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毕赤酵母表达的HIV-2外膜糖蛋白的纯化与活性测定 被引量:2
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作者 张应玖 金宁一 +1 位作者 王宏伟 沈家骢 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2001年第7期1256-1258,共3页
Expression conditions of human immunodeficiency virus type 2 external glycoprotein gp105 in the recombinant Pichia Pastoris strain were optimized via orthogonal test of some factors such as the rate of aeration, the i... Expression conditions of human immunodeficiency virus type 2 external glycoprotein gp105 in the recombinant Pichia Pastoris strain were optimized via orthogonal test of some factors such as the rate of aeration, the inductive duration, the initial pH and the concentration of methanol. The results from tests of between subjects effects showed that the most important parameter for efficient expression of gp105 in recombinant Pichia Pastoris strain is adequate aeration during methanol induction, and the optimum inductive condition for gp105 expression was: more than 80% aeration, 3 days for induction, th einitial pH of 6 0-7 0, the final methanol concentration of 1 0%-1 5%. With this condition, the expressed gp105 was secreted into fermentation broth and reached a ield of 30%, approximately 200 mg/L. Expressed gp105 was isolated and purified by sating out and Sephadex G 100 chromatography and the yield of gp105 was 40%. gp105 was purified to electrophoretic purity and its pI was about 5 0 by SDS PAGE and isoelectrofocusing. Its N terminal amino acid was arginine by Dansyl Cl and the result indicated that expressed gp105 was secreted and cleavaged correctly. The results from ELISA demonstrated that the purifiec gp105 showed good reactiongenicity and antigenic specificity. 展开更多
关键词 人免疫缺陷病毒 外膜蛋白 纯化 艾滋病 病原性 活性测定 毕赤酵母 基因表达 疫苗 致病机理
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生物膜电极反应器降解对氨基二甲基苯胺的研究 被引量:15
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作者 康博 黄卫民 +2 位作者 张应玖 张雪娜 林海波 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2007年第3期556-558,共3页
4-Amino-dimethyl-aniline hydrochloride is one of the main components of the wastewater from vanillin production plant. So it is used for the target contamination to be degraded by microorganism, electrochemical oxidat... 4-Amino-dimethyl-aniline hydrochloride is one of the main components of the wastewater from vanillin production plant. So it is used for the target contamination to be degraded by microorganism, electrochemical oxidation and bio-electro reactor in this paper. We found out a economical, efficient and non-polluted methods for the treatment of wastewater from vanillin production plant. The results indicate that there are a lot of special microbes and bacteria eating 4-amino-dimethyl-aniline hydrochloride in the activated sludge after 20 days′ incubation, at the same time, a stable bio-filmed electrode was formed. Under the condition of 25 ℃, pH=6—7. The use of bio-electro reactor not only increased the biodegradability and decreased the electrical energy consumption, but also solved the problem which the second pollution of organic compounds containing chlorine in the process of indirect electrochemical degradation on the organic pollutants. 展开更多
关键词 香兰素 生物膜电极反应器 降解 对氨基二甲基苯胺
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16种天然药物提取物抵抗Aβ42寡聚体致PC-12细胞毒性的评价研究 被引量:5
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作者 崔理立 刘根 +1 位作者 蔡玉洁 张应玖 《山东医药》 CAS 2014年第9期4-6,30,共4页
目的评价16种与阿尔茨海默病相关的天然药物提取物对β淀粉样蛋白(Aβ42)寡聚体致PC-12细胞毒性的作用。方法通过超声波破碎法获得16种天然药物的提取物,并筛选具有抑制Aβ42寡聚体诱导的神经毒性作用的药物。将PC-12细胞随机分为实验... 目的评价16种与阿尔茨海默病相关的天然药物提取物对β淀粉样蛋白(Aβ42)寡聚体致PC-12细胞毒性的作用。方法通过超声波破碎法获得16种天然药物的提取物,并筛选具有抑制Aβ42寡聚体诱导的神经毒性作用的药物。将PC-12细胞随机分为实验组、细胞损伤对照组、天然药物对照组、正常细胞对照组。通过细胞培养液中加入Aβ42寡聚体诱导建立PC-12细胞损伤模型。采用MTT比色法测定各组细胞存活率。结果苦参、石菖蒲、何首乌、远志、当归、女贞子、黄芪、益智仁、绞股蓝和淫羊藿10种天然药物提取物具有抑制Aβ42寡聚体诱导神经毒性的作用,其中苦参碱的提取物抑制作用最强。细胞损伤对照组PC-12细胞的存活率显著高于实验组、天然药物对照组及正常细胞对照组(P均<0.05)。结论最终确定10种天然药物(苦参、石菖蒲、何首乌、远志、当归、女贞子、黄芪、益智仁、绞股蓝和淫羊藿)提取物具有抑制Aβ42寡聚体诱导的神经毒性作用,苦参碱的提取物抑制作用最强。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 天然药物 淀粉样Β蛋白
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SARS病毒核衣壳蛋白的表达与鉴定 被引量:3
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作者 赵博 金宁一 +2 位作者 王瑞琳 郑敏 张应玖 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2005年第11期2061-2065,共5页
依据Genebank中SARS基因组序列和酵母菌对密码子的选择性,采用人工合成的方法,合成了优化的SARS病毒核衣壳蛋白(N)的全基因(1 296 bp),与CTL表位基因(195 bp)重组后,将其克隆到酵母分泌型表达载体pPIC9K中,构建成重组表达载体pPIC9K-N.... 依据Genebank中SARS基因组序列和酵母菌对密码子的选择性,采用人工合成的方法,合成了优化的SARS病毒核衣壳蛋白(N)的全基因(1 296 bp),与CTL表位基因(195 bp)重组后,将其克隆到酵母分泌型表达载体pPIC9K中,构建成重组表达载体pPIC9K-N.重组载体转化毕赤酵母GS115,并经MD平板和MM平板筛选及PCR鉴定,得到阳性重组酵母工程菌GS115-pPIC9K-N.用甲醇诱导其分泌表达目的蛋白并对表达产物进行分析、浓缩与鉴定.结果表明,SARS病毒核衣壳蛋白能实现在毕赤酵母中高效表达,表达量达到20%,初步纯化后的产物具有良好的抗原特异性. 展开更多
关键词 严重急性呼吸系统综合症(SARS) 核衣壳蛋白 毕赤酵母
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枯草杆菌漆酶重要功能位点的保守性与可变性分析 被引量:2
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作者 焦晶 杨雪 +4 位作者 金兰娜 高键 周洋 肖亚中 张应玖 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2016年第7期1320-1327,共8页
在对比分析天然枯草杆菌漆酶(CAR)的一级结构与三维空间结构的基础上,锁定了CAR的底物结合通道和铜离子结合位点,设计并构建了CAR的4种突变体.对比分析了野生型酶与4种突变体酶的性质及催化功能,结果表明,该漆酶分子中位于第二保守区的H... 在对比分析天然枯草杆菌漆酶(CAR)的一级结构与三维空间结构的基础上,锁定了CAR的底物结合通道和铜离子结合位点,设计并构建了CAR的4种突变体.对比分析了野生型酶与4种突变体酶的性质及催化功能,结果表明,该漆酶分子中位于第二保守区的H155位点是漆酶催化所必需的,H155即使被其同义氨基酸(如Arg)替换,也会因氧化还原电势的降低而降低漆酶的催化活力,同时还会导致漆酶的热稳定性和酸碱稳定性降低,以及最适p H值酸移;位于非保守区的A158位点与I224位点的保守性对漆酶的催化是有利的,而S210G突变增强了漆酶的稳定性与催化功能,这可能与S210G突变增强了漆酶的底物通道上一段富含Pro片段的柔性有关.此外,A158/R155H突变(CAHE)可能导致漆酶不耐冷,在低温(<50℃)时引起酶活明显降低.所研究的漆酶在2,2'-连氮-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)(ABTS)介体存在下,对靛蓝类染料(如靛蓝胭脂红)和三苯甲烷类染料(如结晶紫)的脱色率均高于对偶氮类染料(如甲基红和刚果红)和蒽醌类染料(如活性亮蓝),说明该漆酶对染料有一定的选择性. 展开更多
关键词 漆酶 结构 催化 枯草芽孢杆菌
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HIV-1核酸疫苗与重组病毒免疫程序的研究
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作者 郭焱 郭巍 张应玖 《长春中医学院学报》 2002年第1期46-46,共1页
关键词 核酸疫苗 重组病毒 免疫程序
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信号肽对OPMA在枯草杆菌中的分泌表达及其催化活性的影响 被引量:3
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作者 李雁飞 张金祥 +3 位作者 谷艳芹 郝倩 曹昊 张应玖 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2013年第10期2334-2339,共6页
将编码枯草杆菌BS168的amyE信号肽(S)的基因与编码多功能淀粉酶OPMA-N和OPMA-G的基因重组,分别构建了分泌表达多功能淀粉酶OPMA-N和OPMA-G的重组载体pMA5-OPMA-SN和pMA5-OPMASG,并分别在枯草杆菌BS168中实现了OPMA-SN和OPMA-SG的有效分... 将编码枯草杆菌BS168的amyE信号肽(S)的基因与编码多功能淀粉酶OPMA-N和OPMA-G的基因重组,分别构建了分泌表达多功能淀粉酶OPMA-N和OPMA-G的重组载体pMA5-OPMA-SN和pMA5-OPMASG,并分别在枯草杆菌BS168中实现了OPMA-SN和OPMA-SG的有效分泌表达.SDS-PAGE分析表明,该信号肽的引入提高了异源蛋白的分泌量,OPMA-SN和OPMA-SG的分泌水平(53%和67%)比OPMA-N和OPMA-G(45%和58%)明显提高,但此信号肽在分泌表达OPMA-N或OPMA-G后不能被有效切除.活力分析表明,OPMA-SN(5.17 U/mg)和OPMA-N(4.57 U/mg)的活力水平与分泌水平一致,但OPMA-SG(4.50U/mg)和OPMA-G(4.65 U/mg)的活力水平却与分泌水平呈反相关性.通过分析OPMA-SN和OPMA-SG分子的空间构象发现,信号肽的存在不影响OPMA-N的活性部位构象,但影响OPMA-G的活性部位构象,从而导致OPOMA-G的催化活性下降. 展开更多
关键词 多功能淀粉酶 表达 信号肽 结构 功能
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多功能淀粉酶固定化中的底物保护效应 被引量:1
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作者 夏莹 曹昊 张应玖 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2015年第2期330-335,共6页
以壳聚糖为载体,通过正交实验确定了用壳聚糖凝胶微球固定多功能淀粉酶OPMA-N的最适条件:以20 mg/mL戊二醛交联,在25℃及pH=6.5条件下固定1.5 h,但需在引入底物淀粉介导的保护效应后,才能获得良好稳定性的固定化OPMA-N( IOPMA-N),显... 以壳聚糖为载体,通过正交实验确定了用壳聚糖凝胶微球固定多功能淀粉酶OPMA-N的最适条件:以20 mg/mL戊二醛交联,在25℃及pH=6.5条件下固定1.5 h,但需在引入底物淀粉介导的保护效应后,才能获得良好稳定性的固定化OPMA-N( IOPMA-N),显示了底物保护效应在催化部位占分子中较大区域的酶(如OPMA-N)固定化过程中的重要性.对比分析游离酶与固定化酶的性质与功能发现,在50℃及pH=6.0-7.0条件下, IOPMA-N的表观比活力比游离酶OPMA-N提高3倍以上,催化效率( kcat/Km )提高4倍以上,对弱酸性至中性及常温(30~50℃)环境的耐受性明显高于OPMA-N,并具有良好的操作稳定性和储存稳定性,重复使用15次后,酶活力仍然能够保持75%,在4℃下储存半衰期达31 d,而OPMA-N在4℃下储存5 d后活力基本丧失.催化产物的对比分析结果表明, OPMA-N固定化后,水解活性明显提高,但同时转苷活性有所下降,这与已报道的OPMA-N分子中2种催化活力存在平衡机制的结论一致,同时也表明在OPMA-N的固定化中底物淀粉对其水解活性有明显的保护作用,但对其转苷活性几乎无贡献. 展开更多
关键词 多功能淀粉酶 壳聚糖 固定化 底物 凝胶微球
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