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两种PCR快速检测转基因糜子中外源基因的插入拷贝数
1
作者
董晓静
夏启玉
+3 位作者
降彦苗
刘国庆
程汝宏
赵辉
《热带农业科学》
2025年第2期55-63,共9页
近年来,糜子(Panicum miliaceum L.)的转基因育种研究越来越多,本研究旨在建立简单快速检测转基因糜子中外源基因插入拷贝数的方法。从糜子基因组中筛选了一个单拷贝基因SD1,并以其为内参基因,以潮霉素抗性基因(Hyg)为外源基因,建立了数...
近年来,糜子(Panicum miliaceum L.)的转基因育种研究越来越多,本研究旨在建立简单快速检测转基因糜子中外源基因插入拷贝数的方法。从糜子基因组中筛选了一个单拷贝基因SD1,并以其为内参基因,以潮霉素抗性基因(Hyg)为外源基因,建立了数字PCR检测转基因糜子中外源基因插入拷贝数的方法。并以数字PCR鉴定的一个双拷贝样品为参照样本,建立了荧光定量PCR检测转基因糜子中外源基因插入拷贝数的方法。生物信息学分析表明,SD1为单拷贝基因,可作为转基因糜子中外源基因插入拷贝数检测的内参基因。数字PCR法检测的转基因糜子样品中,9份样品均为单拷贝或双拷贝插入;荧光定量PCR法检测的转基因糜子样品中,10份样品为单拷贝或双拷贝插入,其余13份样品均为多拷贝插入;对其中的4份低拷贝样品也进行了数字PCR检测,结果与荧光定量PCR法的检测结果完全一致,表明荧光定量PCR法检测转基因糜子中外源基因低拷贝时的准确度较高。本研究建立的数字PCR法简单快速,准确度高,适合在样品数量较少时使用,而荧光定量PCR法检测低拷贝插入时准确度较高,且成本低廉,适合从大量转基因株系中初筛出的低拷贝插入株系。这2种方法均可简单快速地检测糜子转基因育种中外源基因插入拷贝数。
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关键词
转基因糜子
外源基因
插入拷贝数
数字PCR
荧光定量PCR
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职称材料
包涵体蛋白的复性研究进展
被引量：
8
2
作者
夏启玉
肖苏生
+2 位作者
邓柳红
易小平
张春发
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2008年第14期5801-5803,共3页
介绍了包涵体的洗涤、变性溶解和传统的复性方法,详细阐述了包涵体蛋白的层析复性方法以及复性过程中的添加剂效果。
关键词
包涵体
变性
层析复性
添加剂
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职称材料
题名
两种PCR快速检测转基因糜子中外源基因的插入拷贝数
1
作者
董晓静
夏启玉
降彦苗
刘国庆
程汝宏
赵辉
机构
中国热带农业科学院三亚研究院/中国热带农业科学院热带生物技术研究所/海南省南繁生物安全与分子育种重点实验室
洛阳师范学院生命科学学院
河北农林科学院谷子研究所
出处
《热带农业科学》
2025年第2期55-63,共9页
基金
三亚崖州湾科技城科技专项(No.SCKJ-JYRC-2022-90)
中央引导地方科技发展资金项目(No.226Z6301G)
国家自然科学基金(No.32241043)。
文摘
近年来,糜子(Panicum miliaceum L.)的转基因育种研究越来越多,本研究旨在建立简单快速检测转基因糜子中外源基因插入拷贝数的方法。从糜子基因组中筛选了一个单拷贝基因SD1,并以其为内参基因,以潮霉素抗性基因(Hyg)为外源基因,建立了数字PCR检测转基因糜子中外源基因插入拷贝数的方法。并以数字PCR鉴定的一个双拷贝样品为参照样本,建立了荧光定量PCR检测转基因糜子中外源基因插入拷贝数的方法。生物信息学分析表明,SD1为单拷贝基因,可作为转基因糜子中外源基因插入拷贝数检测的内参基因。数字PCR法检测的转基因糜子样品中,9份样品均为单拷贝或双拷贝插入;荧光定量PCR法检测的转基因糜子样品中,10份样品为单拷贝或双拷贝插入,其余13份样品均为多拷贝插入;对其中的4份低拷贝样品也进行了数字PCR检测,结果与荧光定量PCR法的检测结果完全一致,表明荧光定量PCR法检测转基因糜子中外源基因低拷贝时的准确度较高。本研究建立的数字PCR法简单快速,准确度高,适合在样品数量较少时使用,而荧光定量PCR法检测低拷贝插入时准确度较高,且成本低廉,适合从大量转基因株系中初筛出的低拷贝插入株系。这2种方法均可简单快速地检测糜子转基因育种中外源基因插入拷贝数。
关键词
转基因糜子
外源基因
插入拷贝数
数字PCR
荧光定量PCR
Keywords
transgenic broomcorn millet
exogenous genes
insertion copy number
digital PCR
quantitative fluorescence PCR
分类号
S516 [农业科学—作物学]
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职称材料
题名
包涵体蛋白的复性研究进展
被引量：
8
2
作者
夏启玉
肖苏生
邓柳红
易小平
张春发
机构
中国热带农业科学院热带生物技术研究所
出处
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2008年第14期5801-5803,共3页
基金
中国热带农业科学院中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金资助
文摘
介绍了包涵体的洗涤、变性溶解和传统的复性方法,详细阐述了包涵体蛋白的层析复性方法以及复性过程中的添加剂效果。
关键词
包涵体
变性
层析复性
添加剂
Keywords
Inclusion body
Denaturation
Chromatography renaturation
Additive
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
两种PCR快速检测转基因糜子中外源基因的插入拷贝数
董晓静
夏启玉
降彦苗
刘国庆
程汝宏
赵辉
《热带农业科学》
2025
0
在线阅读
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职称材料
2
包涵体蛋白的复性研究进展
夏启玉
肖苏生
邓柳红
易小平
张春发
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2008
8
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职称材料
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