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可溶性尿激酶受体的表达、纯化和结晶 被引量:3
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作者 袁彩 淮清 +1 位作者 卞传兵 黄明东 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第3期277-281,共5页
克隆尿激酶受体可溶区域(suPAR)到果蝇胚胎细胞分泌表达载体pMT/Bip/v5-his,重组质粒与pCoHygro共转染果蝇S2细胞,筛选多拷贝稳定表达细胞系suPARS2.suPAR表达蛋白经尿激酶N端片段亲和柱、ResourceQ阴离子交换柱两步纯化后,得到高纯度... 克隆尿激酶受体可溶区域(suPAR)到果蝇胚胎细胞分泌表达载体pMT/Bip/v5-his,重组质粒与pCoHygro共转染果蝇S2细胞,筛选多拷贝稳定表达细胞系suPARS2.suPAR表达蛋白经尿激酶N端片段亲和柱、ResourceQ阴离子交换柱两步纯化后,得到高纯度的、稳定的suPAR单体.纯化后的蛋白质,与其抗体ATN615及尿激酶N端片段结构域等摩尔混合,浓缩至10g/L,以透析法进行该三元复合物晶体生长,获得衍射分辨率为1.9#的蛋白质晶体. 展开更多
关键词 可溶性尿激酶受体 纯化 复合物结晶
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尿激酶催化结构域在毕氏酵母中的表达、纯化及结晶
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作者 赵更香 袁彩 +4 位作者 卞传兵 江龙光 叶晓明 黄子详 黄明东 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第4期377-381,共5页
利用重叠延伸PCR方法扩增尿激酶催化结构域的突变体基因片段,将其克隆至表达载体pPICZαA上,转化酵母X-33,用Zeocin筛选高拷贝数的酵母菌落.重组蛋白通过阳离子琼脂糖柱纯化,纯度达到99%,该仅含尿激酶催化结构域的突变体(C279A/N302Q),... 利用重叠延伸PCR方法扩增尿激酶催化结构域的突变体基因片段,将其克隆至表达载体pPICZαA上,转化酵母X-33,用Zeocin筛选高拷贝数的酵母菌落.重组蛋白通过阳离子琼脂糖柱纯化,纯度达到99%,该仅含尿激酶催化结构域的突变体(C279A/N302Q),无需激活即具有尿激酶活性.用气相扩散法获得蛋白质晶体,其衍射分辨率达1.45!. 展开更多
关键词 尿激酶 PICHIA PASTORIS 纤溶酶原 重叠延伸PCR 结晶
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尿激酶催化结构域S356A突变体在毕氏酵母中的表达、纯化及结晶
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作者 赵更香 江龙光 +5 位作者 卞传兵 袁彩 侯晓敏 叶晓明 黄子详 黄明东 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第S1期336-339,共4页
采用定位突变和重叠延伸PCR方法扩增尿激酶催化结构域基因片段,将其克隆至表达载体pPICZαA上,转化毕氏酵母X-33。重组蛋白通过阳离子琼脂糖柱纯化、凝胶层析柱检测,纯度达到99%以上,该重组的尿激酶催化结构域(C279A/N302Q/S356A)不具... 采用定位突变和重叠延伸PCR方法扩增尿激酶催化结构域基因片段,将其克隆至表达载体pPICZαA上,转化毕氏酵母X-33。重组蛋白通过阳离子琼脂糖柱纯化、凝胶层析柱检测,纯度达到99%以上,该重组的尿激酶催化结构域(C279A/N302Q/S356A)不具有丝氨酸蛋白酶活性。用气相扩散法获得蛋白晶体,其衍射分辨率达1.77(?),结构解析发现在其复合物结构中有三个抑制剂分子苯甲醚。 展开更多
关键词 尿激酶 定位突变PCR 表达 纯化 结晶
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