵袭能力也明显降低(P<0.01);与vector组相比,ALOX12P2组中AL-OX12P2相对表达量明显增高(P<0.01),细胞活力、迁移及侵袭能力也明显升高(P<0.01);Western blot结果显示,敲减ALOX12P2导致E-钙粘蛋白(E-cadherin)的蛋白水平升高,N-钙粘蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的蛋白水平降低(P<0.01);ALOX12P2过表达而结果显示相反(P<0.01);敲减ALOX12P2导致p-PI3K和p-AKT的蛋白表达减少(P<0.01),过表达ALOX12P2则显示p-PI3K和p-AKT的蛋白表达增多(P<0.01)。结论:在OSCC中,ALOX12P2呈现出较高的表达水平,并且能促进OSCC细胞活力、迁移及侵袭。这种作用可能与ALOX12P2激活PI3K/AKT信号通路有关,进而促进了EMT过程的发生。展开更多
文摘目的研究线粒体转录因子A(TFAM)对宫颈癌HeLa细胞及骨肉瘤U2OS细胞的线粒体功能、自噬、增殖、侵袭、迁移的影响。方法HeLa、U2OS细胞转染TFAM小干扰片段(si-TFAM)下调TFAM表达,Mito-Tracker Red CMXRos染色结合激光共聚焦显微镜检测线粒体膜电位(MMP)、MitoSOX^(TM)Red标记法检测线粒体活性氧(mtROS)水平、实时定量PCR检测线粒体DNA(mtDNA)的表达,免疫荧光细胞化学染色检测自噬体数量的变化。Western blot法检测TFAM、微管相关蛋白1轻链3A/B(LC3A/B)、自噬相关基因2A(ATG2A)、ATG2B、ATG9A、锌指转录因子Snail、基质金属蛋白酶2(MMP2)和MMP9的表达。CCK-8法、平板集落形成实验检测细胞增殖,Transwell^(TM)实验、划痕愈合实验检测细胞侵袭、迁移的变化。结果下调TFAM表达导致HeLa及U2OS细胞MMP减少,mtDNA拷贝数减少,mtROS产生量增加。LC3A/B蛋白含量较对照组明显下降,胞质内自噬体数量明显减少,自噬早期阶段蛋白ATG2B、ATG9A表达量明显减少。HeLa及U2OS细胞Snail、MMP2和MMP9蛋白表达均减少。干扰TFAM表达,抑制HeLa及U2OS细胞的增殖、侵袭、迁移能力。结论下调TFAM表达抑制线粒体功能,延缓自噬进程,降低宫颈癌细胞及骨肉瘤细胞的增殖、侵袭、迁移能力。
文摘目的:本研究旨在深入了解ALOX12P2在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)中的表达和定位,以及其对口腔鳞状细胞癌细胞活力、迁移及侵袭产生的影响。方法:(1)通过数据库UALCAN(the University of Alabama at Birmingham cancer data analysis portal),对头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)组织中ALOX12P2的表达及其与临床病理特征的相关性进行分析;利用GDC和UCSC Xena数据库分析ALOX12P2在OSCC中的表达和对生存预后的影响。(2)对OSCC细胞系中ALOX12P2的表达进行实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测。(3)ALOX12P2的亚细胞定位通过RNA核质分离实验检测。(4)对CAL-27细胞建立AL-OX12P2敲减组(SS-ALOX12P2组)和敲减对照组(SS-NC组);对HN30细胞建立ALOX12P2过表达组(ALOX12P2组)和过表达对照组(vector组);由CCK-8和Transwell评估ALOX12P2对细胞活力、迁移和侵袭能力的影响。(5)由Western blot实验检测ALOX12P2表达水平改变后对上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关基因以及PI3K/AKT通路的影响。结果:与正常组织相比,ALOX12P2在HNSCC和OSCC组织中的表达较高,其表达与不良预后有关;RT-qPCR结果显示,在6种OSCC细胞系中,ALOX12P2的相对表达水平均高于正常细胞(P<0.05);RNA核质分离结果显示,ALOX12P2定位于细胞核;与SS-NC组比较,SS-ALOX12P2组中ALOX12P2相对表达量明显降低(P<0.01),细胞活力、迁移及侵袭能力也明显降低(P<0.01);与vector组相比,ALOX12P2组中AL-OX12P2相对表达量明显增高(P<0.01),细胞活力、迁移及侵袭能力也明显升高(P<0.01);Western blot结果显示,敲减ALOX12P2导致E-钙粘蛋白(E-cadherin)的蛋白水平升高,N-钙粘蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的蛋白水平降低(P<0.01);ALOX12P2过表达而结果显示相反(P<0.01);敲减ALOX12P2导致p-PI3K和p-AKT的蛋白表达减少(P<0.01),过表达ALOX12P2则显示p-PI3K和p-AKT的蛋白表达增多(P<0.01)。结论:在OSCC中,ALOX12P2呈现出较高的表达水平,并且能促进OSCC细胞活力、迁移及侵袭。这种作用可能与ALOX12P2激活PI3K/AKT信号通路有关,进而促进了EMT过程的发生。
