版纳微型猪近交系精子冷冻保存研究 被引量：4

1

作者 查星琴 肖晶 +5 位作者 成文敏 霍金龙 王淑燕 王配 潘伟荣 曾养志 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第1期167-172,共6页

在版纳微型猪近交系(BMI)公猪精液冷冻保存稀释液中添加不同浓度甘油,并对不同解冻液配方和解冻方法进行研究,对比解冻后的精子活力、质膜完整率和顶体完整率,优化BMI公猪精液冷冻保存方法。结果表明,解冻后,甘油浓度为2%和3%组的精子... 在版纳微型猪近交系(BMI)公猪精液冷冻保存稀释液中添加不同浓度甘油,并对不同解冻液配方和解冻方法进行研究,对比解冻后的精子活力、质膜完整率和顶体完整率,优化BMI公猪精液冷冻保存方法。结果表明,解冻后,甘油浓度为2%和3%组的精子活力、质膜完整率、顶体完整率显著高于1%、4%和5%组(P<0.05);Ⅰ号解冻液解冻后精子活力、质膜完整率、顶体完整率均显著高于Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ号解冻液(P<0.05);在活力、质膜完整率和顶体完整率方面,40℃6s和50℃6s这两种程序的解冻效果都显著优于38℃30s(P<0.05)。由此可见,2%或3%的甘油作为抗冻保护剂、Ⅰ号解冻液解冻、40℃6s或50℃6s水浴解冻是较为理想的BMI公猪精液冷冻保存方法。 展开更多

关键词 版纳微型猪近交系 猪精液 冷冻保存 解冻液

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版纳微型猪近交系成纤维细胞系的建立及冻存方法研究 被引量：1

2

作者 查星琴 潘伟荣 +5 位作者 肖晶 成文敏 信吉阁 卿玉波 刘海京 曾养志 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期661-665,共5页

本试验旨在观察胶原酶对版纳微型猪近交系（Banna mini-pig inbred line,BMI）耳组织的消化效果,探讨不同冻存方法对耳组织成纤维细胞存活率的影响.用胶原酶Ⅳ消化法培养BMI 60日龄仔猪原代耳组织成纤维细胞,建立耳组织成纤维细胞系,比... 本试验旨在观察胶原酶对版纳微型猪近交系（Banna mini-pig inbred line,BMI）耳组织的消化效果,探讨不同冻存方法对耳组织成纤维细胞存活率的影响.用胶原酶Ⅳ消化法培养BMI 60日龄仔猪原代耳组织成纤维细胞,建立耳组织成纤维细胞系,比较-80℃条件下分别保存3,5,7,30 d后冻存效果.结果表明：BMI仔猪成纤维细胞具有典型的成纤维细胞特征;生长曲线呈“S”形,倍增时间为37.1h;-80℃冻存3,5,7d的成纤维细胞存活率与液氮保存（93.74％）差异不显著（P＞0.05）,冻存30 d的存活率（79.38％）显著低于其他各组（P＜0.05）,但经48 ～ 72 h培养后仍能贴壁生长.因此,可得出此结论：采用胶原酶Ⅳ消化法可消化BMI耳组织成纤维细胞,而且该细胞在-80℃条件下能进行短期保存. 展开更多

关键词 BMI(版纳微型猪近交系) 成纤维细胞 胶原酶Ⅳ 冷冻保存

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基因敲除技术最新研究进展及其应用 被引量：15

3

作者 陶果 信吉阁 +4 位作者 肖晶 刘海京 成文敏 查星琴 曾养志 《安徽农业科学》 CAS 2013年第29期11605-11608,11644,共5页

基因敲除技术是基因功能研究的最直接和有效的方法之一。近年来发展起来多种基因组功能性研究的高效工具,包括ZFNs、TALENs和Cas9等,为高效率基因打靶开辟了一条全新的思路。这些基因编辑的革命性技术,能大力推动生物学、医学研究的发... 基因敲除技术是基因功能研究的最直接和有效的方法之一。近年来发展起来多种基因组功能性研究的高效工具,包括ZFNs、TALENs和Cas9等,为高效率基因打靶开辟了一条全新的思路。这些基因编辑的革命性技术,能大力推动生物学、医学研究的发展。但对这些新技术还没有进行系统研究。文中对基因敲除发展历程、技术原理以及新技术的应用等进行概述,为基因敲除技术的进一步发展应用提供依据。 展开更多

关键词 基因敲除 RNA干扰 ZFNs TALENs Cas9

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猪SLA-Ⅱ类基因的研究概况 被引量：3

4

作者 潘伟荣 张清政 +3 位作者 霍金龙 查星琴 牛自兵 曾养志 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期759-763,共5页

猪主要组织相容性复合体又称SLA,即为猪白细胞抗原,其编码基因位于猪的第7号染色体上,是一组紧密连锁、高度多态的基因群,包括多个不同位点,是编码移植抗原,控制免疫细胞各亚群间协同作用的一个基因复合体。它不仅与移植排斥有关,而且... 猪主要组织相容性复合体又称SLA,即为猪白细胞抗原,其编码基因位于猪的第7号染色体上,是一组紧密连锁、高度多态的基因群,包括多个不同位点,是编码移植抗原,控制免疫细胞各亚群间协同作用的一个基因复合体。它不仅与移植排斥有关,而且广泛参与免疫应答的诱导和调节,在遗传、进化、行为、保护及生态等方面都具有重要的科学意义。就SLA-Ⅱ类区域基因目前的研究现状,对它的位置、分类、功能、多态、表达及应用等方面进行了系统阐述。 展开更多

关键词 猪 MHC SLA 移植排斥 免疫应答 SLA-Ⅱ类基因

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版纳微型猪近交系不育和可育公猪CRISP2基因全长编码区序列克隆及睾丸差异表达分析 被引量：3

5

作者 陈园园 潘伟荣 +4 位作者 霍金龙 王淑燕 王配 查星琴 曾养志 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期698-705,共8页

CRISP2作为弱精子症发生的重要候选基因,为深入研究CRISP2与精子活力的关系及其在体内的调节与功能提供基础资料,本研究以版纳微型猪近交系(BMI)不育和可育公猪为试验动物,通过RT-PCR方法扩增得到CRISP2基因全长编码区序列,不育和可育... CRISP2作为弱精子症发生的重要候选基因,为深入研究CRISP2与精子活力的关系及其在体内的调节与功能提供基础资料,本研究以版纳微型猪近交系(BMI)不育和可育公猪为试验动物,通过RT-PCR方法扩增得到CRISP2基因全长编码区序列,不育和可育公猪序列无差异,提交Gen Bank数据库,获得登录号为"KP780059"。生物信息学分析显示,该基因编码244个氨基酸,蛋白分子量为27.05 ku,等电点为6.76。蛋白质结构分析得出,CRISP2存在2个保守域,无跨膜结构,存在信号肽及1个亮氨酸富集的核输出信号,N端、C端均疏水;亚细胞定位显示该蛋白分泌到细胞周质的概率为94.1%。系统进化分析表明,猪与牛、绵羊的亲缘关系较近。同时,利用荧光定量PCR法确定了CRISP2 mRNA在BMI不育及可育公猪14个组织中的表达量,发现其在睾丸中特异表达,CRISP2基因在不育公猪睾丸中的表达量明显低于可育公猪,两组之间的表达量有显著的统计学差异(P<0.05),表明CRISP2表达的减少可能导致精子活力下降。本研究为进一步研究猪CRISP2基因在精子发生方面的作用奠定研究基础。 展开更多

关键词 猪 CRISP2 精子发生 生物信息学 组织表达

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版纳微型猪近交系DLDH基因编码区序列扩增及生物信息学分析 被引量：3

6

作者 成文敏 潘伟荣 +4 位作者 尹俊芳 黄言 查星琴 肖晶 曾养志 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1706-1712,共7页

本试验旨在扩增版纳微型猪近交系DLDH基因编码区序列,为进一步研究DLDH基因的表达信号通路及与精子获能和顶体反应发生相关基因的表达调控提供必要的基础。通过提取版纳微型猪近交系睾丸组织RNA,经反转录后获得cDNA,设计特异性引物以扩... 本试验旨在扩增版纳微型猪近交系DLDH基因编码区序列,为进一步研究DLDH基因的表达信号通路及与精子获能和顶体反应发生相关基因的表达调控提供必要的基础。通过提取版纳微型猪近交系睾丸组织RNA,经反转录后获得cDNA,设计特异性引物以扩增DLDH基因的编码区序列,经测序后采用生物信息学软件对编码区序列及氨基酸序列进行生物信息学分析和结构预测。结果表明,版纳微型猪近交系DLDH基因编码区序列全长1 530bp,编码509个氨基酸。生物信息学分析表明,不同物种DLDH基因编码区核苷酸序列和氨基酸序列具有较强的保守性,DLDH蛋白中存在丰富的磷酸化位点,空间结构以α-螺旋和无规则卷曲为主。 展开更多

关键词 版纳微型猪近交系 DLDH基因 编码区 蛋白质结构预测

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不同采集方法对猪卵母细胞的采集效率和成熟率的影响 被引量：1

7

作者 卿玉波 魏红江 +6 位作者 姜河海 信吉阁 李红 许成盛 查星琴 潘伟荣 曾养志 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期629-634,共6页

本研究旨在开发出一种对COCs损伤小且采集效率和卵母细胞成熟率高的卵母细胞采集方法。从屠宰场采集来的卵巢运回实验室后随机分为3组,分别用抽吸法、解剖法和刀切过滤法3种方法采集COCs,然后进行体外成熟培养,通过对COCs采集效率、COC... 本研究旨在开发出一种对COCs损伤小且采集效率和卵母细胞成熟率高的卵母细胞采集方法。从屠宰场采集来的卵巢运回实验室后随机分为3组,分别用抽吸法、解剖法和刀切过滤法3种方法采集COCs,然后进行体外成熟培养,通过对COCs采集效率、COCs完整性及卵母细胞体外成熟率的比较,研究解剖法、刀切过滤法和抽吸法3种采集方法对猪卵母细胞的采集效率和成熟率的影响。结果表明:每个卵巢采集COCs个数,刀切过滤法显著高于解剖法和抽吸法(P<0.05),而解剖法仅为1.55个,显著低于抽吸法(P<0.05);采集效率抽吸法最佳,采集和挑选单个COCs的时间显著低于解剖法和刀切过滤法(P<0.05),刀切过滤法次之,但显著低于解剖法(P<0.05);A、B级COCs比例,解剖法高达99.23%,显著高于其他2种方法(P<0.05),刀切过滤法与抽吸法差异不显著(P>0.05);卵母细胞的成熟率,解剖法和刀切过滤法都达到80%,二者间差异不显著(P>0.05),但显著高于抽吸法(P<0.05);100个成熟卵母细胞所需的卵巢数量,刀切过滤法最少,仅为17.4个,而解剖法和抽吸法分别高达80.6和90.3个;需要的总采集时间(采集和挑选的时间),刀切过滤法最低,仅为126.6min,而解剖法最高,为758.9min。综上所述,与抽吸法和解剖法相比,刀切过滤法是一种高效、快速的卵母细胞采集方法。 展开更多

关键词 猪卵母细胞 体外成熟培养 抽吸法 解剖法 刀切过滤法

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版纳微型猪近交系KITLG基因克隆、组织表达及功能特性分析 被引量：1

8

作者 张霞 王淑燕 +3 位作者 王配 查星琴 潘伟荣 霍金龙 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2018年第2期255-261,共7页

【目的】研究KITLG基因在猪生殖细胞发育过程中的作用。【方法】从Gen Bank下载猪KITLG序列作为参考序列,设计特异引物从版纳微型猪近交系(BMI)附睾组织中扩增KITLG基因完全编码序列及部分侧翼序列;应用半定量PCR技术检测BMI 10个重要... 【目的】研究KITLG基因在猪生殖细胞发育过程中的作用。【方法】从Gen Bank下载猪KITLG序列作为参考序列,设计特异引物从版纳微型猪近交系(BMI)附睾组织中扩增KITLG基因完全编码序列及部分侧翼序列;应用半定量PCR技术检测BMI 10个重要组织的KITLG m RNA转录表达水平,并对KITLG翻译的蛋白质序列进行多种功能生物信息学分析,预测KITLG蛋白质的功能,最后构建KITLG的多物种氨基酸系统进化树。【结果】扩增得到BMI KITLG编码区序列长825 bp,编码274个氨基酸,序列已提交Gen Bank,基因登录号KU705624,对应的氨基酸登录号AOC89042。多组织相对半定量表达分析表明:KITLG基因在附睾、心、脾、肺、肾、胃中高表达,在大脑、肝、小肠和睾丸中低表达。功能生物信息学分析表明:KITLG存在1个保守结构域SCF,有1个跨膜螺旋结构,存在N端信号肽序列,N末端和C末端均亲水,二级结构以α螺旋为主,有5类功能活性位点。系统进化分析表明:KITLG在进化中高度保守,且与牛、羊的亲缘关系最近。【结论】研究结果为探索BMI KITLG基因在生殖细胞发育过程中的作用及功能奠定基础。 展开更多

关键词 干细胞因子 版纳微型猪近交系 组织表达 生物信息学

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版纳微型猪近交系AO血型A基因的克隆及生物信息学分析 被引量：1

9

作者 潘伟荣 查星琴 +5 位作者 成文敏 卿玉波 肖晶 魏红江 曾养志 霍金龙 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2018年第1期56-62,共7页

【目的】扩增版纳微型猪近交系AO血型A基因编码区全长序列,并对序列进行生物信息学分析。【方法】提取版纳微型猪近交系猪组织的RNA,反转录成为cDNA,利用RT-PCR方法扩增AO血型A基因编码区全长序列,将纯化的片段与pMD18-T载体连接,转化... 【目的】扩增版纳微型猪近交系AO血型A基因编码区全长序列,并对序列进行生物信息学分析。【方法】提取版纳微型猪近交系猪组织的RNA,反转录成为cDNA,利用RT-PCR方法扩增AO血型A基因编码区全长序列,将纯化的片段与pMD18-T载体连接,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆并测定其序列,利用生物信息学方法分析其序列特征,并与其他12种物种构建系统进化树。【结果】版纳微型猪近交系AO血型A基因编码区全长1 095 bp,编码364个氨基酸,氨基酸序列与GenBank上登录的猪AO基因氨基酸序列相似性为99.5%。【结论】版纳微型猪近交系的AO血型A基因除了与黑猩猩、人和小鼠亲缘关系较远外,与牦牛、藏羚羊、水牛、小须鲸、绵羊、羊驼、野骆驼、山羊的关系都较为接近,其中与山羊的亲缘关系最为接近。 展开更多

关键词 版纳微型猪近交系 AO血型A基因 克隆测序 生物信息学

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版纳微型猪近交系白细胞介素6基因克隆、生物信息学及组织表达分析 被引量：1

10

作者 王配 陈园园 +6 位作者 霍金龙 霍海龙 王淑燕 潘伟荣 成文敏 查星琴 曾养志 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第8期1925-1934,共10页

白细胞介素6(IL-6)是机体重要的免疫调节因子,在佐剂的应用方面具有很好的发展前景。本研究以版纳微型猪近交系(BMI)为实验动物,通过PCR法获得IL-6基因编码区序列,提交GenBank数据库,登录号为JQ839263。对BMI IL-6基因和相应的蛋白序列... 白细胞介素6(IL-6)是机体重要的免疫调节因子,在佐剂的应用方面具有很好的发展前景。本研究以版纳微型猪近交系(BMI)为实验动物,通过PCR法获得IL-6基因编码区序列,提交GenBank数据库,登录号为JQ839263。对BMI IL-6基因和相应的蛋白序列进行了生物信息学分析,结果显示该基因编码212个氨基酸,分子质量为23.88ku,等电点(pI)为6.66,存在一个保守结构域,一个跨膜结构,N端和C端均疏水,且在N端存在信号肽,有89%的可能性定位于细胞核。将BMI的IL-6基因编码区序列与NCBI下载到的4条猪IL-6基因序列进行比对,结果显示BMI IL-6与GenBank登录号为NM_214399和DQ832259的核苷酸序列完全相同,与GenBank登录号为AF309651和AF518322的核苷酸序列各存在1处碱基差异;多物种氨基酸序列比对及系统进化分析结果表明,BMI与骆驼亲缘关系最近。同时利用半定量PCR法确定了IL-6基因mRNA在BMI 12个组织中的表达量,结果发现在肺脏、皮肤、肌肉中表达量较高。本研究为进一步研究猪IL-6基因的表达调控奠定了理论基础。 展开更多

关键词 版纳微型猪近交系 白细胞介素6 免疫调节 基因克隆 组织表达

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版纳微型猪近交系细胞色素P450家族基因CYP1A1克隆及生物信息学分析

11

作者 王淑燕 王配 +4 位作者 霍金龙 查星琴 潘伟荣 张霞 王雪飞 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2017年第3期442-449,共8页

【目的】克隆版纳微型猪近交系(Banna mini-pig inbred line,BMI)细胞色素P450家族基因CYP1A1的编码区序列,并对其进行生物信息学分析。【方法】利用RT-PCR方法获得CYP1A1基因的全长CDS序列,运用生物信息学对其核酸及蛋白序列进行分析,... 【目的】克隆版纳微型猪近交系(Banna mini-pig inbred line,BMI)细胞色素P450家族基因CYP1A1的编码区序列,并对其进行生物信息学分析。【方法】利用RT-PCR方法获得CYP1A1基因的全长CDS序列,运用生物信息学对其核酸及蛋白序列进行分析,构建系统进化树。【结果】获得的BMI CYP1A1 CDS长度为1551 bp,编码516个氨基酸,蛋白质分子量为58.39 ku,等电点为7.83,位于内质网的概率是94.1%。CYP1A1蛋白质含有1个细胞色素P450半胱氨酸血红素配体位点,1个N-豆蔻酰化位点,1个酰胺化作用位点,2个N-糖基化位点、6个蛋白酶C磷酸化位点和5个蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点。11个物种构建的系统进化分析表明,BMI(猪)CYP1A1与牛和山羊的关系最近。【结论】以上结果将为进一步研究版纳微型猪近交系CYP1A1基因功能奠定基础。 展开更多

关键词 细胞色素P450家族 CYPIAI基因 编码区序列 版纳微型猪近交系 生物信息学 药物代谢

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版纳微型猪近交系FABP4基因编码区序列扩增及生物信息学分析

12

作者 潘伟荣 查星琴 +4 位作者 尹俊芳 成文敏 黄言 肖晶 曾养志 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期1-5,14,共6页

以GenBank中登载的普通猪FABP4基因为参考序列,设计特异性引物,采用RT-PCR技术从版纳微型猪近交系卵巢组织中扩增FABP4基因的编码区序列,经直接测序后采用生物信息学软件对编码区序列和蛋白质结构进行生物信息学分析和结构预测.结果表明... 以GenBank中登载的普通猪FABP4基因为参考序列,设计特异性引物,采用RT-PCR技术从版纳微型猪近交系卵巢组织中扩增FABP4基因的编码区序列,经直接测序后采用生物信息学软件对编码区序列和蛋白质结构进行生物信息学分析和结构预测.结果表明:版纳微型猪近交系(BMI)FABP4基因编码区序列长399bp,编码132个氨基酸;BMI FABP4基因同普通猪比对同源性为100%,未发现碱基突变;生物信息学分析表明不同物种FABP4基因编码区核苷酸序列与氨基酸序列具有较高的保守性;蛋白结构预测显示,FABP4蛋白空间结构为由2个α螺旋和10个反向平行的β折叠围成的桶状结构. 展开更多

关键词 版纳微型猪 近交系 FABP4基因 RT-PCR 生物信息学 结构预测

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版纳微型猪近交系LRWD1基因克隆及功能生物信息学分析

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作者 张霞 王配 +5 位作者 霍金龙 王淑燕 查星琴 潘伟荣 丁贤群 陈园园 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2017年第1期63-69,共7页

LRWD1基因在精子形成过程中起重要作用。从Gen Bank下载猪及近缘物种的LRWD1 mRNA序列作为参考序列,设计特异引物扩增版纳微型猪近交系(BMI)LRWD1基因。对蛋白质序列进行功能生物信息学分析,构建多物种系统进化树。研究获得了BMI LRWD1 ... LRWD1基因在精子形成过程中起重要作用。从Gen Bank下载猪及近缘物种的LRWD1 mRNA序列作为参考序列,设计特异引物扩增版纳微型猪近交系(BMI)LRWD1基因。对蛋白质序列进行功能生物信息学分析,构建多物种系统进化树。研究获得了BMI LRWD1 1 944 bp的编码区序列(Gen Bank登录号:KU705639,对应的氨基酸登录号:AOC89057),编码647个氨基酸,蛋白质分子量(Mw)为71.40 k D,等电点(p I)为7.52。功能生物信息学分析表明LRWD1蛋白质存在2个保守结构域,无跨膜结构,无信号肽序列;N末端和C末端均疏水;有6类功能活性位点,位于细胞质的概率是70.6%。系统进化分析表明,BMI与狗、大熊猫的亲缘关系最近。研究结果将为进一步研究LRWD1基因在猪精子发生方面的作用及功能奠定基础。 展开更多

关键词 富含亮氨酸的重复序列(LRR) 色氨酸-天冬氨酸重复序列(WD) 版纳微型猪近交系 生物信息学

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云南省部分地区种公猪精液携带繁殖障碍性病毒调查研究 被引量：5

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作者 赵谦 王蕾 +2 位作者 査星琴 杨贵树 尹革芬 《动物医学进展》 北大核心 2017年第9期37-42,共6页

为了解云南省部分地区规模化猪场种公猪精液繁殖障碍病毒性病原的感染状况,应用PCR对2014年—2016年间云南省部分地区规模化猪场212份种公猪精液进行了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒... 为了解云南省部分地区规模化猪场种公猪精液繁殖障碍病毒性病原的感染状况,应用PCR对2014年—2016年间云南省部分地区规模化猪场212份种公猪精液进行了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪细小病毒(PPV)5种与猪繁殖障碍有关的病原检测。结果表明,PPRSV阳性率为7.08%,CSFV阳性率为3.77%,PCV2阳性率为6.60%,PRV阳性率为3.30%,没有检测出PPV,PRRSV和PCV2的感染率呈上升趋势,其他疫病保持相对平稳态势。所有的混合感染样品中,均检测出了PRRSV,其中PRRSV和PCV2的混合感染最为常见。结果提示,控制猪场疫病发生的关键是控制PRRSV和PCV2的流行,有必要加强对种猪群的疫病病毒检测,推行种猪场主要疫病的控制与净化工作。 展开更多

关键词 种公猪 精液 繁殖障碍 病原调查

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