新城疫病毒通用型实时RT-PCR检测方法的建立与应用 被引量：6

1

作者 张鹤晓 高志强 +7 位作者 赖平安 张利峰 谷强 杨伟 刘继红 郭晋优 段生涛 张向东 《动物医学进展》 CSCD 2005年第11期53-56,共4页

采用Taq Man方法,经引物和探针的设计、筛选及反应条件优化,研究了检测活禽和禽产品中新城疫病毒的通用型实时RT-PCR(RRT-PCR)方法.结果显示,对12株分别为速发型、中发型、缓发型和疫苗株新城疫病毒的尿囊液倍比稀释液的检测极限在10-5... 采用Taq Man方法,经引物和探针的设计、筛选及反应条件优化,研究了检测活禽和禽产品中新城疫病毒的通用型实时RT-PCR(RRT-PCR)方法.结果显示,对12株分别为速发型、中发型、缓发型和疫苗株新城疫病毒的尿囊液倍比稀释液的检测极限在10-5～10-7之间;建立的方法与常见禽类病毒无交叉反应,特异性良好;在检测人工感染肉鸡的脏器组织、咽喉、泄殖腔拭子中病毒的灵敏度同鸡胚分离试验基本一致;弱毒疫苗免疫鸡群在免疫后14 d,应用本方法不能从咽喉、泄殖腔拭子中检测到病毒;临床样品检测表明,该方法不仅可以检出中强毒力新城疫毒株,也可检出缓发型野毒株和疫苗毒株. 展开更多

关键词 新城疫病毒 实时RT—PCR

在线阅读 下载PDF 职称材料

牛肠道病毒2型的分离与鉴定 被引量：21

2

作者 彭小薇 董浩 +3 位作者 吴丹 张鹤晓 吴清民 吕艳丽 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期823-828,共6页

本研究从北京某牛场发生严重腹泻的泌乳奶牛采集直肠拭子,接种MDBK细胞,分离获得1株病毒,命名为BJ001。理化特性鉴定结果表明,该病毒大小约30nm,为无囊膜的RNA病毒;用随机PCR方法对氯化铯梯度离心后的各区带扩增,扩增产物凝胶电泳后,回... 本研究从北京某牛场发生严重腹泻的泌乳奶牛采集直肠拭子,接种MDBK细胞,分离获得1株病毒,命名为BJ001。理化特性鉴定结果表明,该病毒大小约30nm,为无囊膜的RNA病毒;用随机PCR方法对氯化铯梯度离心后的各区带扩增,扩增产物凝胶电泳后,回收"呈彗尾样拖带现象"最明显的区带2的500～1 500bp的片段进行序列测定与分析,结果显示,扩增片段与GenBank中已知的牛肠道病毒2型相似性较高;用BEV2型特异性引物对病毒进行RT-PCR扩增,并将扩增产物进行序列测定与分析,结果表明,其与BEV2相似性最高可达93%。故该病毒被确定为牛肠道病毒2型。将该病毒接种2头成年健康奶牛,均未出现肉眼可见的临床症状,但病毒可在接种奶牛体内持续存在,并产生较高滴度抗体。 展开更多

关键词 牛肠道病毒2型 分离与鉴定 理化特性 随机PCR

在线阅读 下载PDF 职称材料

非洲马瘟病毒VP7基因拼接、表达及重组ELISA方法的建立与初步应用 被引量：12

3

作者 高志强 张鹤晓 +7 位作者 赖平安 谷强 蒲静 汪琳 乔彩霞 吴丹 柏亚铎 张伟 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1548-1553,共6页

采用人工拼接的方式拼接了非洲马瘟病毒(AHSV)含有绝大多数线性抗原表位的VP7编码基因片段,克隆于pET-30a构建重组质粒pET-30a-VP7,将pET-30a-VP7转化BL21(DE3),经1.0 mmol/L IPTG诱导,外源基因以包涵体的形式获得高效表达。通过Dot-EL... 采用人工拼接的方式拼接了非洲马瘟病毒(AHSV)含有绝大多数线性抗原表位的VP7编码基因片段,克隆于pET-30a构建重组质粒pET-30a-VP7,将pET-30a-VP7转化BL21(DE3),经1.0 mmol/L IPTG诱导,外源基因以包涵体的形式获得高效表达。通过Dot-ELISA以及ELISA试验证明表达产物具有良好的反应原性。以纯化后表达产物作为诊断抗原包被酶标板建立了检测AHSV抗体的间接ELISA方法。结果表明,抗原的最佳包被浓度为0.25μg/mL,血清的最佳稀释度为1∶40,待检血清阳性临界值初步定为0.25。用此方法和商品化ELISA试剂盒检测了184份血清样品,结果完全符合。 展开更多

关键词 非洲马瘟 基因拼接 重组ELISA

在线阅读 下载PDF 职称材料

新城疫病毒核酸检测标准物质研究 被引量：9

4

作者 谷强 张伟 +5 位作者 高志强 张鹤晓 刘环 蒲静 乔彩霞 张利峰 《中国动物检疫》 CAS 2012年第11期40-43,共4页

分别设计了3对引物,从灭活新城疫病毒F48E9株和Lasota疫苗株病毒提取的RNA中扩增了完整的M、FA和HN基因编码序列,并克隆于pGEM-T。经测序确认后,采用体外转录方法制备了6种RNA纯品。初步定量后,用RNA保存液稀释至含量约108拷贝数/mL,分... 分别设计了3对引物,从灭活新城疫病毒F48E9株和Lasota疫苗株病毒提取的RNA中扩增了完整的M、FA和HN基因编码序列,并克隆于pGEM-T。经测序确认后,采用体外转录方法制备了6种RNA纯品。初步定量后,用RNA保存液稀释至含量约108拷贝数/mL,分装。分装后均一性检测结果显示瓶间差异<5%,稳定性实验表明室温20～25℃(相对湿度20%～50%)14天稳定;长期监测结果表明:2～8℃6个月及-20℃保存1年的含量均无明显变化。委托多家实验室采用外标实时荧光定量RT-PCR检测方法对制备的标准物质进行准确定值。以上结果表明该制备物可以作为新城疫病毒的核酸检测标准物质。 展开更多

关键词 新城疫病毒 核酸扩增 标准物质

在线阅读 下载PDF 职称材料

动物检疫实验室禽流感检验能力验证样本制备技术的研究 被引量：3

5

作者 刘来福 张鹤晓 +4 位作者 张利峰 谷强 高志强 张向东 段向英 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2007年第9期45-48,共4页

近年来在国际范围内发生的由高致病力禽流感等动物源性疫病造成的食品安全恐慌．给畜牧养殖业造成了严重的打击．使各国政府对动物源性食品安全问题予以前所未有的高度重视。动物检疫实验室能力验证的考核作为实验室质量控制方法、证实... 近年来在国际范围内发生的由高致病力禽流感等动物源性疫病造成的食品安全恐慌．给畜牧养殖业造成了严重的打击．使各国政府对动物源性食品安全问题予以前所未有的高度重视。动物检疫实验室能力验证的考核作为实验室质量控制方法、证实实验室自身实力．已成为促进检疫结果准确和国家动物源性食品安全技术支撑体系的有力工具．为实验室检疫结果的国际间互相承认在我国食品贸易中将具有更加积极的现实意义。 展开更多

关键词 高致病力禽流感 能力验证 动物检疫 实验室 制备技术 动物源性食品安全 食品安全问题 样本

在线阅读 下载PDF 职称材料

狂犬病病毒糖蛋白膜外区表达及中和抗体间接ELISA检测方法的建立 被引量：2

6

作者 高志强 谷强 +7 位作者 张鹤晓 赖平安 柏亚铎 蒲静 张伟 乔彩霞 汪琳 吴丹 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1514-1520,共7页

采用RT-PCR方法克隆了狂犬病病毒CVS株G蛋白基因编码区,进而将完整编码区和膜外区编码基因分别克隆于pET-32a,将其中含膜外区编码基因的重组质粒pET-32a-PG转化BL21(DE3),经1.0 mmol.L-1IPTG诱导,外源基因获得高效表达。通过Western-blo... 采用RT-PCR方法克隆了狂犬病病毒CVS株G蛋白基因编码区,进而将完整编码区和膜外区编码基因分别克隆于pET-32a,将其中含膜外区编码基因的重组质粒pET-32a-PG转化BL21(DE3),经1.0 mmol.L-1IPTG诱导,外源基因获得高效表达。通过Western-blot以及ELISA试验证明表达产物具有良好的反应原性。以纯化后的表达产物作为抗原包被酶标板,用已知中和抗体效价的OIE参考血清对该方法进行了标准化,建立了检测狂犬病病毒中和抗体的间接ELISA方法。结果表明,抗原的最佳包被量为3.74μg,血清的最佳稀释度为1:100,待检血清阳性临界值为0.50。用此方法检测了418份血清样品,并与荧光抗体病毒中和试验(FAVN)方法进行了比较,符合率为98.61%。 展开更多

关键词 狂犬病病毒 糖蛋白 膜外区表达 中和抗体 ELISA

在线阅读 下载PDF 职称材料

口蹄疫病毒非结构蛋白基因的克隆表达及免疫活性的研究 被引量：2

7

作者 蒲静 张鹤晓 +9 位作者 杨汉春 高志强 柏亚铎 刘继红 汪琳 吴丹 乔彩霞 张伟 段向英 谷强 《动物医学进展》 CSCD 2007年第12期6-12,共7页

从口蹄疫病毒(FMDV)细胞培养物中提取总RNA,设计简并引物通过RT-PCR获得了完整的3ABC基因片段,将3AB基因和部分3ABC基因分别克隆到原核表达载体上构建重组表达质粒pET-3AB和pET-3ABC,然后转化BL21(DE3)plysS进行诱导表达,将表达产物进行... 从口蹄疫病毒(FMDV)细胞培养物中提取总RNA,设计简并引物通过RT-PCR获得了完整的3ABC基因片段,将3AB基因和部分3ABC基因分别克隆到原核表达载体上构建重组表达质粒pET-3AB和pET-3ABC,然后转化BL21(DE3)plysS进行诱导表达,将表达产物进行SDS-PAGE分析和Western blot鉴定。结果表明,3AB基因和3ABC基因可以在大肠埃希菌中高效表达,且表达产物能够与FMDV阳性血清产生免疫反应。进一步摸索重组蛋白的纯化条件,制备纯化蛋白,以纯化的表达产物为包被抗原进行间接ELISA检测,结果表明,重组蛋白具有特异的免疫学活性,能够用于鉴别FMDV感染动物血清和免疫动物血清。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 非结构蛋白 3AB基因 3ABC基因 原核表达 间接ELISA

在线阅读 下载PDF 职称材料

禽流感病毒重组核蛋白抗原的纯化及在琼脂免疫扩散试验中的应用 被引量：3

8

作者 乔彩霞 张鹤晓 +5 位作者 高志强 谷强 吴丹 蒲静 郭晋优 刘继红 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2006年第7期32-35,共4页

采用RT-PCR扩增我国H5N1禽流感病毒NP基因,亚克隆于含有组氨酸标签的原核表达载体中,在大肠杆菌中高效表达。所表达的蛋白经Ni+亲和色谱法纯化,SDS-PAGE电泳分析其纯度达95%以上,Western-Blotting鉴定具有良好的免疫反应活性。利用纯化... 采用RT-PCR扩增我国H5N1禽流感病毒NP基因,亚克隆于含有组氨酸标签的原核表达载体中,在大肠杆菌中高效表达。所表达的蛋白经Ni+亲和色谱法纯化,SDS-PAGE电泳分析其纯度达95%以上,Western-Blotting鉴定具有良好的免疫反应活性。利用纯化蛋白作为诊断用抗原,建立了禽流感的琼脂扩散诊断方法。所建立的诊断方法在对禽流感强阳性和弱阳性血清的检测中,均出现了致密而清晰的沉淀线,且沉淀线的亮度与所加入的重组抗原的量成正比;而对鸡新城疫、鸡传染性法式囊等8种禽疫病阳性血清和SPF鸡血清的检测中,无沉淀线出现且没有交叉反应;利用该方法对30份进出口送检样品进行检测,其结果与国内同类试剂盒相符性达100%。实验室和现地使用证明,利用纯化的重组NP抗原所建立的方法简便、可靠、易于标准化,可为我国禽流感的兽医诊断、流行病学普查和出入境检验检疫提供有力的保障。 展开更多

关键词 AIV 核蛋白 琼脂免疫扩散试验

在线阅读 下载PDF 职称材料

牛肠道病毒2型单克隆抗体的制备及其应用研究 被引量：2

9

作者 郭金玉 张鹤晓 +3 位作者 吴丹 高志强 张冉 张乐萃 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期2025-2031,共7页

旨在制备牛肠道病毒2型(BEV-2)单克隆抗体,建立检测BEV-2抗原的ELISA方法。将纯化的BEV-2VP1+重组蛋白质接种BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与骨髓瘤细胞SP2/0用PEG4000进行融合,对杂交瘤培养上清进行筛选,获得2株稳定分泌抗BEV-2VP1+蛋白... 旨在制备牛肠道病毒2型(BEV-2)单克隆抗体,建立检测BEV-2抗原的ELISA方法。将纯化的BEV-2VP1+重组蛋白质接种BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与骨髓瘤细胞SP2/0用PEG4000进行融合,对杂交瘤培养上清进行筛选,获得2株稳定分泌抗BEV-2VP1+蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株(1G1、5G6)。用制备的单克隆抗体包被酶标板,通过一系列的优化,建立了BEV-2双抗夹心ELISA检测方法。建立的ELISA方法检测BEV-2病毒量的最低限为100TCID50·0.1mL-1,与BVDV、IBRV、BLV等病毒无交叉反应。本研究首次制备了牛肠道病毒2型单克隆抗体,建立了检测BEV-2抗原的双抗体夹心ELISA方法,该方法特异性强、敏感性高、重复性好,为进一步研究和开发快速诊断牛肠道病毒试剂盒奠定了基础。 展开更多

关键词 牛肠道病毒2型 单克隆抗体 夹心ELISA

在线阅读 下载PDF 职称材料

猪传染性胃肠炎病毒与猪呼吸道冠状病毒荧光RT-PCR鉴别检测方法建立与应用 被引量：4

10

作者 王慧珊 高志强 +5 位作者 王金宝 张鹤晓 乔彩霞 吴亚琼 邢佑尚 朱淑芬 《中国动物检疫》 CAS 2011年第10期31-34,共4页

本研究根据Genbank登录的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N基因和S基因保守区序列设计合成了两对引物和探针,通过对荧光定量RT-PCR反应条件的优化,建立了TaqMan荧光定量RT-PCR快速检测TGEV的方法。该方法能有效地鉴别序列密切相关的猪传染性... 本研究根据Genbank登录的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N基因和S基因保守区序列设计合成了两对引物和探针,通过对荧光定量RT-PCR反应条件的优化,建立了TaqMan荧光定量RT-PCR快速检测TGEV的方法。该方法能有效地鉴别序列密切相关的猪传染性胃肠炎病毒与呼吸道冠状病毒。与常规RT-PCR试验比较表明,所建立的荧光RT-PCR检测技术快速、敏感,检测时限3个小时以内,具有很好的特异性和重复性。通过对39份临床样品进行检测,结果表明所建立的检测方法直接检测样品中猪传染性胃肠炎病毒。 展开更多

关键词 猪传染性胃肠炎病毒 猪呼吸道冠状病毒 荧光RT-PCR

在线阅读 下载PDF 职称材料

口蹄疫病毒亚洲1型TaqMan实时定量RT-PCR快速定型检测方法研究 被引量：2

11

作者 高志强 张鹤晓 +5 位作者 赖平安 谷强 张利峰 乔彩霞 蒲静 张向东 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2008年第7期22-24,33,共4页

采用TaqMan方法,根据口蹄疫病毒亚洲1型VP1的基因编码区基因(1D)序列,设计合成多对引物和多条探针,通过对引物、探针的筛选,反应条件的选择和优化,建立了口蹄疫病毒亚洲1型荧光RT-PCR检测技术,试验体系采用一对引物和两条探针配对,有效... 采用TaqMan方法,根据口蹄疫病毒亚洲1型VP1的基因编码区基因(1D)序列,设计合成多对引物和多条探针,通过对引物、探针的筛选,反应条件的选择和优化,建立了口蹄疫病毒亚洲1型荧光RT-PCR检测技术,试验体系采用一对引物和两条探针配对,有效降低了由于变异导致的漏检率。经一系列的试验表明建立的荧光PCR检测技术快速、敏感、特异,检测时限3个小时以内,与口蹄疫病毒A型、O型和其它病毒不发生交叉反应,适用于样品中口蹄疫病毒亚洲1型的直接检测。口蹄疫病毒亚洲1型荧光PCR快速检测技术的建立,为我国养殖场口蹄疫亚洲1型疫情的快速诊断进而采取相应防制措施、减少疫情散播,以及动物产品中口蹄疫病毒亚洲1型的快速检测提供了一种可靠方法。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 亚洲1型 TAQMAN 实时定量RT—PCR

在线阅读 下载PDF 职称材料

非洲马瘟病毒VP7和NS2双重荧光RT-PCR检测技术的建立与应用 被引量：3

12

作者 高志强 张鹤晓 +6 位作者 乔彩霞 蒲静 张伟 谷强 刘环 张利峰 马贵平 《中国动物检疫》 CAS 2013年第4期34-38,共5页

利用DNAMAN软件对非洲马瘟病毒不同基因型代表株的序列进行分析,选择其高度保守的VP7和NS2基因设计合成引物和探针。人工分别合成包含有扩增区域的VP7和NS2核苷酸片段进行双向(T7和SP6)体外转录制备双链RNA(dsRNA)。使用制备的dsRNA在... 利用DNAMAN软件对非洲马瘟病毒不同基因型代表株的序列进行分析,选择其高度保守的VP7和NS2基因设计合成引物和探针。人工分别合成包含有扩增区域的VP7和NS2核苷酸片段进行双向(T7和SP6)体外转录制备双链RNA(dsRNA)。使用制备的dsRNA在对荧光定量RT-PCR的反应条件优化的基础上,建立了适用于非洲马瘟病毒检测的双重通用荧光定量RT-PCR检测技术。应用建立的方法对非洲马瘟病毒核酸,马流感病毒核酸,马流产沙门氏菌核酸,马链球菌兽疫亚种核酸,东、西部马脑脊髓炎病毒核酸进行检测,结果显示该检测技术可以有效检测非洲马瘟病毒核酸,而对其它病原核酸检测结果为阴性,证实本技术的特异性强、可靠性好。对已知拷贝数的dsRNA检测结果表明,所建立的TaqMan荧光定量RT-PCR灵敏度可达1.0×102拷贝/反应,相比于基于凝胶电泳常规RT-PCR方法,其灵敏度高10倍;而且双基因的检测设计思路更能保证病毒核酸的有效检测,防止漏检。在对248份临床样品的检测中,进一步证实了该方法快速、灵敏且重复性好,可满足非洲马瘟病毒快速诊断的需要。 展开更多

关键词 非洲马瘟病毒 VP7和NS2 双重通用荧光RT-PCR

在线阅读 下载PDF 职称材料

西部马脑脊髓炎病毒实时荧光RT-PCR检测方法建立及标准质控品制备 被引量：2

13

作者 谷强 吴亚琼 +6 位作者 高志强 刘环 张伟 蒲静 乔彩霞 张鹤晓 吴清民 《中国动物检疫》 CAS 2013年第11期80-84,共5页

选取西部马脑炎病毒代表株进行序列比对分析，选择保守区域，设计合成引物和TaqMan探针。经对反应体系和条件进行优化，建立了检测西部马脑炎病毒的实时荧光RT-PCR检测方法，应用建立的方法对西部马脑炎病毒核酸、东部马脑炎病毒核酸、... 选取西部马脑炎病毒代表株进行序列比对分析，选择保守区域，设计合成引物和TaqMan探针。经对反应体系和条件进行优化，建立了检测西部马脑炎病毒的实时荧光RT-PCR检测方法，应用建立的方法对西部马脑炎病毒核酸、东部马脑炎病毒核酸、马动脉炎病毒核酸、马疱疹病毒1型核酸、马流感病毒H3N8亚型核酸进行检测，结果表明建立的方法只能检出西部马脑炎病毒核酸，与另外4种病毒核酸无交叉反应。进一步通过体外转录制备了西部马脑炎病毒McMillan株7442-10011的cRNA片段，经拷贝数计算、稀释、分装、均匀性和稳定性检验后，作为质控品对建立的方法进行评价。结果显示，所建立的方法其分析灵敏度可达10拷贝。对197份进口马血样品检测用时仅4小时，表明该检测技术快速、灵敏、特异。因此，本研究建立的方法可作为技术储备用于进口马匹的疫病筛查。 展开更多

关键词 西部马脑炎病毒 实时荧光RT-PCR 标准质控品

在线阅读 下载PDF 职称材料

国际间实验室禽流感能力验证样品制备技术的研究与应用 被引量：1

14

作者 张利峰 刘来福 +4 位作者 高志强 许建明 张鹤晓 赖平安 夏春 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2008年第10期24-28,共5页

通过对禽流感病毒基因序列的比较分析,在其血凝素(HA)基因保守区,设计引物,通过基因克隆,体外转录等技术,制备出病毒HA基因的RNA片段,并对体外转录的RNA进行了定量、稀释,以作为用于国际间实验室禽流感能力验证的样品,并建立了绝对定量... 通过对禽流感病毒基因序列的比较分析,在其血凝素(HA)基因保守区,设计引物,通过基因克隆,体外转录等技术,制备出病毒HA基因的RNA片段,并对体外转录的RNA进行了定量、稀释,以作为用于国际间实验室禽流感能力验证的样品,并建立了绝对定量实时荧光RT-PCR检测方法。样品的均匀性和稳定性实验结果证明了样品制备技术的可行性,并为我国首次成功组织实施国际间实验室禽流感能力验证计划奠定了基础。 展开更多

关键词 禽流感 国际实验室 能力验证 样品制备技术

在线阅读 下载PDF 职称材料

猪链球菌2型荧光PCR检测方法与常规检测方法的比较 被引量：3

15

作者 宋立 高志强 +5 位作者 杨承槐 宁宜宝 张鹤晓 吴丹 张利峰 刘洋 《中国兽药杂志》 2011年第6期8-10,19,共4页

为验证猪链球菌2型荧光PCR检测方法对临床样品检测的敏感性和适用性以及该方法所拥有的独特优点,分别用荧光PCR法、常规PCR法和细菌分离法对人工感染猪链球菌2型的小鼠肝脏和发病猪的心、肝、脾、肾等实质器官和血液、喉拭子进行抗原检... 为验证猪链球菌2型荧光PCR检测方法对临床样品检测的敏感性和适用性以及该方法所拥有的独特优点,分别用荧光PCR法、常规PCR法和细菌分离法对人工感染猪链球菌2型的小鼠肝脏和发病猪的心、肝、脾、肾等实质器官和血液、喉拭子进行抗原检测。结果显示,荧光PCR法检出率为70.8%,明显高于普通PCR法(检出率为20.8%),也高于常规细菌分离法(检出率为45.8%)。由于临床样品常常会被其他细菌污染,细菌分离法很难准确分离到链球菌。但荧光PCR法不受其他细菌污染的影响,对实验室培养的猪链球菌2型菌液,该方法检测滴度可达10-6/0.1mL(42～52 CFU/0.1 mL),而普通PCR方法检测滴度仅为10-4。 展开更多

关键词 猪链球菌2型 荧光PCR检测 检测方法比较

在线阅读 下载PDF 职称材料

直接涂片镜检法和沉淀法检验出口猕猴溶组织阿米巴的比较 被引量：1

16

作者 于文军 李楠 +2 位作者 张鹤晓 熊盛荣 李凤良 《中国动物检疫》 CAS 1995年第5期11-12,共2页

在对出口到法国的62只猕猴进行的溶组织阿米巴的检验中，对直接涂片镜检法和沉淀法进行了比较。直接法检溶组织阿米巴包囊的检出率为6．45％，沉淀法的检出率为30．65％，t检验结果表明，沉淀法与直接法的检出率差异极显著（P＜0．001... 在对出口到法国的62只猕猴进行的溶组织阿米巴的检验中，对直接涂片镜检法和沉淀法进行了比较。直接法检溶组织阿米巴包囊的检出率为6．45％，沉淀法的检出率为30．65％，t检验结果表明，沉淀法与直接法的检出率差异极显著（P＜0．001），沉淀法的检出率显著高于直接法。 展开更多

关键词 猕猴 溶组织阿米巴 镜检法 沉淀法 检疫

在线阅读 下载PDF 职称材料

禽流感病毒LAMP快速诊断方法的建立 被引量：5

17

作者 王辰雨 胡敬东 +2 位作者 史玉颖 宋敏训 张鹤晓 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第3期576-580,共5页

参考禽流感病毒(AIV)基质蛋白(M)基因设计了两对引物,特异性识别其6个不同位点,建立了基于颜色判定的环介导等温扩增反应(LAMP)方法。试验对不同禽源病毒进行了测试,结果发现该方法仅特异性地检出禽流感病毒(H9和H5亚型)核酸,对AIV病毒... 参考禽流感病毒(AIV)基质蛋白(M)基因设计了两对引物,特异性识别其6个不同位点,建立了基于颜色判定的环介导等温扩增反应(LAMP)方法。试验对不同禽源病毒进行了测试,结果发现该方法仅特异性地检出禽流感病毒(H9和H5亚型)核酸,对AIV病毒的检测极限为10 EID50。人工感染病料检测结果与鸡胚病毒分离法的符合率为96.7%。数据表明,建立的LAMP方法特异、敏感、简便,在禽流感的诊断中具有很大的临床应用潜力。 展开更多

关键词 禽流感病毒 基质蛋白基因 环介导等温扩增反应

在线阅读 下载PDF 职称材料