标准模块化设计在基因工程实验课程教学中的应用 被引量：4

1

作者 韦宇拓 杜丽琴 +2 位作者 陆坚 卢春花 梁晓夏 《安徽农业科学》 CAS 2012年第18期9959-9960,共2页

针对目前基因工程实验课程存在的不足,根据该课程内容的特点进行模块化设计,将相关的实验课程划分成多个可以独立授课的模块,每一个模块都包含标准化的基础实验技能,而这些模块又可以组成系统一体化的综合实验,让学生先按照顺序掌握基... 针对目前基因工程实验课程存在的不足,根据该课程内容的特点进行模块化设计,将相关的实验课程划分成多个可以独立授课的模块,每一个模块都包含标准化的基础实验技能,而这些模块又可以组成系统一体化的综合实验,让学生先按照顺序掌握基本模块的实验操作基本技能,并对单个模块的实验技能进行考核,合格后才能进入下一步实验,这将可以大大提高基因工程实验课的教学效果,并促进学生对理论知识的掌握和实验技能的提高。 展开更多

关键词 基因工程 实验课程 模块化

在线阅读 下载PDF 职称材料

牛链球菌L-(+)-乳酸脱氢酶基因的克隆及在大肠杆菌中表达 被引量：4

2

作者 张黎 韦宇拓 +2 位作者 黄彦 杜丽琴 黄日波 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期24-28,共5页

利用PCR方法从牛链球菌(Streptococcus bovis)基因组DNA中扩增出了L(+)乳酸脱氢酶基因(ldh),并将其连接到表达载体pSE380上,得到重组质粒pSEldh,将重组质粒转化到大肠杆菌菌株JM109。利用SDS-PAGE分析ldh表达产物的分子量为36KD,重组菌... 利用PCR方法从牛链球菌(Streptococcus bovis)基因组DNA中扩增出了L(+)乳酸脱氢酶基因(ldh),并将其连接到表达载体pSE380上,得到重组质粒pSEldh,将重组质粒转化到大肠杆菌菌株JM109。利用SDS-PAGE分析ldh表达产物的分子量为36KD,重组菌株的乳酸脱氢酶酶活力为168.2U/mL,最适反应温度25℃,最适作用pH为5.0,重组质粒的稳定性达99.9%。 展开更多

关键词 L-乳酸 L-(+)-乳酸脱氢酶 克隆 表达 牛链球菌 L-(+)-乳酸 脱氢酶基因 大肠杆菌 链球菌 基因组DNA

在线阅读 下载PDF 职称材料

生物技术专业创新人才培养模式探索与实践 被引量：9

3

作者 冯家勋 白先放 +4 位作者 何勇强 韦宇拓 金健 梁静娟 卢春花 《安徽农业科学》 CAS 2018年第31期222-225,共4页

针对生物技术专业毕业生动手能力不足、创新能力不强的现状,提出全方位的生物技术专业创新人才培养模式,以"培养学生创新意识和创新能力"为改革主线,构建"实验教学(示范)中心、(国家)重点实验室研究所、校内外实习基地&q... 针对生物技术专业毕业生动手能力不足、创新能力不强的现状,提出全方位的生物技术专业创新人才培养模式,以"培养学生创新意识和创新能力"为改革主线,构建"实验教学(示范)中心、(国家)重点实验室研究所、校内外实习基地"三大平台,推行"培养创新能力的课程体系、研讨式教学方法、本科教学的高水平创新教学团队、启蒙科学思维创新意识的教授博士论坛、以生物驿站为核心营造本科生主体的学术氛围"五大举措,实施"实验教学创新体系、结合科研的毕业论文、大学生创新项目、省部国家级学科竞赛"四大工程,促进本科教学与科研实践的深度融合,激发了学生的自主学习热情,为全面提升生物技术专业人才培养质量提供参考。 展开更多

关键词 培养模式 创新人才 创新能力 生物技术 实践

在线阅读 下载PDF 职称材料

Geobacillus sp.GXS1α-淀粉酶基因的克隆表达及酶学性质研究 被引量：2

4

作者 薛蓓 裴建新 +2 位作者 刘振东 罗章 韦宇拓 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2014年第11期1-5,共5页

以地芽孢杆菌Geobacillussp.GXS1基因组DNA为模板,PCR扩增获得α-淀粉酶基因,构建重组质粒pSE-amy,转化大肠杆菌诱导表达。SDS-PAGE电泳结果显示,有相对分子质量为58ku的特异性蛋白得到表达。用金属镍亲和层析将重组蛋白进行分离纯化,... 以地芽孢杆菌Geobacillussp.GXS1基因组DNA为模板,PCR扩增获得α-淀粉酶基因,构建重组质粒pSE-amy,转化大肠杆菌诱导表达。SDS-PAGE电泳结果显示,有相对分子质量为58ku的特异性蛋白得到表达。用金属镍亲和层析将重组蛋白进行分离纯化,并进行酶学性质研究。结果表明:重组酶的最适温度为65℃,最适pH7.0,Km值为2.93mg/mL,比活力为353.95U/mg,Tm为75℃。金属离子Cu2+、Fe3+、Fe2+、Zn2+、Co2+、Hg2+、Ag+及金属鏊合剂EDTA对酶活有显著抑制作用,Mn2+、Ba2+对酶活有微弱的抑制作用,K+、Ca2+、Mg2+、巯基乙醇对酶有微弱的激活作用,而其它一些离子如Na+、Li+对酶活影响不大。经HPLC分析表明,重组α-淀粉酶催化淀粉的水解产物为葡萄糖、麦芽糖和麦芽三糖的混合物。 展开更多

关键词 Α-淀粉酶 基因表达 纯化 地芽孢杆菌

在线阅读 下载PDF 职称材料

利用糖蜜发酵生产丁醇菌株的分离筛选及鉴定 被引量：6

5

作者 裴建新 左文朴 +4 位作者 庞浩 黄志明 黎贞崇 韦宇拓 黄日波 《酿酒科技》 2010年第5期32-35,共4页

高效利用糖蜜产生丁醇的菌株是低成本生产丁醇的基础。本研究从自然环境(牛粪、沼气池、土壤)中筛选具有利用糖蜜产生丁醇能力强的菌株。采样通过玉米培养基富集初筛分离获得12株生产丁醇能力较强的菌株。用8度糖蜜发酵复筛,有2株菌株... 高效利用糖蜜产生丁醇的菌株是低成本生产丁醇的基础。本研究从自然环境(牛粪、沼气池、土壤)中筛选具有利用糖蜜产生丁醇能力强的菌株。采样通过玉米培养基富集初筛分离获得12株生产丁醇能力较强的菌株。用8度糖蜜发酵复筛,有2株菌株丁醇产量较高,分别为8.57 g/L和8.45 g/L,丁醇比高达75%。将菌株分别命名为gxzp-5和gxzp-9,经过16S rDNA基因序列同源性分析初步鉴定,2株菌株都为拜氏梭菌(Clostridium beijerinckii)。 展开更多

关键词 微生物 糖蜜 生物丁醇 鉴定 拜氏梭菌

在线阅读 下载PDF 职称材料

甘蔗基因组DNA提取方法的比较 被引量：5

6

作者 王爱勤 杨丽涛 +3 位作者 王自章 韦宇拓 何龙飞 李杨瑞 《中国糖料》 2004年第3期1-4,共4页

采用2×CTAB法和两种改进的SDS法分别从甘蔗不同的器官中提取DNA。通过对所提取的DNA浓度和纯度进行方差分析,并将所提取的DNA进行基因克隆和多态性扩增(RAPD),得到了较清晰的扩增图谱,克隆出目的基因片段,证明改进的SDSⅡ法是一种... 采用2×CTAB法和两种改进的SDS法分别从甘蔗不同的器官中提取DNA。通过对所提取的DNA浓度和纯度进行方差分析,并将所提取的DNA进行基因克隆和多态性扩增(RAPD),得到了较清晰的扩增图谱,克隆出目的基因片段,证明改进的SDSⅡ法是一种高质量去除多糖、色素和蛋白质等杂质的有效方法,所提取的DNA适合于甘蔗各分子生物学研究。 展开更多

关键词 甘蔗 CTAB SDS KAPD

在线阅读 下载PDF 职称材料

褐色喜热裂孢菌Thermobifida fusca产麦芽糖α-淀粉酶基因的克隆表达及酶学性质研究 被引量：1

7

作者 薛蓓 王治宾 +1 位作者 刘振东 韦宇拓 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2013年第24期214-218,231,共6页

以T.fusca基因组DNA为模板,PCR分别扩增不包括和包括其基因前段信号肽的产麦芽糖淀粉酶的基因片段tfa和sptfa,并克隆至表达载体pSE380上,获得重组质粒pSE380-tfa和pSE380-sptfa,以大肠杆菌JM109为宿主细胞大量表达融合蛋白,利用金属镍... 以T.fusca基因组DNA为模板,PCR分别扩增不包括和包括其基因前段信号肽的产麦芽糖淀粉酶的基因片段tfa和sptfa,并克隆至表达载体pSE380上,获得重组质粒pSE380-tfa和pSE380-sptfa,以大肠杆菌JM109为宿主细胞大量表达融合蛋白,利用金属镍亲和层析对菌株JM109/pSE380-tfa表达的α-淀粉酶进行纯化,SDS-PAGE显示纯化蛋白的分子量约为64ku,K m值为1.305mg/mL,最适反应温度为60℃,最适pH为7.0;检测到菌株JM109/pSE380-sptfa的培养基上清有相当一部分酶活。本研究麦芽糖α-淀粉酶与可溶性淀粉反应,经HPLC检测产物均为麦芽三糖、麦芽糖和葡萄糖的混合物。因此麦芽糖α-淀粉酶在生产高麦芽糖浆上起到了一定的作用。 展开更多

关键词 褐色喜热裂孢菌 麦芽糖α-淀粉酶基因 信号肽 克隆表达 麦芽糖 酶学性质

在线阅读 下载PDF 职称材料

利用丙酮丁醇发酵废水偶联乙醇发酵的研究 被引量：2

8

作者 左文朴 裴建新 +4 位作者 庞浩 黄志民 黎贞崇 韦宇拓 黄日波 《酿酒科技》 2010年第3期103-106,共4页

研究以一株从自然环境中分离得到的酿酒酵母GXAS-BT9作为发酵菌株,利用丙酮-丁醇发酵的废液作为乙醇发酵的配浆用水,进行乙醇发酵。结果表明,GXAS-BT9菌株的乙醇发酵产率随着废液比例的升高而增加,使用100%废液作为配浆用水,玉米粉和木... 研究以一株从自然环境中分离得到的酿酒酵母GXAS-BT9作为发酵菌株,利用丙酮-丁醇发酵的废液作为乙醇发酵的配浆用水,进行乙醇发酵。结果表明,GXAS-BT9菌株的乙醇发酵产率随着废液比例的升高而增加,使用100%废液作为配浆用水,玉米粉和木薯粉作为原料的乙醇产率分别达到14.27%vol和14.26%vol,比对照分别提高了14.7%和9.6%。将丁醇发酵与乙醇发酵偶联起来,实现了水的循环利用,同时大大减少了污水的排放量。 展开更多

关键词 综合利用 丙酮-丁醇发酵 废水 乙醇发酵 偶联

在线阅读 下载PDF 职称材料

肠膜明串珠菌ATCC 12291蔗糖磷酸化酶的酶学性质及转糖苷分子改造 被引量：7

9

作者 何贺贺 林厚民 +4 位作者 寇力丹 覃凤兰 韦宇拓 黄日波 杜丽琴 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第20期122-129,共8页

根据GenBank数据库公布的肠膜明串珠菌ATCC 12291中蔗糖磷酸化酶基因序列,构建重组表达质粒pQE-lmsp.在大肠杆菌Escherichia coli M15/pREP4中诱导表达,镍亲和层析纯化蛋白,进行酶学性质测定和重组酶转糖苷活性的研究.以蔗糖为底物对LMs... 根据GenBank数据库公布的肠膜明串珠菌ATCC 12291中蔗糖磷酸化酶基因序列,构建重组表达质粒pQE-lmsp.在大肠杆菌Escherichia coli M15/pREP4中诱导表达,镍亲和层析纯化蛋白,进行酶学性质测定和重组酶转糖苷活性的研究.以蔗糖为底物对LMsp进行酶学性质分析,其最适温度和最适pH值分别为40℃和6.5;Km值和Vmax值分别为(34.16±1.219)mmol/L和(370.5±6.049)μmol/(mg·min).当以葡萄糖-1-磷酸为供体时,对于大多数单糖及其糖醇类受体均具有转糖苷活性,尤其对L-阿拉伯糖具有75%的转化效率.然后通过对LMsp进行同源建模和氨基酸序列比对分析,进行分子改造,并比较酶学性质及转糖苷活性的变化.获得7个单点和联合的突变体T180A、T219V、P236S、T180A-T219V、T180A-P236S、T219V-P236S、T180A-T219V-P236S,其中突变体T180A、P236S对L-山梨糖的转糖苷活性分别有13.7%和15%的提高.本研究通过对LMsp的研究,发现其具有良好的酸碱稳定性和对L-阿拉伯糖的高转糖苷活性,并且获得了对于L-山梨糖转糖苷活性提高的突变体,丰富了有关于蔗糖磷酸化酶的性质,并且对该酶的分子改造提供了经验依据. 展开更多

关键词 肠膜明串珠菌 蔗糖磷酸化酶 酶学性质 转糖苷功能 分子改造

在线阅读 下载PDF 职称材料

乳酸片球菌AS1.2696来源的α-L-鼠李糖苷酶酶学性质分析 被引量：2

10

作者 郭双双 郑芳芳 +4 位作者 可丛雪 王子龙 韦宇拓 黄日波 杜丽琴 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第4期160-169,共10页

克隆表达乳酸片球菌AS1.2696菌株中的α-L-鼠李糖苷酶基因,研究重组酶的酶学性质。分析乳酸片球菌AS1.2696菌株的全基因组序列,聚合酶链式反应扩增目的基因,以p SE380为表达载体构建重组质粒p SE-prha2和p SE-prha3,在大肠杆菌Escherich... 克隆表达乳酸片球菌AS1.2696菌株中的α-L-鼠李糖苷酶基因,研究重组酶的酶学性质。分析乳酸片球菌AS1.2696菌株的全基因组序列,聚合酶链式反应扩增目的基因,以p SE380为表达载体构建重组质粒p SE-prha2和p SE-prha3,在大肠杆菌Escherichia coli XL-blue进行表达,使用镍亲和层析纯化重组蛋白,研究重组酶PRHA2、PRHA3的酶学性质。结果表明,重组酶PRHA2的最适pH值和温度分别为5.0和60℃,Km值为(3.039±0.581)mmol/L,Vm a x值为(2.032±0.186)μmol/(min·mg);PRHA3的最适p H值和温度分别为5.5和45℃,Km值为(2.797±0.132)mmol/L,Vmax值为(113.35±1.485)μmol/(min·mg)。PRHA2和PRHA3能够水解人工底物对硝基苯基-α-L-吡喃鼠李糖苷(p-nitrophenyl-α-L-rhamnopyranoside,p NPR)以及α-1,6键的橙皮苷、芦丁;PRHA2对4-硝基苯基-β-D-阿拉伯糖苷(4-nitrophenyl-β-L-arabinoside,p NPA)有一定的水解活性;PRHA3对淫羊藿苷、淫羊藿次苷I、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C这几种物质C-7位的葡萄糖糖苷键有较弱的水解作用。此外,PRHA3能够水解朝藿定C的C-3位以α-Rha(2→1)α-Rha连接的外侧的鼠李糖苷键,在食品及医疗方面具有一定的应用价值。 展开更多

关键词 乳酸片球菌 α-L-鼠李糖苷酶 克隆表达 酶学性质

在线阅读 下载PDF 职称材料

γ-聚谷氨酸高黏发酵液中细菌总核糖核酸提取方法的比较

11

作者 唐真 王骏 +3 位作者 陈桂光 梁智群 韦宇拓 曾伟 《中国酿造》 CAS 北大核心 2016年第1期24-28,共5页

高黏度发酵液具有菌体不易分离的特点。为了从γ-聚谷氨酸高黏发酵液中提取细菌总核糖核酸,利用磷酸缓冲液稀释发酵液、离心收集、焦碳酸二乙酯水洗涤以及溶菌酶处理的四步法收集菌体并制备核糖核酸待分离样品,进而分别采用RNAiso plus... 高黏度发酵液具有菌体不易分离的特点。为了从γ-聚谷氨酸高黏发酵液中提取细菌总核糖核酸,利用磷酸缓冲液稀释发酵液、离心收集、焦碳酸二乙酯水洗涤以及溶菌酶处理的四步法收集菌体并制备核糖核酸待分离样品,进而分别采用RNAiso plus提取法,EZ-10 RNA Miniprep kit试剂盒及Pure Link RNA Mini kit试剂盒法提取总核糖核酸,并通过琼脂糖凝胶电泳、核酸浓度检测仪和反转录聚合酶链式反应比较了三种方法提取总核糖核酸的效果。结果表明,四步法获得的菌体样品可以满足后续总核糖核酸提取的要求,三种方法提取的核糖核酸均能满足一般反转录聚合酶链式反应的要求,其中Pure Link和RNAiso提取的核糖核酸A_(260nm)/A_(230nm)>2.0,纯度较好,Pure Link具有快速提取的优势而RNAiso则适用于大量样品的提取。 展开更多

关键词 高黏度发酵液 枯草芽孢杆菌 菌体分离 总核糖核酸提取 反转录聚合酶链式反应

在线阅读 下载PDF 职称材料

植物乳杆菌ZJ316高密度发酵条件优化 被引量：15

12

作者 李娜 杨江华 韦宇拓 《中国酿造》 CAS 北大核心 2021年第5期43-48,共6页

以1株植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZJ316为研究对象,在MRS液体培养基的基础上,以吸光度值(OD600 nm值)为响应值,通过单因素试验及响应面试验对其高密度发酵培养基组分和培养条件进行优化。结果表明,L.plantarum ZJ316高密度发... 以1株植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZJ316为研究对象,在MRS液体培养基的基础上,以吸光度值(OD600 nm值)为响应值,通过单因素试验及响应面试验对其高密度发酵培养基组分和培养条件进行优化。结果表明,L.plantarum ZJ316高密度发酵的最优培养基组成为蔗糖43 g/L、玉米浆干粉60 g/L、Na2HPO4-柠檬酸0.12 mol/L、MgSO_(4)·7H_(2)O 0.20 g/L、MnSO_(4)·H_(2)O 0.10 g/L、吐温801 mL/L;最优发酵条件为接种量4%、发酵温度30℃、初始pH值6.5。在此优化条件下,采用发酵罐静置发酵24 h,植物乳杆菌ZJ316的OD600 nm值为5.13,活菌数可达8.01×10^(9) CFU/mL,较优化前分别提高1.65倍、3.44倍。 展开更多

关键词 植物乳杆菌 响应面优化 高密度发酵 发酵条件

在线阅读 下载PDF 职称材料