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转无毒基因马铃薯抗晚疫病的研究 (英文) 被引量:13
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作者 杨希才 刘国胜 +3 位作者 王文慧 田波 居玉玲 罗智敏 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期69-70,共2页
晚疫病菌 (Phytophthorainfestans)引起的马铃薯晚疫病是危害全球马铃薯生产的严重病害。通过基因工程方法把外源基因导入植物体内以增强抗病性被证明是一条行之有效的途径。应用植物基因工程技术将具有能激活植物自身防御系统的无毒基... 晚疫病菌 (Phytophthorainfestans)引起的马铃薯晚疫病是危害全球马铃薯生产的严重病害。通过基因工程方法把外源基因导入植物体内以增强抗病性被证明是一条行之有效的途径。应用植物基因工程技术将具有能激活植物自身防御系统的无毒基因与适合于植物背景、非专一性的病原物诱导启动子组合成嵌合基因构建到植物表达载体中。通过农杆菌或基因枪的介导转化植物 ,可筛选出高效广谱的抗真菌和细菌病害的转基因植株。本研究从病原细菌PseudomonassyringaePV .tomato中获得的无毒基因avrD (0·93kb)和从病原真菌Phytophthoraparasitica中获得的无毒基因Elicitin(0 2 94kb)分别与非专一性病原物诱导启动子Pill和BG组成含 2个嵌合基因 (Pill -avrD ,BG -Elicitin)的植物表达载体pYH144和pYHEt。通过农杆菌LBA4 4 0 4介导转化马铃薯 ,其中用pYH144载体转化 2个品种 (克新 1号 ,2号 ) ,用pYHEt载体转化 3个品种 (Desiree ,克新 2号 ,4号 ) ,通过组织培养分别获得潮霉素 (HygromycinB)标记的转基因马铃薯试管苗。将转基因试管苗扩繁 ,应用马铃薯脱毒微型种薯生产技术获得转无毒基因微型薯 ,在温室 (15~ 2 5℃和湿度高 )条件下 ,观察转无毒基因马铃薯植株中对晚疫病菌自然感染的抗性。 1998年和 1999年 (每年的 3- 展开更多
关键词 无毒基因 晚疫病 转基因马铃薯 抗性
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影响甲醇酵母中外源蛋白表达的因素 被引量:31
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作者 彭毅 杨希才 康良仪 《生物技术通报》 CAS CSCD 2000年第4期33-36,共4页
甲醇酵母系统由于其在表达蛋白方面无可比拟的优越性 ,已越来越得到广泛的应用。但不同的外源蛋白表达量有很大差异。介绍了影响甲醇酵母中外源蛋白表达的因素 ,这将有助于揭示甲醇酵母中外源蛋白表达的内在机制。
关键词 甲醇酵母 外源蛋白 基因拷贝 表达
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锤头型核酶作用机理的研究进展 被引量:3
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作者 邓文生 杨希才 +1 位作者 彭毅 康良仪 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1999年第5期422-425,共4页
概述了锤头型核酶的二级结构特征, 动力学反应的特点以及核酶切割反应的催化机制,
关键词 锤头型核酶 动力学反应 催化机制
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专一切割猴免疫缺陷病毒3′端LTR 10拷贝自切割核酶的制备及体外催化活性动力学分析 被引量:1
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作者 邓文生 张奉学 +3 位作者 杨希才 符林春 康良仪 990.net 《中国生物化学与分子生物学报》 CSCD 2000年第3期363-367,共5页
将锤头型核酶切割的一段靶序列连接在核酶下游构成自切割核酶 .人工合成的自切割核酶基因扩增并克隆在 p Bluescript SK的 Xho - Sal 位点 .通过连续 4次克隆获得 1 0拷贝核酶基因的载体 .体外转录单体核酶和 1 0体核酶后 ,37℃温育 1 5... 将锤头型核酶切割的一段靶序列连接在核酶下游构成自切割核酶 .人工合成的自切割核酶基因扩增并克隆在 p Bluescript SK的 Xho - Sal 位点 .通过连续 4次克隆获得 1 0拷贝核酶基因的载体 .体外转录单体核酶和 1 0体核酶后 ,37℃温育 1 5min,至少 85%的 1 0体核酶发生自切割 ,并释放出单体核酶 .反式切割研究表明 ,1 0体核酶表现出极高的催化活性 .尽管 1 0体核酶的浓度不到单体核酶的十分之一 ,在反应初始 2 5min内 ,1 0体核酶的催化产物平均超过单体核酶1 3.31 % .1 0体核酶一级反应速度常数是单体核酶的 1 .86倍 .从这些数据可以推断 ,1 展开更多
关键词 锤头型核酶 多体自切割 制备 酶学动力学
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快速制备RNA小分子质量标记的新方法
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作者 邓文生 杨希才 +3 位作者 康良仪 张奉学 符林春 990.net 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第3期309-311,共3页
在锤头型核酶下游增加一段核酶作用的靶序列 ,使之成为自切割的核酶 .将自切割核酶基因合成 ,扩增并克隆在质粒pBluescriptSK上 ,经连续 4次克隆获得含 10个拷贝的自切割核酶基因的载体 .5%聚丙烯酰胺变性凝胶电泳结果显示 :体外转录过... 在锤头型核酶下游增加一段核酶作用的靶序列 ,使之成为自切割的核酶 .将自切割核酶基因合成 ,扩增并克隆在质粒pBluescriptSK上 ,经连续 4次克隆获得含 10个拷贝的自切割核酶基因的载体 .5%聚丙烯酰胺变性凝胶电泳结果显示 :体外转录过程中多体酶发生了自切割 ,核酶转录物切割成从 70nt到 70 6nt的RNA等梯度带 ,因此 。 展开更多
关键词 锤头型核酶 自切割 RNA分子质量标记 制备
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蜜蜂蛹病病理及诊断的研究
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作者 冯峰 陈淑静 +3 位作者 康雪冬 杨希才 张全华 王顺海 《中国养蜂》 1993年第6期15-17,共3页
对自然感染蜜蜂蛹病的蜂场调查、取样及症状观察,查明患病的蜜蜂蛹体色由白色变为灰白色,后期变为干枯状黑色,巢房盖被咬开,呈“白头蛹”状;感染试验表明,患病死亡的蜂蛹和病蜂群中的蜂王是传染来源;取自死亡工蜂蛹的头部,中肠组织和病... 对自然感染蜜蜂蛹病的蜂场调查、取样及症状观察,查明患病的蜜蜂蛹体色由白色变为灰白色,后期变为干枯状黑色,巢房盖被咬开,呈“白头蛹”状;感染试验表明,患病死亡的蜂蛹和病蜂群中的蜂王是传染来源;取自死亡工蜂蛹的头部,中肠组织和病蜂王卵巢组织作超薄病理切片,经电镜检测发现大量直径约20毫微米的球型病毒粒子。电镜和免疫电镜诊断,均观察到大量的约20毫微米的球型病毒粒子;此外,还对症状诊断、鉴别诊断和血清学诊断进行了研究。 展开更多
关键词 蜜蜂 蛹病 病理 诊断
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