目的观察碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)对兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)向成骨细胞分化的影响,并探讨其最佳作用浓度。方法采用体外全血贴壁法培养兔BMSCs,进行表面抗原(CD29、CD44、CD45,采用流式细胞术)及成软骨(HE染色和阿尔新蓝染色)...目的观察碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)对兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)向成骨细胞分化的影响,并探讨其最佳作用浓度。方法采用体外全血贴壁法培养兔BMSCs,进行表面抗原(CD29、CD44、CD45,采用流式细胞术)及成软骨(HE染色和阿尔新蓝染色)、成骨[茜素红染色及碱性磷酸酶(ALP)染色]分化潜能鉴定。取第2代BMSCs,加入含0、1、5、10、50、100 ng/m L b FGF的成骨诱导液,分别于培养第4、7、10、14天采用PNP比色法检测ALP表达,采用放射免疫分析法检测骨钙素(OC)表达。结果细胞表面抗原CD29阳性表达率为92.23%,CD44阳性表达率为80.01%,CD45阳性表达率为1.91%;HE染色见细胞形态为多角形或多边形,有多个凸起,核周细胞质内可见黑色颗粒,阿尔新蓝染色可见细胞间大量天蓝色物质弥漫分布;茜素红染色可见大量红色钙结节,ALP染色可见细胞质中出现棕褐色的颗粒和块状沉淀;证实分离培养的细胞为BMSCs,并具有成软骨和成骨分化潜能。随着作用时间的延长,BMSCs经不同浓度b FGF作用后ALP及OC表达均呈升高趋势。相同作用时间下,BMSCs经50 ng/m L b FGF作用后ALP及OC表达均高于0、1、5、10、100 ng/m L b FGF作用后(P均<0.01)。结论 b FGF能促进BMSCs向成骨细胞分化,并呈时间依赖性;其最佳作用浓度为50 ng/m L。展开更多
Wnt通路在骨细胞的分化成熟、增殖更新和代谢中发挥重要作用。Wnt通路层级结构并不复杂,但参与通路活动的因子众多,包括数种低密度脂蛋白受体相关蛋白(low density lipoprotein receptor-related protein,LRP),19种的Wnt蛋白和10种卷曲...Wnt通路在骨细胞的分化成熟、增殖更新和代谢中发挥重要作用。Wnt通路层级结构并不复杂,但参与通路活动的因子众多,包括数种低密度脂蛋白受体相关蛋白(low density lipoprotein receptor-related protein,LRP),19种的Wnt蛋白和10种卷曲蛋白受体(frizzled receptor,FZD),还有多种非经典Wnt通路和抑制剂。Wnt蛋白家族结合细胞表面受体,启动经典Wnt通路或非经典Wnt通路下游信号发挥生理作用,不同蛋白对骨细胞分化方向和成骨活性或破骨活性的影响并不一致。文中主要对Wnt蛋白家族和Wnt通路对骨细胞分化、增殖和代谢活动的影响以及信号传导机制进行分析总结,概述Wnt蛋白家族对骨细胞活动和骨病的发生的影响及针对性药物的研究进展。展开更多
文摘目的观察碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)对兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)向成骨细胞分化的影响,并探讨其最佳作用浓度。方法采用体外全血贴壁法培养兔BMSCs,进行表面抗原(CD29、CD44、CD45,采用流式细胞术)及成软骨(HE染色和阿尔新蓝染色)、成骨[茜素红染色及碱性磷酸酶(ALP)染色]分化潜能鉴定。取第2代BMSCs,加入含0、1、5、10、50、100 ng/m L b FGF的成骨诱导液,分别于培养第4、7、10、14天采用PNP比色法检测ALP表达,采用放射免疫分析法检测骨钙素(OC)表达。结果细胞表面抗原CD29阳性表达率为92.23%,CD44阳性表达率为80.01%,CD45阳性表达率为1.91%;HE染色见细胞形态为多角形或多边形,有多个凸起,核周细胞质内可见黑色颗粒,阿尔新蓝染色可见细胞间大量天蓝色物质弥漫分布;茜素红染色可见大量红色钙结节,ALP染色可见细胞质中出现棕褐色的颗粒和块状沉淀;证实分离培养的细胞为BMSCs,并具有成软骨和成骨分化潜能。随着作用时间的延长,BMSCs经不同浓度b FGF作用后ALP及OC表达均呈升高趋势。相同作用时间下,BMSCs经50 ng/m L b FGF作用后ALP及OC表达均高于0、1、5、10、100 ng/m L b FGF作用后(P均<0.01)。结论 b FGF能促进BMSCs向成骨细胞分化,并呈时间依赖性;其最佳作用浓度为50 ng/m L。
