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浙江马尾松毛虫不同地理种群间基因差异的ISSR分析 被引量:3
1
作者 翁宏飚 牛宝龙 +2 位作者 何丽华 蒋平 孟智启 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第1期164-168,共5页
Genetic diversity of Dendrolimus punctatus over five regions in Zhejiang Province were studied by ISSR-PCR.Thirteen primers were screened on the template of total DNA of the insects and total 74 bands of DNA fragments... Genetic diversity of Dendrolimus punctatus over five regions in Zhejiang Province were studied by ISSR-PCR.Thirteen primers were screened on the template of total DNA of the insects and total 74 bands of DNA fragments were amplified,of which the half(37 bands)was polymorphic.The genetic distance among the sampled populations ranged 0.114 4-0.475 4.The dendrogram was constructed based on their genetic distance using UPGMA method.The results indicated that there was low genetic diversity among the four populations from the main land,while the Dongtou population sampled from Dongtou island showed higher genetic diversity. 展开更多
关键词 马尾松毛虫 ISSR 遗传差异 多态性
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抗菌肽Cecropin B基因的克隆及体内活性检测方法的构建 被引量:3
2
作者 翁宏飚 牛宝龙 +1 位作者 孟智启 徐孟奎 《浙江农业学报》 CSCD 2003年第5期273-279,共7页
根据家蚕抗菌肽基因的序列设计引物,从家蚕蛹脂肪体中扩增家蚕CecropinB基因,并利用GST融合表达系统进行表达。融合蛋白的表达量受表达诱导剂IPTG浓度控制,利用融合蛋白对宿主菌的部分抑菌作用,建立灵敏、简便的家蚕CecropinB体内抗菌... 根据家蚕抗菌肽基因的序列设计引物,从家蚕蛹脂肪体中扩增家蚕CecropinB基因,并利用GST融合表达系统进行表达。融合蛋白的表达量受表达诱导剂IPTG浓度控制,利用融合蛋白对宿主菌的部分抑菌作用,建立灵敏、简便的家蚕CecropinB体内抗菌活性检测方法。 展开更多
关键词 抗菌肽 融合表达 E.COLI 体内测活
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家蚕的RAPD及其品种间差异 被引量:16
3
作者 翁宏飚 徐孟奎 张耀洲 《浙江农业大学学报》 CSCD 1996年第2期152-156,共5页
采用RAPD技术对家蚕基因组DNA进行多态性研究,分析了各供试品种材料之间的遗传差异。结果表明,RAPD能反映各基因组之间丰富的多态性,聚类分析所得的各供试品种材料之间的亲缘关系和常规遗传分析的结论相一致。因此,认为... 采用RAPD技术对家蚕基因组DNA进行多态性研究,分析了各供试品种材料之间的遗传差异。结果表明,RAPD能反映各基因组之间丰富的多态性,聚类分析所得的各供试品种材料之间的亲缘关系和常规遗传分析的结论相一致。因此,认为RAPD可以作为家蚕分类及系统学研究的一种方法. 展开更多
关键词 家蚕 品种差异 RAPD
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水产口服DNA疫苗研究进展 被引量:2
4
作者 翁宏飚 沈卫锋 牛宝龙 《浙江农业科学》 2020年第10期2125-2131,2135,共8页
水产病害是阻碍水产养殖业健康可持续发展的重要因子,渔用疫苗的研发和应用是预防水产动物疾病最安全有效的措施。DNA疫苗是20世纪90年代初出现的一种新型疫苗,与传统的疫苗相比,DNA疫苗具有免疫效果好、生产成本低、保存方便等优点,是... 水产病害是阻碍水产养殖业健康可持续发展的重要因子,渔用疫苗的研发和应用是预防水产动物疾病最安全有效的措施。DNA疫苗是20世纪90年代初出现的一种新型疫苗,与传统的疫苗相比,DNA疫苗具有免疫效果好、生产成本低、保存方便等优点,是疫苗研究的热点,而口服免疫途径具有适用性广、受体鱼应激反应低等优点,是较为理想的免疫方式。本文综述口服疫苗的免疫机制及水产DNA疫苗的研究现状,旨为研究安全、高效的新型口服疫苗提供一定的参考信息。 展开更多
关键词 口服 DNA疫苗 免疫机制 安全性
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罗氏沼虾病毒病检测和免疫防治进展 被引量:1
5
作者 翁宏飚 沈卫锋 牛宝龙 《浙江农业科学》 2019年第1期120-124,共5页
白尾病是一种由诺达病毒(MrNV)及其卫星样病毒(XSV)引起的罗氏沼虾病害,具有蔓延速度快和致死率高的特点,是罗氏沼虾养殖中的主要病害。介绍罗氏沼虾MrNV和XSV的基因组和结构蛋白、病毒检测方法、罗氏沼虾MrNV免疫机制、疫苗研究进展、M... 白尾病是一种由诺达病毒(MrNV)及其卫星样病毒(XSV)引起的罗氏沼虾病害,具有蔓延速度快和致死率高的特点,是罗氏沼虾养殖中的主要病害。介绍罗氏沼虾MrNV和XSV的基因组和结构蛋白、病毒检测方法、罗氏沼虾MrNV免疫机制、疫苗研究进展、MrNV病毒样颗粒微粒特性,以及罗氏沼虾健康养殖策略,讨论疫苗在罗氏沼虾病害防治中的作用。 展开更多
关键词 罗氏沼虾 诺达病毒 疫苗
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枯草芽孢杆菌作为外源基因表达系统的研究进展 被引量:27
6
作者 沈卫锋 牛宝龙 +2 位作者 翁宏飚 何丽华 孟智启 《浙江农业学报》 CSCD 2005年第4期234-238,共5页
枯草芽孢杆菌是目前研究较为详尽的外源基因表达宿主,但由于受自身分泌蛋白酶多、构建的表达质粒不太稳定等因素影响,其应用受到一定的限制。文章综述了枯草芽孢杆菌基因组的特征、蛋白的分泌机制、重组表达质粒不稳定的原因,指出了枯... 枯草芽孢杆菌是目前研究较为详尽的外源基因表达宿主,但由于受自身分泌蛋白酶多、构建的表达质粒不太稳定等因素影响,其应用受到一定的限制。文章综述了枯草芽孢杆菌基因组的特征、蛋白的分泌机制、重组表达质粒不稳定的原因,指出了枯草芽孢杆菌作为外源蛋白表达系统的瓶颈及今后的研究重点。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 基因组 表达系统
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棉铃虫(Helicoverpa armigera)幼虫性特征和精子的发生 被引量:9
7
作者 陈大福 牛宝龙 +1 位作者 翁宏飚 孟智启 《浙江农业学报》 CSCD 2004年第6期354-357,共4页
以棉铃虫精巢为材料,气干法制片,Giemsa染色,研究了棉铃虫精巢的形态变化和精子发生的动态过程。结果表明:棉铃虫的精巢自预蛹期开始会发生融合现象;雄性棉铃虫染色体数目为n=31。还发现雌性幼虫的腹部有4个腺体,可以作为幼虫的性别特征。
关键词 棉铃虫 幼虫性征 精巢 染色体 精子发生
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昆虫的性别决定与性别控制 被引量:7
8
作者 牛宝龙 翁宏飚 孟智启 《浙江农业学报》 CSCD 2001年第6期327-334,共8页
昆虫的性别决定因物种的不同而不同 ,果蝇的性别决定是一个阶梯式的调控过程 ,原始信号是X∶A ,性别决定的调控核心是sxl,体细胞性别分化、剂量补偿及生殖细胞分化都是通过SXL对mRNA剪切的调控而实现的。研究昆虫的性别决定是人们进行... 昆虫的性别决定因物种的不同而不同 ,果蝇的性别决定是一个阶梯式的调控过程 ,原始信号是X∶A ,性别决定的调控核心是sxl,体细胞性别分化、剂量补偿及生殖细胞分化都是通过SXL对mRNA剪切的调控而实现的。研究昆虫的性别决定是人们进行昆虫的性别控制的基础 ,随着基因工程的发展 ,人们可以利用性连锁平衡致死基因、性别特异性致死基因、杀雄微生物等多字方法对昆虫的性别进行控制。 展开更多
关键词 昆虫 性别决定 性别控制 剂量补偿 生殖细胞分化 性连锁平衡致死 武装打靶 杀雄微生物
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马尾松毛虫的人工饲养 被引量:6
9
作者 何丽华 牛宝龙 +3 位作者 翁宏飚 沈卫锋 吾中良 孟智启 《中国森林病虫》 北大核心 2005年第6期31-34,共4页
从马尾松毛虫Dendrolimus punctatus新发生区采集虫源,在自然温湿度和光照条件下,借鉴家蚕的人工饲养经验和技术,采取卵面、松针、饲养室和饲养用具等的消毒措施,提高了室内饲养松毛虫幼虫的存活率和茧蛹的羽化率。马尾松毛虫在室内的... 从马尾松毛虫Dendrolimus punctatus新发生区采集虫源,在自然温湿度和光照条件下,借鉴家蚕的人工饲养经验和技术,采取卵面、松针、饲养室和饲养用具等的消毒措施,提高了室内饲养松毛虫幼虫的存活率和茧蛹的羽化率。马尾松毛虫在室内的规模化人工饲养取得了初步成功,顺利完成从卵到卵的生活世代,经过消毒的卵孵化率为91.4%,室内饲养幼虫的存活率达到92.54%,茧蛹的羽化率达88.4%,雌雄性比为1.08∶1。 展开更多
关键词 马尾松毛虫 人工饲养 消毒
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^(60)Coγ射线辐照对马尾松毛虫繁殖力的影响 被引量:5
10
作者 何丽华 翁宏飚 +3 位作者 牛宝龙 沈卫锋 刘岩 孟智启 《中国森林病虫》 北大核心 2009年第1期25-26,共2页
人工饲养的马尾松毛虫老熟蛹经10~80 Gy剂量的60Coγ射线辐射后,调查辐射对松毛虫繁殖力的影响。结果表明老熟蛹辐照对成虫寿命和产卵量影响不明显,辐照后的雌性成虫与对照雄虫交尾所产卵的孵化率随着辐照剂量的加大而明显降低,经80 Gy... 人工饲养的马尾松毛虫老熟蛹经10~80 Gy剂量的60Coγ射线辐射后,调查辐射对松毛虫繁殖力的影响。结果表明老熟蛹辐照对成虫寿命和产卵量影响不明显,辐照后的雌性成虫与对照雄虫交尾所产卵的孵化率随着辐照剂量的加大而明显降低,经80 Gy以下剂量辐照的雄性成虫与对照雌虫交尾所产卵的孵化率随着辐照剂量的加大没有明显的下降。人工饲养的马尾松毛虫老熟蛹经80 Gy以上剂量辐照对雌雄成虫的繁殖力都有显著影响,对雌性的繁殖力影响大于雄性。 展开更多
关键词 马尾松毛虫 辐照 人工饲养
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RNA干涉与基因功能研究进展 被引量:5
11
作者 牛宝龙 翁宏飚 +1 位作者 孟智启 吕顺霖 《浙江农业学报》 CSCD 2003年第4期263-267,共5页
RNA干涉是通过双链RNA的介导,在基因的转录后水平上,特异性抑制具有相应序列的基因表达,即通过双链RNA的介导特异性降解相应序列的mRNA,从而导致转录后水平的基因沉默。迄今,在真菌、植物、动物等真核生物中都发现存在这一基因沉默机制... RNA干涉是通过双链RNA的介导,在基因的转录后水平上,特异性抑制具有相应序列的基因表达,即通过双链RNA的介导特异性降解相应序列的mRNA,从而导致转录后水平的基因沉默。迄今,在真菌、植物、动物等真核生物中都发现存在这一基因沉默机制。RNA干涉对于抵抗病毒入侵、抑制转座子活动、生物体的发育和基因表达调控都有重要作用;它也为基因功能的研究开辟了一条新途径。文章综述了RNA干涉的机制及其在基因功能研究方面的最新进展。 展开更多
关键词 RNA干涉 双链RNA 基因功能
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人工饲养条件及辐照对棉铃虫成虫繁殖力的影响 被引量:3
12
作者 顾伟平 夏大荣 +2 位作者 翁宏飚 牛宝龙 孟智启 《浙江农业学报》 CSCD 2004年第1期33-36,共4页
研究了人工饲养条件下,不同容器、不同营养液和辐射剂量对棉铃虫成虫寿命、有效交尾机率、产卵量和卵孵化率的影响。结果表明,成虫有效交尾率随交尾空间的增大而提高,用容量为9.12L的圆形塑料篓作为成虫配对容器其有效交尾率可达100%,... 研究了人工饲养条件下,不同容器、不同营养液和辐射剂量对棉铃虫成虫寿命、有效交尾机率、产卵量和卵孵化率的影响。结果表明,成虫有效交尾率随交尾空间的增大而提高,用容量为9.12L的圆形塑料篓作为成虫配对容器其有效交尾率可达100%,卵孵化率达到91.71%。在集卵过程中用10%的蜂皇浆稀释液饲喂成虫,雄性成虫寿命可达17.8d。在150~350Gy剂量范围内,辐照对人工饲养的棉铃虫成虫寿命和性行为无明显影响,其繁殖力随剂量的升高而降低。 展开更多
关键词 人工饲养 棉铃虫 成虫寿命 繁殖力
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松材线虫actin基因全长cDNA的克隆 被引量:3
13
作者 沈卫锋 牛宝龙 +4 位作者 翁宏飚 何丽华 刘岩 齐晓朋 孟智启 《浙江农业学报》 CSCD 2007年第6期399-403,共5页
借助电子克隆和RACE方法,克隆了松材线虫生长发育关键基因actin的全长cDNA序列(登陆号:EU100952)。该序列共1 296个碱基,有一个完整ORF,起始密码子在48位,终止密码子在1 176位,编码376个氨基酸。
关键词 松材线虫 ACTIN基因 全长CDNA
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绿色荧光蛋白基因标记枯草芽孢杆菌研究 被引量:2
14
作者 沈卫锋 牛宝龙 +3 位作者 翁宏飚 刘岩 何丽华 孟智启 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2009年第3期202-206,共5页
将源于枯草芽孢杆菌168的木糖启动子xylR和来源于载体pGFPuv的gfp基因连接,插入枯草芽孢杆菌—大肠杆菌穿梭载体pIM,成功构建了以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因的重组载体pIM-GFP。转化枯草芽孢杆菌菌株BS523,突变株在荧光显微镜及紫外... 将源于枯草芽孢杆菌168的木糖启动子xylR和来源于载体pGFPuv的gfp基因连接,插入枯草芽孢杆菌—大肠杆菌穿梭载体pIM,成功构建了以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因的重组载体pIM-GFP。转化枯草芽孢杆菌菌株BS523,突变株在荧光显微镜及紫外灯下均观察到较强的绿色荧光,同时PCR鉴定结果正确。表明重组载体pIM-GFP成功转入菌株BS523,并且gfp基因成功表达。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 绿色荧光蛋白 重组载体
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虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei)SWP2基因的克隆、表达及其在虾类病害检测中的应用 被引量:1
15
作者 沈卫锋 郭琦 +3 位作者 刘莉 牛宝龙 翁宏飚 楼宝 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2021年第6期993-1000,共8页
虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei,EHP)是虾类养殖过程中一种非常重要的病原微生物。目前常用的EHP检测方法是以核糖体18S基因为靶基因的PCR检测,但由于18S基因的高度保守性,该方法存在一定的非特异性扩增问题。本研究利用电子... 虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei,EHP)是虾类养殖过程中一种非常重要的病原微生物。目前常用的EHP检测方法是以核糖体18S基因为靶基因的PCR检测,但由于18S基因的高度保守性,该方法存在一定的非特异性扩增问题。本研究利用电子克隆方法,得到了特异性较高的EHP孢壁蛋白2(spore wall protein 2,SWP2)基因。该基因的cDNA全长为1019 bp,开放阅读框全长687 bp,编码229个氨基酸,预测相对分子质量为26.32 ku,5′非编码区为120 bp,3′非编码区为179 bp,系统进化分析表明与毕氏肠孢虫和绒螯蟹肠孢虫具有较近的亲缘关系。构建了重组表达载体pET15b-SWP2,利用原核表达得到SWP2蛋白,相对分子质量约为28 ku,并制备了该蛋白的单克隆抗体。采用常规PCR及Western blot方法对市售的商品虾进行了EHP感染情况检测,结果显示,两种方法均能准确地进行检测分析。本研究结果为虾农肝肠微孢子虫病的诊断提供了技术支撑,同时为SWP2蛋白功能的研究打下了基础。 展开更多
关键词 虾肝肠胞虫 SWP2基因 蛋白表达 单克隆抗体 病害检测
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马尾松毛虫越冬饲养初探 被引量:1
16
作者 何丽华 翁宏飚 +3 位作者 牛宝龙 沈卫锋 吾中良 孟智启 《浙江林业科技》 北大核心 2007年第2期48-50,共3页
将室内自然温度饲养的第2代马尾松毛虫成虫所产的卵孵化后收集幼虫,分别以自然温度和加温饲养越冬。结果表明,通过加温的方法马尾松毛虫在室内可以继代饲养,室内自然温度越冬饲养1代过程中可以加温饲养3代,加温饲养的马尾松毛虫成虫的... 将室内自然温度饲养的第2代马尾松毛虫成虫所产的卵孵化后收集幼虫,分别以自然温度和加温饲养越冬。结果表明,通过加温的方法马尾松毛虫在室内可以继代饲养,室内自然温度越冬饲养1代过程中可以加温饲养3代,加温饲养的马尾松毛虫成虫的产卵量和孵化率与越冬代相比没有明显的差异。 展开更多
关键词 马尾松毛虫 越冬饲养 加温
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松材线虫RNA聚合酶基因的RNA干扰研究 被引量:6
17
作者 王守先 牛宝龙 +5 位作者 沈卫锋 翁宏飚 何丽华 蒋平 吾中良 孟智启 《浙江农业科学》 2007年第6期690-694,共5页
克隆了松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)RNA聚合酶基因片段,构建大量表达松材线虫RNA聚合酶基因片段的特异双链RNA(dsRNA)表达载体,并用表达的双链RNA(dsRNA)对松材线虫进行了RNA干扰实验。结果表明,松材线虫浸泡在20℃的RNA聚合... 克隆了松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)RNA聚合酶基因片段,构建大量表达松材线虫RNA聚合酶基因片段的特异双链RNA(dsRNA)表达载体,并用表达的双链RNA(dsRNA)对松材线虫进行了RNA干扰实验。结果表明,松材线虫浸泡在20℃的RNA聚合酶基因双链RNA(dsRNA)溶液中干扰24 h后再培养12 d,其繁殖倍数为73.2;对照处理的繁殖倍数为322.8,两者的繁殖倍数相差4.4倍;松材线虫浸泡在4℃的RNA聚合酶基因双链RNA(dsRNA)溶液中干扰24 h后再培养12 d,其繁殖倍数为120.8。RNA聚合酶基因的双链RNA(dsRNA)浸泡明显的抑制了松材线虫的繁殖;并且发现利用浸泡法对线虫进行干扰试验,双链RNA(dsRNA)20℃浸泡的干扰效果要好于前人报道4℃浸泡的干扰效果。 展开更多
关键词 松材线虫 双链RNA(dsRNA) RNA干扰
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AcNPV对棉铃虫的感染试验
18
作者 何丽华 翁宏飚 +2 位作者 牛宝龙 沈卫锋 孟智启 《浙江农业科学》 2006年第5期584-586,共3页
棉铃虫穿刺接种病毒滴度为1×108,1×107,1×106,1×105,1×104,1×103,1×102pfu的AcNPV液,在幼虫期或蛹期都能感染发病,且随着AcNPV病毒浓度的增加死亡率也提高;镜检死亡幼虫或死亡蛹都可见AcNPV病毒多... 棉铃虫穿刺接种病毒滴度为1×108,1×107,1×106,1×105,1×104,1×103,1×102pfu的AcNPV液,在幼虫期或蛹期都能感染发病,且随着AcNPV病毒浓度的增加死亡率也提高;镜检死亡幼虫或死亡蛹都可见AcNPV病毒多角体。设计AcNPV特异引物,对试验区存活的棉铃虫成虫进行PCR检测,收集阳性个体的后代幼虫,饲养后进行PCR检测AcNPV,结果均为阴性,初步试验表明,AcNPV病毒能感染棉铃虫幼虫、蛹及成虫,但并不能垂直传播。 展开更多
关键词 AcNPV多角体 棉铃虫 穿刺接种
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