沙门氏菌PCR检测方法的建立 被引量：33

1

作者 许会会 雷连成 +2 位作者 谢芳 杜涛峰 韩文瑜 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第4期94-97,共4页

根据GenBank沙门氏菌侵袭蛋白A(invA)基因序列设计引物,扩增特异的202 bp核苷酸片段,经过优化PCR扩增条件,建立了沙门氏菌特异、敏感和快速的PCR检测方法。特异性试验结果表明,从沙门氏菌参考菌株中均能扩增出特异性的核苷酸片段,大肠... 根据GenBank沙门氏菌侵袭蛋白A(invA)基因序列设计引物,扩增特异的202 bp核苷酸片段,经过优化PCR扩增条件,建立了沙门氏菌特异、敏感和快速的PCR检测方法。特异性试验结果表明,从沙门氏菌参考菌株中均能扩增出特异性的核苷酸片段,大肠杆菌、巴氏杆菌、金黄色葡萄菌、志贺氏菌、蜡样芽孢杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌的扩增结果均为阴性。敏感性试验结果表明,采用简便的直接煮沸裂解法制备样品DNA,该方法的敏感性可达2.43×103CFU/mL。 展开更多

关键词 沙门氏菌 PCR 检测

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牛奶中志贺氏菌PCR检测方法的建立 被引量：8

2

作者 许会会 谢芳 雷连成 《食品安全质量检测学报》 CAS 2010年第1期43-48,共6页

根据Genbank志贺氏菌侵袭性质粒抗原H(ipaH)基因序列,自行设计引物,扩增特异的326bp核酸片段,经过优化PCR扩增条件,建立了志贺氏菌特异、敏感、快速的PCR检测方法,并对牛奶中的志贺氏菌进行了检测。特异性试验结果表明,志贺氏菌参考菌... 根据Genbank志贺氏菌侵袭性质粒抗原H(ipaH)基因序列,自行设计引物,扩增特异的326bp核酸片段,经过优化PCR扩增条件,建立了志贺氏菌特异、敏感、快速的PCR检测方法,并对牛奶中的志贺氏菌进行了检测。特异性试验结果表明,志贺氏菌参考菌株均能扩增出特异的核酸片段,大肠杆菌、巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、蜡样芽孢杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌的扩增结果均为阴性。敏感性试验结果表明,采用试剂盒提取基因组,该方法的敏感性可达到1.75×102cfu/mL。人工污染牛奶的模拟检测结果表明,PCR方法的检测限为1.75×103cfu/mL。 展开更多

关键词 牛奶 志贺氏菌 PCR 检测

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农杆菌介导的薹菜遗传转化体系研究

3

作者 许会会 赵美爱 +1 位作者 钤泰琳 刘维信 《山东农业科学》 2011年第5期8-11,共4页

以薹菜子叶-子叶柄为外植体,研究了根癌农杆菌介导的遗传转化技术。用含GUS和NPTⅡ基因的农杆菌侵染子叶-子叶柄,获得了具有卡那霉素抗性的再生植株。再生植株经GUS组织染色,证实外源基因转化到植物基因组中。卡那霉素敏感性测定结果表... 以薹菜子叶-子叶柄为外植体,研究了根癌农杆菌介导的遗传转化技术。用含GUS和NPTⅡ基因的农杆菌侵染子叶-子叶柄,获得了具有卡那霉素抗性的再生植株。再生植株经GUS组织染色,证实外源基因转化到植物基因组中。卡那霉素敏感性测定结果表明,当培养基中含卡那霉素(Km)15 mg/L时,非转化再生植株全部白化。转基因抗性芽筛选的适宜的卡那霉素浓度为10 mg/L。 展开更多

关键词 薹菜 子叶-子叶柄 遗传转化

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仓鼠源缓慢葡萄球菌的分离鉴定及生物学特性研究 被引量：15

4

作者 盛相鹏 杜崇涛 +3 位作者 许会会 顾敬敏 雷连成 韩文瑜 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第7期30-35,共6页

从死亡仓鼠的血液及内脏器官中分离出一株细菌,经镜检、菌落形态观察、培养特性观察、生化试验、PCR鉴定及16 S rRNA基因测序和同源性分析,确定该分离菌株为缓慢葡萄球菌。动物回归试验表明,分离菌可以引起实验小鼠的慢性死亡,这表明缓... 从死亡仓鼠的血液及内脏器官中分离出一株细菌,经镜检、菌落形态观察、培养特性观察、生化试验、PCR鉴定及16 S rRNA基因测序和同源性分析,确定该分离菌株为缓慢葡萄球菌。动物回归试验表明,分离菌可以引起实验小鼠的慢性死亡,这表明缓慢葡萄球菌具有致病性并很可能会对公共卫生安全具有潜在威胁。药敏试验显示,该分离菌株对大多数抗生素均十分敏感,但对氟喹诺酮类药物及复方新诺明有很强的耐药性。 展开更多

关键词 缓慢葡萄球菌 分离 鉴定 仓鼠

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牛、羊布鲁菌多重PCR方法的建立与应用 被引量：1

5

作者 杜涛峰 韩文瑜 +4 位作者 雷连成 孙长江 李扬 顾敬敏 许会会 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第11期80-84,共5页

根据布鲁菌属特异性基因BCSP31和布鲁菌种间特异性标志IS711插入序列,设计合成了3对引物,以牛种布鲁菌544A、104M和羊种布鲁菌16M基因组DNA为模板,通过优化反应条件,建立了可同时检测布鲁菌属、牛种布鲁菌和羊种布鲁菌的多重PCR方法。... 根据布鲁菌属特异性基因BCSP31和布鲁菌种间特异性标志IS711插入序列,设计合成了3对引物,以牛种布鲁菌544A、104M和羊种布鲁菌16M基因组DNA为模板,通过优化反应条件,建立了可同时检测布鲁菌属、牛种布鲁菌和羊种布鲁菌的多重PCR方法。牛种布鲁菌可扩增出301和114bp 2条带,羊种布鲁菌可扩增出301和253bp 2条带,该方法对牛种布鲁菌544A和羊种布鲁菌16M混合DNA模板的最小检出量为100pg,对大肠杆菌O157∶H7、小肠结肠炎耶尔森菌等15种参照菌的核酸扩增结果均为阴性。应用该方法对吉林省某牛场的106份粪便进行检测,虎红平板凝集试验作对照,结果PCR检测9份为阳性,且全为牛种布鲁菌阳性,对应的虎红平板凝集试验也为阳性。结果表明,建立的多重PCR方法具有良好的敏感性和特异性,为布鲁菌病的鉴别诊断提供了一种分子检测工具。 展开更多

关键词 牛种布鲁菌 羊种布鲁菌 BCSP31基因 IS711基因 多重PCR

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仓鼠致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验 被引量：1

6

作者 盛相鹏 杜崇涛 +3 位作者 许会会 顾敬敏 雷连成 韩文瑜 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第8期164-169,共6页

为探讨长春地区某仓鼠饲养场中仓鼠急性死亡的原因及应对该突发性疾病,对死亡仓鼠进行实验室检查并分离得到1株细菌,通过对该分离株进行形态学观察、培养特性观察、生化试验、小鼠致病性试验、PCR鉴定和23SrRNA基因同源性分析,判定该分... 为探讨长春地区某仓鼠饲养场中仓鼠急性死亡的原因及应对该突发性疾病,对死亡仓鼠进行实验室检查并分离得到1株细菌,通过对该分离株进行形态学观察、培养特性观察、生化试验、小鼠致病性试验、PCR鉴定和23SrRNA基因同源性分析,判定该分离菌为1株高致病性大肠杆菌。该菌可致仓鼠突发急性致死性大肠杆菌病,死亡率达到100%,死亡小鼠出现胃肠道极度膨胀的典型症状。药敏试验结果表明,该大肠杆菌对多种抗生素敏感,但对四环素类抗生素及复方新诺明(SXT)有很强的耐药性,可用庆大霉素进行治疗。研究结果为探讨急性大肠杆菌病的发病机制及其防治提供了理论基础。 展开更多

关键词 仓鼠 大肠杆菌 分离鉴定 药敏试验

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金黄色葡萄球菌FnbpA、ClfA、Ebps抗原表位的串联表达及多克隆抗体的制备 被引量：6

7

作者 高翔 许会会 雷连成 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第5期97-100,共4页

为获得金黄色葡萄球菌特异性抗原蛋白并以此制备多克隆抗体,应用DNAStar软件筛选金黄色葡萄球菌FnbpA、Clf A、Ebps的抗原表位,以柔性氨基酸序列连接后进行全基因合成,将目的基因克隆到pGEX-4T-1原核表达载体,转化至大肠杆菌感受态细胞... 为获得金黄色葡萄球菌特异性抗原蛋白并以此制备多克隆抗体,应用DNAStar软件筛选金黄色葡萄球菌FnbpA、Clf A、Ebps的抗原表位,以柔性氨基酸序列连接后进行全基因合成,将目的基因克隆到pGEX-4T-1原核表达载体,转化至大肠杆菌感受态细胞,诱导表达,采用Sepharose 4B柱亲和层析纯化表达蛋白,制备抗原后对家兔进行皮下多点注射,于第42天采集外周血,获得血清。结果表明,本试验成功构建了金黄色葡萄球菌抗原基因表达载体,并获得了高免血清,经ELISA的方法检测血清效价可达到1∶10000以上,成功制备多克隆抗体,为以后采用免疫学方法快速检测金黄色葡萄球菌奠定了基础。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 抗原表位 串联表达 多克隆抗体

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定量检测牛奶中蛋白质ELISA方法的建立 被引量：2

8

作者 李萌 许会会 +1 位作者 高晋渝 雷连成 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第4期84-87,共4页

本试验旨在建立特异检测牛奶蛋白质含量的ELISA方法。利用提纯酪蛋白免疫试验动物,获得针对酪蛋白的多克隆抗体;利用棋盘格试验确定抗原抗体的最佳作用浓度,并优化各步骤反应条件;根据标准样品建立牛奶中蛋白质含量的定量ELISA检测方法... 本试验旨在建立特异检测牛奶蛋白质含量的ELISA方法。利用提纯酪蛋白免疫试验动物,获得针对酪蛋白的多克隆抗体;利用棋盘格试验确定抗原抗体的最佳作用浓度,并优化各步骤反应条件;根据标准样品建立牛奶中蛋白质含量的定量ELISA检测方法,并对该方法的特异性、敏感性、检测范围及重复性进行评价。通过试验确定封闭液为1%BSA,37℃孵育120 min;血清抗体工作浓度为1∶12000稀释,37℃孵育90 min;酶标二抗最适浓度为1∶3000稀释,37℃孵育30 min。牛奶酪蛋白检出范围为0.063~0.500μg/mL;该方法具有良好的特异性、敏感性、重复性,回归率范围为97.6%~123%。成功建立了牛奶蛋白含量的定量ELISA检测方法。 展开更多

关键词 乳蛋白 酪蛋白 ELISA 定量检测

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含氨基酸水溶肥对葡萄产量与质量及经济效益的影响 被引量：20

9

作者 许会会 陈光 +2 位作者 王春夏 王秀萍 盛婷婷 《现代农业科技》 2018年第24期57-57,60,共2页

选用八年生玫瑰香葡萄作为试验材料,研究在葡萄坐果期开始喷施不同浓度的含氨基酸水溶肥对葡萄产量、品质及经济效益的影响。结果表明,喷施含氨基酸水溶肥对葡萄有显著的增产效果。综合考虑产量、品质和经济效益等因素,喷施含氨基酸水溶... 选用八年生玫瑰香葡萄作为试验材料,研究在葡萄坐果期开始喷施不同浓度的含氨基酸水溶肥对葡萄产量、品质及经济效益的影响。结果表明,喷施含氨基酸水溶肥对葡萄有显著的增产效果。综合考虑产量、品质和经济效益等因素,喷施含氨基酸水溶肥1 500 g/hm^2效果最好,较清水对照增产5.83%,增收8 613元/hm^2,产投比为31.9∶1。因此建议在葡萄生产上施用含氨基酸水溶肥。 展开更多

关键词 含氨基酸水溶肥 葡萄 产量 品质 经济效益

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不同品种绿芦笋品质比较试验 被引量：3

10

作者 许会会 陈光 +2 位作者 王春夏 王秀萍 荆志强 《现代农业科技》 2019年第6期46-47,共2页

为了比较不同品种绿芦笋品质的优劣性,通过测定其商品品质、可溶性糖含量、持水力、叶绿素含量和V_C含量等指标,分析比较了各品种绿芦笋的品质差异。结果表明,4个品种绿芦笋的商品率均在95%以上,但无显著性差异;直径均在8 mm以上,无显... 为了比较不同品种绿芦笋品质的优劣性,通过测定其商品品质、可溶性糖含量、持水力、叶绿素含量和V_C含量等指标,分析比较了各品种绿芦笋的品质差异。结果表明,4个品种绿芦笋的商品率均在95%以上,但无显著性差异;直径均在8 mm以上,无显著性差异;含水量均在98%左右,其中格里斯含水量显著高于其他品种;4个品种的可溶性糖含量均较低,在20%～30%之间,但无显著性差异;持水力在4%～8%之间,其中达宝利品种持水力最强;达宝利和2000—3品种叶绿素含量均在0.6 mg/g以上,格里斯和冠军品种均在0.4～0.6 mg/g之间;不同品种绿芦笋的V_C含量差别较大,总体在50～200 mg/100 g之间,其中达宝利品种含量最高。综合比较,达宝利品种的品质较为优良。 展开更多

关键词 绿芦笋 品种 品质比较

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非洲猪瘟病毒CP204L基因的生物信息学分析、载体构建及蛋白表达 被引量：1

11

作者 鲁中爽 许会会 +5 位作者 蔡维北 武悦 杨莲花 王泽宇 王楠 徐一鸣 《广东农业科学》 CAS 2020年第7期128-136,共9页

【目的】非洲猪瘟病(African swine fever,ASF)是一种由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)导致的,能引起猪高度致死的急性传染病。采用生物学手段制备检测试剂能更快、更有效地监测疫情,对ASF疫情的防控尤为重要。【方法】... 【目的】非洲猪瘟病(African swine fever,ASF)是一种由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)导致的,能引起猪高度致死的急性传染病。采用生物学手段制备检测试剂能更快、更有效地监测疫情,对ASF疫情的防控尤为重要。【方法】根据ASFV的CP204L基因CDS区序列设计特异性引物并进行PCR扩增,将目的基因片段与p EASY-T5连接构建克隆载体,利用生物信息学软件对蛋白进行生物信息学分析,用T4连接酶构建重组载体pET-32a(+)-CP204L,将成功构建的重组表达载体质粒转入感受态Rosetta(DE3)中,用1 mmol/L IPTG、37℃诱导表达8 h后进行SDS-PAGE电泳鉴定蛋白表达。【结果】生物信息学分析结果表明,P30蛋白是一种主要由无规卷曲α螺旋和β折叠组成的亲水和稳定蛋白,PCR扩增及测序比对结果证明成功构建了重组表达载体,SDS-PAGE电泳验证了在24.3 ku处有潜在的P30蛋白表达。【结论】通过生物信息学软件在分子层面分析了P30蛋白的理化性质及蛋白结构,P30蛋白的表达为制备ASFV血清学诊断试剂及诊断技术奠定了基础。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒(ASFV) 生物信息学 表达载体 诱导表达

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复合微生物肥料在西瓜上的应用效果研究 被引量：6

12

作者 陈光 许会会 +3 位作者 王春夏 朱明玉 王秀萍 高成功 《现代农业科技》 2018年第23期73-73,75,共2页

在同等生产条件下,研究复合微生物肥料在西瓜上的应用效果。结果表明,施用复合微生物肥料处理西瓜产量较空白对照增加5 041.67 kg/hm^2,增产率为8.4%,增收4 255.00元/hm^2,增产增收效果明显;且西瓜品质提升明显,VC含量和糖度均有较大程... 在同等生产条件下,研究复合微生物肥料在西瓜上的应用效果。结果表明,施用复合微生物肥料处理西瓜产量较空白对照增加5 041.67 kg/hm^2,增产率为8.4%,增收4 255.00元/hm^2,增产增收效果明显;且西瓜品质提升明显,VC含量和糖度均有较大程度的提高。 展开更多

关键词 西瓜 复合微生物肥料 效果

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大棚甜瓜水肥一体化栽培水分和养分效益研究 被引量：2

13

作者 王春夏 许会会 陈光 《现代农业科技》 2020年第21期85-86,89,共3页

本文开展了不同栽培模式下大棚甜瓜栽培水分和养分效益比较试验。结果表明,大棚甜瓜水肥一体化栽培(根据甜瓜生长需求,定时、定量、均匀地把溶解有肥料的灌溉水通过管道系统输送至甜瓜根部周围土壤)较常规畦灌节水36.5%~37.5%,节肥28%~3... 本文开展了不同栽培模式下大棚甜瓜栽培水分和养分效益比较试验。结果表明,大棚甜瓜水肥一体化栽培(根据甜瓜生长需求,定时、定量、均匀地把溶解有肥料的灌溉水通过管道系统输送至甜瓜根部周围土壤)较常规畦灌节水36.5%~37.5%,节肥28%~34%,节药25%~38%,生产纯收益增长23%~34%。说明大棚甜瓜水肥一体化栽培可实现节水节肥,有效控制病虫害发生,改善大棚生态环境状况。 展开更多

关键词 甜瓜 水肥一体化 滴灌 水分利用效率 养分用量 产量 效益

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农艺措施对马家沟芹菜的产量及品质的影响

14

作者 高成功 陈光 +2 位作者 许会会 王春霞 杨洁 《南方农业》 2021年第24期122-123,共2页

山东省马家沟芹菜是中国芹菜空心类型中具有浓郁地方特色的优良农家品种,距今已有1000多年的栽培历史,是全国第1个获得地理标志保护产品的绿叶类蔬菜。其叶梗嫩黄、空心棵大、鲜嫩酥脆、味道鲜美、营养丰富,粗纤维含量低,蛋白质、氨基... 山东省马家沟芹菜是中国芹菜空心类型中具有浓郁地方特色的优良农家品种,距今已有1000多年的栽培历史,是全国第1个获得地理标志保护产品的绿叶类蔬菜。其叶梗嫩黄、空心棵大、鲜嫩酥脆、味道鲜美、营养丰富,粗纤维含量低,蛋白质、氨基酸和有益矿物营养元素含量高。通过研究发现,马家沟芹菜的群体密度、施肥种类、施肥方式、储存温度和湿度对马家沟芹菜的品质和商品形状均有不同程度的影响。 展开更多

关键词 农艺措施 密度 施肥 窖藏 马家沟芹菜

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