芦台春酱香型白酒酿造过程中真菌菌群多样性及代谢分析 被引量：3

1

作者 王佳丽 胥强 +3 位作者 路程顺 赵淑先 张同存 罗学刚 《中国酿造》 CAS 北大核心 2024年第4期45-52,共8页

该研究采用高通量测序技术对天津芦台春酱香型白酒发酵过程中不同轮次出窖酒醅的真菌群落结构进行研究,并对其与理化因子、挥发性风味成分相关性分别进行典范对应分析(CCA)及偏最小二乘判别分析(PLS-DA)。结果表明,随着轮次的增加,真菌... 该研究采用高通量测序技术对天津芦台春酱香型白酒发酵过程中不同轮次出窖酒醅的真菌群落结构进行研究,并对其与理化因子、挥发性风味成分相关性分别进行典范对应分析(CCA)及偏最小二乘判别分析(PLS-DA)。结果表明,随着轮次的增加,真菌菌群的多样性升高,而丰度先升高后降低;酵母菌是白酒发酵过程中的主要真菌,但相对丰度逐步降低,在属水平上以伊萨酵母属(Issatchenkia)为主,其相对丰度由第一轮次的97.48%逐渐下降至第七轮次的3.53%。相关性分析结果表明,总酸、还原糖和酒精度是窖池发酵微生物演替的重要理化因子;伊萨酵母属(Issatchenkia)与乙酸乙酯、乙酸异戊酯、异戊醇等相关性较大;哈萨克斯坦酵母属(Kazachstania)、丝衣霉属(Byssochlamys)、罗萨氏菌属(Rasamsonia)、复膜孢酵母属(Saccharomycopsis)等与正己酸乙酯、庚酸乙酯、3-羟基丁酸乙酯、丁二酸二乙酯、苯乙酸乙酯、油酸乙酯、乙醇等相关性较大;而Leiothecium、未分类的酵母目(unclassified_o__Saccharomycetales)、Apiotrichum、Cutaneotrichosporon等则对壬酸乙酯、乙酸苯乙酯、正己醇、2,3-丁二醇、糠醇、糠醛等的形成起到重要作用。 展开更多

关键词 酱香型白酒 酒醅 真菌 菌群多样性 理化因子 挥发性风味物质 相关性分析

在线阅读 下载PDF 职称材料

293T细胞生产慢病毒工艺优化 被引量：1

2

作者 李欣 高驰 +4 位作者 顾力行 曾毅 姚頔 何红鹏 张同存 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期554-564,共11页

随着细胞治疗的快速发展,大规模慢病毒的生产成为工艺环节中的瓶颈,因此,优化293T高滴度和高纯度的CAR慢病毒载体生产工艺显得至关重要。本研究旨在优化包装慢病毒的293T贴壁细胞,节省时间,节约成本,提高慢病毒包装的能力。同时对优化... 随着细胞治疗的快速发展,大规模慢病毒的生产成为工艺环节中的瓶颈,因此,优化293T高滴度和高纯度的CAR慢病毒载体生产工艺显得至关重要。本研究旨在优化包装慢病毒的293T贴壁细胞,节省时间,节约成本,提高慢病毒包装的能力。同时对优化慢病毒载体中出现悬浮细胞结团生长的现象进行探索,检测其影响结团的因素。分别采用快速、慢速驯化方式将293T贴壁细胞驯化为悬浮培养,并比较其细胞形态、细胞密度、细胞活率、慢病毒包装能力和冻存复苏后稳定一致性,筛选出最优的悬浮驯化条件。通过调节Ca^(2+)浓度和EDTA添加量来研究比较细胞结团生长状况。结果证明,使用无血清培养基OPM-293 CD05溶剂(medium)可以将293T贴壁细胞快速驯化为293T悬浮细胞,并能制备出慢病毒滴度且优于贴壁细胞的包装滴度(^(*)P<0.05)。Ca^(2+)浓度会影响细胞结团大小,添加EDTA能有效分离分散非必要的细胞抱团生长。研究结果显示,传统293T贴壁细胞可以使用无血清培养基OPM-293 CD05溶剂快速驯化成悬浮细胞;在一定范围内,Ca^(2+)浓度越高细胞所结团块及粒径越大,EDTA添加量越高细胞所结团块及粒径变小。这为优化慢病毒载体包装工艺和悬浮培养条件,同时为体外规模化细胞培养放大和生产奠定了理论基础,具有一定的实用价值。 展开更多

关键词 慢病毒载体 293T细胞 悬浮驯化 悬浮细胞培养 结团

在线阅读 下载PDF 职称材料

靶向CD99的CAR-T细胞扩增优化研究

3

作者 王伊玄 于淼 +6 位作者 赵家旋 赵芬芳 曾毅 王友湧 祝海川 张同存 史江舟 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期639-649,共11页

背景与目的:嵌合抗原受体T(chimeric antigen receptor T,CAR-T)细胞疗法对血液和淋巴系统肿瘤的治疗效果显著,但对实体瘤效果较差,这与靶点选择的因素有关。针对尤因肉瘤(Ewing sarcoma,ES),CD99可作为CAR-T细胞潜在的靶点。由于T细胞... 背景与目的:嵌合抗原受体T(chimeric antigen receptor T,CAR-T)细胞疗法对血液和淋巴系统肿瘤的治疗效果显著,但对实体瘤效果较差,这与靶点选择的因素有关。针对尤因肉瘤(Ewing sarcoma,ES),CD99可作为CAR-T细胞潜在的靶点。由于T细胞自身表达CD99蛋白,靶向CD99的CAR-T细胞存在体外扩增能力有限的问题。本研究旨在通过增加CD99敲低的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)、优化慢病毒转导的感染复数(multiplicity of infection,MOI)、筛选培养CAR-T细胞的培养基及培养容器,以获得CD99 CAR-T细胞制备的最优条件。方法:筛选shRNA序列,提高CD99 CAR-T细胞的扩增能力。采用不同的MOI、培养基和培养容器,分别检测在不同条件下CAR-T细胞的转导效率、细胞存活率、增殖能力、特异性杀伤能力及干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)释放水平等,筛选出最优的细胞制备条件。结果:通过shRNA敲低得到的KO-CD99 CAR-T细胞扩增水平显著高于CD99 CAR-T细胞[(16.40±0.40)vs(6.33±1.53),P<0.01]。转导MOI为0.25~1.0、培养基为OptiVitro时细胞的扩增效果最优。在透气瓶中培养的CAR-T细胞扩增倍数显著高于在培养袋中培养的细胞[MOI=0.25:(50.23±3.32)vs(13.02±4.82);MOI=0.50:(49.96±0.83)vs(18.25±2.88);MOI=1.00:(48.27±5.08)vs(13.16±6.26);P<0.01],且细胞分型更优、特异性杀伤更高。结论:通过shRNA技术得到的KO-CD99 CAR-T细胞可实现稳定扩增。从扩增条件优化结果看,MOI为0.25~1.00,培养基为OptiVitro,培养容器为透气瓶的条件下,KO-CD99 CAR-T细胞可获得更优的扩增能力、更多比例的记忆T细胞,为后续开展CD99 CAR-T细胞治疗ES的临床试验奠定了坚实基础。 展开更多

关键词 CD99 嵌合抗原受体T细胞 扩增优化 KO-CD99

在线阅读 下载PDF 职称材料

17种中草药体外抗炎作用研究

4

作者 田薇 王亚冬 +1 位作者 张同存 李秀梅 《中国饲料》 北大核心 2024年第17期98-103,128,共7页

采用超声提取法利用水和乙醇分别获得17种中草药的水和醇提物,将其作用于脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞模型,通过检测提取物对细胞存活率和炎症介质一氧化氮(NO)、白介素-6(IL-6)、白介素-1β(1L-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响... 采用超声提取法利用水和乙醇分别获得17种中草药的水和醇提物,将其作用于脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞模型,通过检测提取物对细胞存活率和炎症介质一氧化氮(NO)、白介素-6(IL-6)、白介素-1β(1L-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,综合评价其抗炎效果,并研究其作用机制。结果表明:黄花蒿、冷蒿、白头翁、龙蒿、白鲜果皮、多叶棘豆、斜茎黄耆种皮、灵芝菌棒、苍术根须、山韭醇提物和黄花蒿、冷蒿、广布野豌豆、东北珍珠梅、苍耳、茜草水提物无细胞毒性;通过评估无细胞毒性醇和水提物抗炎活性,最终证明冷蒿水提物具有更好的抗炎作用,可显著降低IKKβ、p65和IKKα表达量,揭示了其可通过调控NF-κB通路发挥抗炎作用。本试验结果为冷蒿防治畜禽细菌性肠炎的研发及应用提供理论依据。 展开更多

关键词 中草药 水提物 醇提物 抗炎 炎症因子

在线阅读 下载PDF 职称材料

长链非编码RNA MALAT1的研究进展 被引量：25

5

作者 宋铁峰 袁颖 +3 位作者 王会琴 庄春雨 王楠 张同存 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期20-28,共9页

长链非编码RNA(Long noncoding RNAs,lnc RNAs)是一类转录本长度超过200 nt的RNA分子,它们并不编码蛋白质,而是以RNA的形式在转录水平、转录后水平、表观遗传学修饰等多种层面上调控基因的表达。肺癌转移相关转录本1(Metastasis-associa... 长链非编码RNA(Long noncoding RNAs,lnc RNAs)是一类转录本长度超过200 nt的RNA分子,它们并不编码蛋白质,而是以RNA的形式在转录水平、转录后水平、表观遗传学修饰等多种层面上调控基因的表达。肺癌转移相关转录本1(Metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1,MALAT1)首先在非小细胞肺癌被发现,并引起学者关注。MALAT1定位于染色体11q13.1,具有高度保守性。近年来,研究发现,MALAT1能特异性招募SR蛋白家族成员,并参与表观遗传调控以及细胞周期调控等;MALAT1高表达于多种肿瘤中,促进肿瘤细胞的增殖、转移和侵袭。此外,最近发现MALAT1在血管生成过程中发挥重要作用。主要对MALAT1的特性、作用机制,以及在肿瘤和血管系统的作用作一系统综述。 展开更多

关键词 长链非编码RNA MALAT1 作用机制 肿瘤 血管生成

在线阅读 下载PDF 职称材料

双频超声对红薯淀粉结构和性质的影响 被引量：9

6

作者 胡爱军 李倩 +4 位作者 郑捷 杨林 卢静 安莉莉 张同存 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第2期370-375,共6页

研究了单频40 kHz、80 kHz以及双频40 kHz+80 kHz超声处理对红薯淀粉结构和性质的影响。扫描电镜分析表明,超声处理能够使淀粉颗粒表面出现损伤甚至有孔洞出现。红外光谱分析表明,超声作用没有改变淀粉的分子基团,但破坏其结晶结构,使... 研究了单频40 kHz、80 kHz以及双频40 kHz+80 kHz超声处理对红薯淀粉结构和性质的影响。扫描电镜分析表明,超声处理能够使淀粉颗粒表面出现损伤甚至有孔洞出现。红外光谱分析表明,超声作用没有改变淀粉的分子基团,但破坏其结晶结构,使红外结晶指数下降。淀粉-碘复合物吸收光谱分析表明,超声破坏淀粉支链结构和淀粉长链,直链淀粉含量增加。Brabender曲线表明,淀粉经超声处理后黏度降低,双频超声处理后的淀粉峰值黏度比原淀粉降低15.66%。此外,超声处理后淀粉的透明度提高,双频超声处理30 min时,透射比最大,比原淀粉增加5.3%,但是随着超声时间继续增加,透明度呈现减小的趋势。单频40 kHz、80 kHz和双频40 kHz+80 kHz比较,双频超声处理对淀粉的结构和性质影响效果最明显,80 kHz次之,40 kHz影响程度最小。 展开更多

关键词 双频超声 红薯淀粉 结构 性质

在线阅读 下载PDF 职称材料

元宝枫油的超声提取及其萌发前后神经酸含量分析 被引量：13

7

作者 闫莉华 陈冬菊 +4 位作者 李潜 张川 司传领 张同存 罗学刚 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2017年第16期178-181,188,共5页

以元宝枫种仁为研究对象,油脂得率为评价指标,通过超声功率、超声时间、料液比单因素实验,建立元宝枫油超声提取方法。同时优化元宝枫种子萌发温度,利用气相色谱法分析了萌发前后种仁油中神经酸含量的变化,并通过MTT法分析了萌发前后元... 以元宝枫种仁为研究对象,油脂得率为评价指标,通过超声功率、超声时间、料液比单因素实验,建立元宝枫油超声提取方法。同时优化元宝枫种子萌发温度,利用气相色谱法分析了萌发前后种仁油中神经酸含量的变化,并通过MTT法分析了萌发前后元宝枫种仁油对神经细胞的影响。结果表明:通过单因素确定的最佳提取工艺条件为:超声功率200 W、超声温度25℃、料液比1∶12。元宝枫种子人工萌发的最佳温度是4℃,气相色谱分析显示萌发后元宝枫种仁油中神经酸含量显著上升,可达萌发前的1.5倍。结果显示元宝枫种仁油能够促进神经细胞的增殖,且萌发后的种仁油作用更强。 展开更多

关键词 元宝枫 超声辅助提取 神经酸 萌发 增殖

在线阅读 下载PDF 职称材料

MALAT1通过竞争miR-124上调SMYD3并促进乳腺癌细胞增殖与迁移 被引量：8

8

作者 徐曼丽 王畅 +3 位作者 王楠 何红鹏 张同存 罗学刚 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期344-351,共8页

为了探究lncRNA MALAT1是否会通过与组蛋白甲基化酶SMYD3间的相互调控对乳腺癌细胞的增殖和迁移产生影响,采用siRNA敲低MCF-7、MDA-MB-231乳腺癌细胞中的内源性MALAT1后,然后应用划痕和MTT法检测细胞迁移和增殖情况;实时定量PCR(Realtim... 为了探究lncRNA MALAT1是否会通过与组蛋白甲基化酶SMYD3间的相互调控对乳腺癌细胞的增殖和迁移产生影响,采用siRNA敲低MCF-7、MDA-MB-231乳腺癌细胞中的内源性MALAT1后,然后应用划痕和MTT法检测细胞迁移和增殖情况;实时定量PCR(RealtimePCR)、免疫蛋白印迹(Westernblot)等方法检测si-MALAT1对miRNA-124、SMYD3及其下游基因mRNA及蛋白质水平的影响。结果显示:siRNA靶向敲低MALAT1后可降低乳腺癌细胞的迁移和增殖速度,同时抑制SMYD3及其下游靶基因N-cadherin、MYL9、MMP9、CYR61等的转录表达,并上调miR-124。miR-124的过表达可降低SMYD3在乳腺癌细胞中的表达,且MALAT1的敲低可以缓解miR-124抑制剂对SMYD3蛋白质水平表达的促进作用。此外,转染外源质粒使SMYD3过表达可激活MALAT1转录,反之siRNA干扰SMYD3后则会下调MALAT1。研究结果表明:lncRNAMALAT1可以作为miR-124的ceRNA调控SMYD3,同时SMYD3可反馈性激活MALAT1的转录,这一相互调控作用将影响到乳腺癌细胞的增殖与迁移能力。 展开更多

关键词 乳腺癌细胞 lncRNAMALAT1 SMYD3 miR-124

在线阅读 下载PDF 职称材料

黑曲霉糖化酶基因的克隆及其在毕赤酵母X33中的表达 被引量：11

9

作者 曹慕琛 徐健勇 +3 位作者 罗立超 张同存 孙劭靖 宋诙 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第14期8226-8230,8306,共6页

[目的]以毕赤酵母（Pichia pastoris）X33为宿主菌高效表达黑曲霉（Aspergillus niger）糖化酶,为进一步扩大糖化酶在工业上的应用奠定基础。[方法]利用RT-PCR技术,提取黑曲霉总RNA进行反转录,以得到的cDNA为模板,根据NCBI数据库中A.nig... [目的]以毕赤酵母（Pichia pastoris）X33为宿主菌高效表达黑曲霉（Aspergillus niger）糖化酶,为进一步扩大糖化酶在工业上的应用奠定基础。[方法]利用RT-PCR技术,提取黑曲霉总RNA进行反转录,以得到的cDNA为模板,根据NCBI数据库中A.nigerCBS513.88糖化酶的cDNA序列（glaA）设计引物,通过PCR扩增得到去除天然信号肽的糖化酶成熟肽编码基因glaAm,并将其克隆到pUC19载体中,序列分析表明,glaAm的开放阅读框由1 879个核苷酸组成,编码625个氨基酸。以此片段构建了pFLDα-glaAm重组表达载体,经NsiI线性化后,电击转化毕赤酵母X-33。摇瓶培养中通过添加终浓度为0.5%的甲醇诱导糖化酶的分泌。[结果]SDS-PAGE和Starch-PAGE显示,糖化酶得到正确的分泌表达,且具有较高的生物活性,发酵上清液中酶活最高达到380.78 U/ml（发酵液）。重组糖化酶的最适反应温度和最适pH分别为6065℃和4.0,在pH2.55.5范围内均保持90%以上的酶活力。该酶具有较高的热稳定性,pH4.0条件下,该酶在50℃下稳定;60℃处理60 min,仍能保持90%以上的酶活力;65℃下的半衰期约为44 min。[结论]黑曲霉糖化酶基因在毕赤酵母X33中得到了异源高效表达。 展开更多

关键词 毕赤酵母 糖化酶 热稳定性 异源表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

放大培养对岩黄连细胞悬浮培养的影响 被引量：4

10

作者 程华 张同存 +2 位作者 熊斌 朱凡 余龙江 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 2007年第6期939-943,共5页

为了优化岩黄连细胞悬浮培养的条件,研究了在放大培养过程中,岩黄连细胞生长与主要营养成分的代谢动力学,以及生物碱的产生情况。结果表明,在不同培养体系下,细胞生长曲线均呈现"S"型。随着培养体积从50、100 mL放大到500 mL... 为了优化岩黄连细胞悬浮培养的条件,研究了在放大培养过程中,岩黄连细胞生长与主要营养成分的代谢动力学,以及生物碱的产生情况。结果表明,在不同培养体系下,细胞生长曲线均呈现"S"型。随着培养体积从50、100 mL放大到500 mL和1 L,培养液中碳源、氮源和磷源的消耗减慢,细胞生物量减少,生物碱产量降低。其中100 mL培养体系所获生物量最高,达到15.2 g/L,生物碱产量也最高,脱氢卡维丁为8.35 mg/mL,小檗碱为4.58 mg/mL。根据本文结果,提出了岩黄连细胞培养条件的优化和大规模细胞培养生产岩黄连生物碱应采取的策略。 展开更多

关键词 细胞培养 岩黄连 脱氢卡维丁

在线阅读 下载PDF 职称材料

嗜碱芽孢杆菌PB92碱性蛋白酶基因启动子的克隆及应用 被引量：2

11

作者 陈坤 黎明 +3 位作者 成堃 杜连祥 张同存 路福平 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1513-1520,共8页

利用TAIL-PCR方法从嗜碱芽孢杆菌PB92基因组中扩增出碱性蛋白酶基因上游启动子活性片段,测序分析后登录GenBank(EU130686)。此序列具有多个启动子特征区域,且在-538～-370 bp和-275～-128 bp两个区域存在反向读码框。对启动子片段进行... 利用TAIL-PCR方法从嗜碱芽孢杆菌PB92基因组中扩增出碱性蛋白酶基因上游启动子活性片段,测序分析后登录GenBank(EU130686)。此序列具有多个启动子特征区域,且在-538～-370 bp和-275～-128 bp两个区域存在反向读码框。对启动子片段进行功能缺失的分析结果表明,TSS上游105 bp片段具有明显启动子活性,但以长为414 bp～619 bp时活性更为显著。此外,对PB92碱性蛋白酶的信号肽分析结果表明,此信号肽具有典型分泌型(Sec-type)信号肽结构。将PB92碱性蛋白酶基因启动子和信号肽序列克隆入pBE2,构建成表达载体pBEAC,并以其为载体实现了植物甜蛋白monellin基因在枯草芽孢杆菌1A751中的高效表达。 展开更多

关键词 嗜碱芽孢杆菌PB92 TAIL-PCR 碱性蛋白酶启动子 信号肽

在线阅读 下载PDF 职称材料

复合木质纤维素酶菌株筛选及其培养条件优化 被引量：4

12

作者 于俊杰 赫荣琳 +3 位作者 武改红 张粲 陈树林 张同存 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期101-109,共9页

通过富集培养、平板初筛、平板点接,从土壤中筛选得到一批产木质纤维素酶系较全的菌株,经摇瓶复筛验证确定26-6为出发菌株。该菌经PDA平板菌落形态观察、孢子扫描电镜观察以及ITS序列片段分析,初步鉴定该菌为草酸青霉组菌株,并命名为Pen... 通过富集培养、平板初筛、平板点接,从土壤中筛选得到一批产木质纤维素酶系较全的菌株,经摇瓶复筛验证确定26-6为出发菌株。该菌经PDA平板菌落形态观察、孢子扫描电镜观察以及ITS序列片段分析,初步鉴定该菌为草酸青霉组菌株,并命名为Penicillium oxalicum EH26-6。随后对菌株的摇瓶发酵条件进行研究,最终确定了最佳产酶条件:玉米芯为碳源,玉米浆干粉为有机氮源,初始pH5.0,温度30℃,接种量10%。本研究为低成本生产复合纤维素酶系的生产提供一个备选菌株。 展开更多

关键词 筛选 木质纤维素酶 培养条件 优化

在线阅读 下载PDF 职称材料

肺癌、宫颈癌细胞凋亡前后微量元素的变化

13

作者 李光城 吴应荣 +4 位作者 黄宇营 赵立敏 李景福 张同存 曹恩华 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2000年第2期240-242,共3页

全反射荧光分析 (TXRF)比常规荧光分析 (XRF)具有更高的灵敏度。我们在北京正负电子对撞机同步辐射 3W 1A新光束线改建的同步辐射荧光站上 (更换了新探测器及相应谱仪系统 ) ,用TXRF对肺癌细胞和宫颈癌细胞进行了凋亡前后的研究 ,得到... 全反射荧光分析 (TXRF)比常规荧光分析 (XRF)具有更高的灵敏度。我们在北京正负电子对撞机同步辐射 3W 1A新光束线改建的同步辐射荧光站上 (更换了新探测器及相应谱仪系统 ) ,用TXRF对肺癌细胞和宫颈癌细胞进行了凋亡前后的研究 ,得到了这些细胞凋亡前后的荧光谱。从分析这些谱的结果我们可以看到 ,凋亡前后这些癌细胞中某些微量元素的含量有了变化 ,甚至是明显变化。从这些变化中我们可得到一些启发 ,如果能找到它们的变化规律是否可为治疗癌症做出一点贡献呢 ? 展开更多

关键词 肺癌 宫颈癌 TXRF 癌细胞 凋亡 微量元素

在线阅读 下载PDF 职称材料

毛醌素(Piloquinone)生物合成基因簇的初步鉴定

14

作者 张学文 殷华 +3 位作者 周威 庄以彬 张同存 刘涛 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期76-81,共6页

通过对毛链霉菌(Streptomyces pilosus)进行基因组测序及生物信息学分析,发现基因组中分布了26个次级代谢物合成基因簇;并通过构建敲除质粒分别破坏了2个Ⅱ型聚酮化合物基因簇7pil和8pil中Ⅱ型聚酮合酶核心酶KSα和KSβ基因,获得敲除株p... 通过对毛链霉菌(Streptomyces pilosus)进行基因组测序及生物信息学分析,发现基因组中分布了26个次级代谢物合成基因簇;并通过构建敲除质粒分别破坏了2个Ⅱ型聚酮化合物基因簇7pil和8pil中Ⅱ型聚酮合酶核心酶KSα和KSβ基因,获得敲除株pil1415和pil4243;通过HPLC检测发现敲除株pil1415代谢产物中仍能检测到毛醌素的产生,而敲除株pil4243的代谢产物中检测不到毛醌素的产生,表明8pil中Ⅱ型聚酮化合物基因簇中核心酶基因的敲除阻断了毛醌素的生物合成,确定Ⅱ型聚酮化合物基因簇8pil是毛醌素的生物合成基因簇。 展开更多

关键词 毛链霉菌(Streptomyces pilosus) 毛醌素 基因组挖掘 Ⅱ型聚酮合酶

在线阅读 下载PDF 职称材料

依托省部级重点实验室的研究生培养思路探索 被引量：1

15

作者 王巨克 戴炳业 +1 位作者 王岳 张同存 《农技服务》 2013年第1期97-98,共2页

结合省部级重点实验室多年来在培养研究生过程中的实践与体会,从日常管理、技能培训、内部制度建设等方面阐述分析了省部级重点实验室在创新研究生培养思路中的探索尝试。

关键词 省部级重点实验室 研究生培养 探索

在线阅读 下载PDF 职称材料

基于网络药理学和分子对接分析赤芍抗氧化应激作用的活性成分及其机制 被引量：17

16

作者 豆佳红 王梓颖 +5 位作者 杨娟 周炜炜 张同存 何红鹏 戴小枫 李秀梅 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期1229-1240,共12页

【目的】利用网络药理学及分子对接技术分析赤芍抗氧化应激作用的有效活性成分及其分子机制。【方法】运用TCMSP数据库搜集赤芍的活性成分和靶点,借助UniProt数据库对靶点进行基因名转化;通过GeneCards和OMIM数据库检索氧化应激的相关基... 【目的】利用网络药理学及分子对接技术分析赤芍抗氧化应激作用的有效活性成分及其分子机制。【方法】运用TCMSP数据库搜集赤芍的活性成分和靶点,借助UniProt数据库对靶点进行基因名转化;通过GeneCards和OMIM数据库检索氧化应激的相关基因,利用Veeny在线平台获得赤芍与氧化应激的交集靶点,将交集靶点上传至STRING数据库和Cytoscape 3.8.0软件建立蛋白互作(PPI)网络图和赤芍-靶点-氧化应激可视化网络并进行拓扑学分析,筛选关键靶点;运用Metascape数据库对关键靶点进行GO功能和KEGG通路富集分析,确定赤芍发挥抗氧化应激作用的活性成分和信号通路;运用AutoDock和PyMol软件对赤芍发挥抗氧化应激作用的核心靶点进行分子对接验证。【结果】共筛选到12个赤芍活性成分,包括黄芩素、β-谷甾醇、鞣花酸、豆甾醇、(+)-儿茶素等;赤芍活性成分与氧化应激靶点分别有76和4873个,其中赤芍与氧化应激交集靶点共69个,包括蛋白激酶B(AKT1)、转录因子AP-1(JUN)、细胞肿瘤抗原p53(TP53)、肿瘤坏死因子(TNF)和半胱氨酸蛋白酶-3(CASP3)等;GO功能和KEGG通路富集结果提示,赤芍抗氧化应激与磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K-Akt)、核因子κB(NF-κB)等多个信号通路有关;分子对接结果表明,赤芍主要活性成分黄芩素、β-谷甾醇与核心靶点有较好的结合能力。【结论】赤芍可能通过黄芩素、β-谷甾醇、鞣花酸等活性成分调控PI3K-Akt、NF-κB、白细胞介素-17(IL17)等信号通路中的关键靶点来发挥抗氧化应激作用。 展开更多

关键词 赤芍 抗氧化应激 作用机制 网络药理学 分子对接

在线阅读 下载PDF 职称材料

壳聚糖固定D-阿洛酮糖3-差向异构酶转化D-阿洛酮糖 被引量：6

17

作者 李晓波 朱癑明 +3 位作者 柏玮 张同存 何森健 孙媛霞 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2013年第17期158-162,共5页

D-阿洛酮糖3-差向异构酶是一种能催化D-果糖转化为D-阿洛酮糖的异构酶。本实验采用壳聚糖作为载体制备固定化D-阿洛酮糖3-差向异构酶,考察了固定化酶的制备条件和酶学性质,并研究在填充床中利用固定化D-阿洛酮糖3-差向异构酶持续转化D-... D-阿洛酮糖3-差向异构酶是一种能催化D-果糖转化为D-阿洛酮糖的异构酶。本实验采用壳聚糖作为载体制备固定化D-阿洛酮糖3-差向异构酶,考察了固定化酶的制备条件和酶学性质,并研究在填充床中利用固定化D-阿洛酮糖3-差向异构酶持续转化D-果糖。实验结果表明:固定时间为3h,酶∶载体=15∶1(U/g),其酶活回收率达到45%。相比游离酶,固定化酶具有更高的温度稳定性以及在较宽的pH范围内保持较高酶活,其最适温度和pH分别为60℃与8.5。固定化酶在填充床中反应的最高转化率为24%,在最佳流速2.5mL/min下其转化率为19%,相关产率为6.7g/L·h,经过168h的反应,其转化率仍然保持在13%以上。 展开更多

关键词 壳聚糖 D-阿洛酮糖3-差向异构酶 固定化酶 填充床 D-阿洛酮糖

在线阅读 下载PDF 职称材料

低温木糖苷/阿拉伯呋喃糖苷酶AX543的基因克隆及性质研究 被引量：3

18

作者 张明慧 李中媛 +3 位作者 仇海燕 王翠琼 王惠 张同存 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期215-223,共9页

旨在获得在低温条件下具有高催化能力的低温木糖苷酶,并对其进行异源表达研究和酶学性质分析。利用Touch down PCR和TAIL PCR方法,从枝顶孢菌中克隆得到一个序列新颖的GH43家族双功能木糖苷酶/阿拉伯呋喃糖苷酶基因ax543,该酶基因在毕... 旨在获得在低温条件下具有高催化能力的低温木糖苷酶,并对其进行异源表达研究和酶学性质分析。利用Touch down PCR和TAIL PCR方法,从枝顶孢菌中克隆得到一个序列新颖的GH43家族双功能木糖苷酶/阿拉伯呋喃糖苷酶基因ax543,该酶基因在毕赤酵母中成功表达。酶学性质分析发现重组酶AX543的最适温度为25℃,在15℃和4℃仍有54%和21%的相对酶活;具有木糖苷酶和阿拉伯呋喃糖苷酶活性,并可以降解木二糖、木三糖、桦木木聚糖、榉木木聚糖和小麦阿拉伯木聚糖;可以与木聚糖酶Xyn11-1协同作用,协同度达1.46;具有高木糖/阿拉伯糖耐受性,抑制常数Ki分别为84.78 mmol/L和54.01 mmol/L。 展开更多

关键词 木糖苷酶 阿拉伯呋喃糖苷酶 双功能 低温 协同作用 产物耐受性

在线阅读 下载PDF 职称材料

枯草芽孢杆菌RZ001对乳鼠肠道发育、肠道菌群和Wnt信号通路相关基因表达的影响 被引量：5

19

作者 郭聪聪 李艳茹 +8 位作者 耿萌 盖塞伦 张滕勋 齐威 李中媛 宋亚囝 罗学刚 张同存 王楠 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期506-518,共13页

本试验旨在研究枯草芽孢杆菌RZ001的早期定植对乳鼠早期生长、肠道发育、肠道菌群和Wnt信号通路相关基因表达的影响。选择4窝数量相同的新出生的C57BL/6小鼠乳鼠,分为2个组(对照组和试验组),每组2个重复。从出生后第2天开始,试验组乳鼠... 本试验旨在研究枯草芽孢杆菌RZ001的早期定植对乳鼠早期生长、肠道发育、肠道菌群和Wnt信号通路相关基因表达的影响。选择4窝数量相同的新出生的C57BL/6小鼠乳鼠,分为2个组(对照组和试验组),每组2个重复。从出生后第2天开始,试验组乳鼠连续14 d灌胃10μL枯草芽孢杆菌RZ001(1×10^7 CFU/d),对照组乳鼠连续14 d灌胃10μL磷酸盐缓冲液(PBS)。结果表明:1)与对照组相比,试验组的乳鼠从出生后第2天到第8天体重显著或极显著增加(P<0.05或P<0.01),脾脏、肾脏、胸腺重量和指数显著或极显著增加(P<0.05或P<0.01),但肝脏重量和指数无显著差异(P>0.05)。2)与对照组相比,试验组的小肠绒毛密度、绒毛长度和绒毛长度/隐窝深度显著或极显著增加(P<0.05或P<0.01),隐窝深度极显著降低(P<0.01)。3)与对照组相比,试验组的小肠杯状细胞的数量显著增加(P<0.05),小肠中黏蛋白2(MUC2)的mRNA相对表达量和MUC2含量均显著增加(P<0.05)。4)与对照组相比,试验组的小肠中闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、闭锁蛋白(Ocln)、封闭蛋白-3(Cldn-3)的mRNA相对表达量均极显著增加(P<0.01)。5)与对照组相比,试验组的小肠中Wnt3、卷曲受体蛋白7(Fzd7)、低密度脂蛋白受体相关蛋白5(Lrp5)、糖原合成激酶-3β(Gsk-3β)、Ctnnb1、细胞性骨髓细胞瘤病毒癌基因(C-myc)、轴蛋白抑制蛋白2(Axin2)、无张力同系物1(Atoh1)、富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体5(Lgr5)和Ki67的mRNA相对表达量显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01),但低密度脂蛋白受体相关蛋白6(Lrp6)的mRNA相对表达量显著降低(P<0.05);同时,试验组的小肠中β-连环蛋白(β-catenin)蛋白相对表达量显著升高(P<0.05)。6)门水平上,与对照组相比,试验组的盲肠中拟杆菌门的相对丰度显著增加(P<0.05),而厚壁菌门的相对丰度显著降低(P<0.05)。属水平上,与对照组相比,试验组的盲肠中双歧杆菌属的相对丰度极显著增加(P<0.01),而产气荚膜梭菌的相对丰度极显著降低(P<0.01)。由此可见,早期应用枯草芽孢杆菌RZ001能够促进乳鼠生长,改善肠道形态,促进肠道屏障功能成熟,从而促进早期肠道发育。早期应用枯草芽孢杆菌RZ001还能够激活Wnt信号通路,降低肠道致病菌产气荚膜梭菌的相对丰度,增加肠道益生菌双歧杆菌属的相对丰度。 展开更多

关键词 枯草芽孢杆菌 乳鼠 肠道发育 WNT信号通路 肠道菌群

在线阅读 下载PDF 职称材料

婴儿源鼠李糖乳杆菌的筛选及其促肠道类器官生长的研究 被引量：4

20

作者 盖赛伦 陈晓洁 +6 位作者 凌涛 张腾勋 耿萌 齐威 罗学刚 张同存 王楠 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2022年第17期167-175,共9页

本研究以分离得到的5株来源于一月龄婴儿的鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)与2株副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)作为实验菌,以鼠李糖乳杆菌GG(Lactobacillus rhamnosus GG,LGG)作为对照菌株,通过耐酸实验、耐胆盐实验、... 本研究以分离得到的5株来源于一月龄婴儿的鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)与2株副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)作为实验菌,以鼠李糖乳杆菌GG(Lactobacillus rhamnosus GG,LGG)作为对照菌株,通过耐酸实验、耐胆盐实验、疏水性实验、自动聚集能力测定和细胞黏附等实验对这些菌株的消化道耐受性进行评价。进一步选择在耐受性实验中综合评价效果最好的鼠李糖乳杆菌SW-02与肠道类器官进行共培养,用倒置相差显微镜观察类器官形态、生长状况,计算出芽率,利用EdU染色评估类器官中细胞增殖情况,利用实时荧光定量PCR检测增殖标志基因Ki67、肠道干细胞标志物Lgr5和紧密连接蛋白Zo-1的mRNA水平,利用酶联免疫吸附试验测定粘蛋白MUC2含量。结果证实:与其他菌株相比,鼠李糖乳杆菌SW-02有较强的耐酸性;SW-02、SW-03和SW-X的耐胆盐能力相对较强;LGG、SW-01、SW-02、SW-04和TX-02对二甲苯的疏水性高;对于自动聚集能力,SW-01最强,SW-02次之;对HT-29细胞的黏附性实验显示,菌株SW-01、SW-02和SW-03具有较高的黏附能力;将SW-02与类器官共培养时,SW-02显著(P<0.05)提高了类器官的出芽率和出芽个数,促进类器官的生长;与对照组相比,SW-02组类器官的Ki67、Lgr5和Zo-1的mRNA水平均显著增加,MUC2分泌量显著增加(P<0.05)。综上,鼠李糖乳杆菌SW-02具有较好的消化道耐受性和促进肠道类器官生长的能力,可以作为今后开发具有益生性产品的潜在菌株。 展开更多

关键词 鼠李糖乳杆菌 婴儿粪便 耐受性评价 肠道类器官 肠道发育

在线阅读 下载PDF 职称材料