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分析超速离心研究多聚酸性氨基酸对SnRK2.6的影响 被引量:4
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作者 褚文丹 周翠燕 +2 位作者 芦亚菲 徐扬 李文奇 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2016年第3期256-264,共9页
分析超速离心技术是一种通过检测分子在离心场作用下的沉降行为,分析获得其沉降系数、扩散系数、流体力学半径、摩尔质量、结合常数等水力学和热力学性质的方法,被广泛应用于蛋白质分子溶液性质的研究中.本文利用分析超速离心技术研... 分析超速离心技术是一种通过检测分子在离心场作用下的沉降行为,分析获得其沉降系数、扩散系数、流体力学半径、摩尔质量、结合常数等水力学和热力学性质的方法,被广泛应用于蛋白质分子溶液性质的研究中.本文利用分析超速离心技术研究了拟南芥SnRK2.6(sucrosenon—fermentingl一relied protein kinase2.6)末端一段多聚酸性氨基酸序列对其溶液性质的影响,并将多聚酸性氨基酸序列SnRK2.6(333-362)及人源PDI(protein disulfide isomerase)(441-491)连接至拟南芥PYLIO(PYR likep rotein10)分子末端进行分析,同时结合分子排阻层析和静态光散射技术,研究了上述蛋白质分子的分子质量和聚合状态.结果表明,多聚酸性氨基酸序列可以引起蛋白质分子轴长比增加,在溶液中运动时摩擦系数增加,水合半径明显增大,分子排阻层析洗脱体积明显变小. 展开更多
关键词 分析超速离心 分子排阻层析 静态光散射 蛋白质分子质量 聚合状态
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多聚酸性氨基酸对蛋白质性质的影响
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作者 李亚妃 武沈阳 +3 位作者 褚文丹 周翠燕 施清华 李文奇 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期21-26,共6页
选取碳末端富含酸性氨基酸的拟南芥SnRK2.6(sucrose non-fermenting1-related protein kinase 2.6)和人源PDI(protein disulfide isomerase),以及近球形蛋白拟南芥PYL10 (PYR like protein 10),分别将重复酸性氨基酸序列添加到SnRK2.6(1... 选取碳末端富含酸性氨基酸的拟南芥SnRK2.6(sucrose non-fermenting1-related protein kinase 2.6)和人源PDI(protein disulfide isomerase),以及近球形蛋白拟南芥PYL10 (PYR like protein 10),分别将重复酸性氨基酸序列添加到SnRK2.6(1-332)、PDI(1-440)、PYL10碳末端,利用大肠杆菌BL21重组表达,经过亲和层析,离子交换层析和分子排阻层析进行纯化,综合利用分析超速离心技术,分子排阻层析技术以及多角度静态光散射技术,研究人为设计的多聚氨基酸末端对蛋白质分子排阻行为,聚合状态和其他水力学性质的影响。结果发现,多聚酸性氨基酸末端虽不影响蛋白质分子的聚合状态,但会明显减少分子排阻色谱中蛋白质的洗脱体积,影响蛋白质分子的斯托克斯半径和轴长比等水力学性质。 展开更多
关键词 分析超速离心 多角度静态光散射 分子排阻层析 多聚酸性氨基酸 水力学性质
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分析超速离心技术研究膜蛋白TmrAB 被引量:2
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作者 褚文丹 徐扬 +4 位作者 周翠燕 芦亚菲 于晓霞 张瑞轩 李文奇 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2018年第10期1047-1053,共7页
去垢剂在膜蛋白的提取纯化过程中起到必要的作用,对膜蛋白的聚合状态、结晶条件以及理化性质等方面都有较大影响.分析超速离心技术(analytical ultracentrifuge,AUC)通过测定溶液中膜蛋白-去垢剂复合物在离心场中的沉降运动轨迹,可以分... 去垢剂在膜蛋白的提取纯化过程中起到必要的作用,对膜蛋白的聚合状态、结晶条件以及理化性质等方面都有较大影响.分析超速离心技术(analytical ultracentrifuge,AUC)通过测定溶液中膜蛋白-去垢剂复合物在离心场中的沉降运动轨迹,可以分析获得其沉降系数、摩尔质量、流体力学半径、结合常数等水力学和热力学性质,进而判断膜蛋白-去垢剂复合物的均一性及聚合状态.本文以嗜热菌来源的ATP结合转运蛋白(ABC transporter)TmrAB作为研究对象,利用分析超速离心技术结合分子排阻层析和冷冻电镜负染技术,研究其均一性、聚合状态以及去垢剂与膜蛋白的摩尔比.结果显示,在8倍临界胶束浓度(critical micelle concentration,CMC)的DDM条件下,TmrAB性质均一,并以异二聚体的单体形式存在,DDM与Tmr AB的摩尔比为116∶1.本研究表明,分析超速离心技术是一种测定膜蛋白分子质量、研究膜蛋白聚合状态的可靠手段. 展开更多
关键词 分析超速离心 分子排阻层析 冷冻电镜 膜蛋白 分子质量
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