猪瘟病毒E2蛋白纳米颗粒的制备及在家兔上的免疫原性分析

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作者 张晓玲 何兴林 +6 位作者 张梦迪 李鹏飞 孙玉梅 马海龙 朱红梅 张梦佳 李文涛 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第5期2301-2311,共11页

本研究旨在开发一种猪瘟E2纳米颗粒疫苗,并对其免疫原性进行分析。以猪瘟病毒石门株E2基因序列为模板,对其胞外域进行人源密码子优化,通过293F哺乳动物细胞真核表达系统制备E2、E2-pFc(E2与猪源抗体的Fc片段融合表达)、SpyTag-E2(E2与Sp... 本研究旨在开发一种猪瘟E2纳米颗粒疫苗,并对其免疫原性进行分析。以猪瘟病毒石门株E2基因序列为模板,对其胞外域进行人源密码子优化,通过293F哺乳动物细胞真核表达系统制备E2、E2-pFc(E2与猪源抗体的Fc片段融合表达)、SpyTag-E2(E2与SpyTag融合表达)以及纳米骨架蛋白LS(lumazine synthase-protein A),原核表达系统纯化纳米骨架蛋白mi3(mi3-SpyCatcher),进一步组装成纳米颗粒LS-E2-pFc NP和mi3-E2 NP,并通过透射电镜和动态光散射试验进行鉴定,各组蛋白分别与ISA201佐剂乳化,制备亚单位疫苗。选用1.5~2.0 kg重的日本长耳大白兔35只,随机分为7组,包括空白对照组(n=3)、PBS阴性对照组(n=3)、E2组(n=5)、E2-pFc组(n=5)、LS-E2-pFc NP组(n=5)、mi3-E2 NP组(n=5)和CSFV E2商业化亚单位疫苗组(n=3)。于0、21 d进行肌肉注射免疫,42 d将CSFV C株经耳缘静脉按照100 RID50·只-1进行攻毒,通过阻断ELISA、中和试验、体温监测和RT-qPCR等试验评估兔的特异性抗体水平、中和抗体水平、兔体定型热反应以及脾脏病毒载量。结果显示,各组分蛋白成功表达,纯化后的蛋白条带单一,纯度较高。透射电镜可观察到粒径在10~70 nm的纳米颗粒结构,动态光散射试验观察到mi3-E2平均粒径(68 nm)大于mi3(42.73 nm),LS-E2-pFc平均粒径(42.4 nm)大于LS(13 nm)。免疫试验结果表明,E2、E2-pFc、LS-E2-pFc NP、mi3-E2 NP疫苗和商业化亚单位疫苗均有良好的免疫效果,攻毒前7 d,血清中特异性抗体阻断率均在89%以上,组间差异不显著(P>0.05)。攻毒后,PBS阴性对照组出现典型的兔体定型热反应,其余免疫组的体温变化不明显;攻毒后7 d,E2、E2-pFc、LS-E2-pFc NP、mi3-E2 NP疫苗和商业化亚单位疫苗组的中和抗体效价分别为1∶10392.4、1∶37168.4、1∶75473.6、1∶20201.8、1∶2407,其中,LS-E2-pFc NP组的中和抗体水平最高。RT-qPCR结果显示,E2组有一只兔检出低拷贝的病毒载量,拷贝数为5.83 copies·μL^(-1),其余免疫组未检到病毒载量。以上结果显示LS-E2-pFc NP免疫组效果最好,中和抗体水平最高。这种“标记”疫苗可以对自然感染和免疫接种的动物进行鉴别诊断,有助于猪场净化猪瘟。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 E2亚单位疫苗 自组装纳米疫苗 中和抗体

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基于双人源化小鼠模型探索靶向间质MAOA在前列腺癌免疫微环境中的作用

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作者 赵志特 何兴林 +1 位作者 师长宏 杨力军 《中国实验动物学报》 北大核心 2025年第4期479-488,共10页

目的通过构建免疫-肿瘤双人源化小鼠模型,探索靶向间质单胺氧化酶A(monoamine oxidase A,MAOA)在前列腺癌免疫微环境中的作用。方法利用生物信息学分析MAOA高表达肿瘤相关成纤维细胞(cancer associated fibroblasts,CAFs)在前列腺癌中与... 目的通过构建免疫-肿瘤双人源化小鼠模型,探索靶向间质单胺氧化酶A(monoamine oxidase A,MAOA)在前列腺癌免疫微环境中的作用。方法利用生物信息学分析MAOA高表达肿瘤相关成纤维细胞(cancer associated fibroblasts,CAFs)在前列腺癌中与T细胞的关系;利用多重免疫荧光技术分析间质MAOA与CD8^(+)T细胞的关系;构建免疫-肿瘤双人源化小鼠模型,体内验证靶向间质MAOA后CD8^(+)T细胞浸润情况。结果间质中MAOA的表达与CD8^(+)T细胞浸润成反比;体内抑制间质中MAOA可以提高CD8^(+)T细胞浸润,这可能是通过抑制肿瘤微环境中胶原的累积所实现的。结论间质中MAOA在前列腺癌免疫抑制微环境中发挥着重要作用,抑制间质中MAOA的表达可以促进免疫细胞的浸润,提示MAOA抑制剂可能作为前列腺癌患者免疫联合治疗的潜在治疗药物。 展开更多

关键词 前列腺癌 MAOA 肿瘤相关成纤维细胞 肿瘤免疫微环境

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活血定颤汤联合多巴丝肼片对帕金森病伴认知障碍患者认知功能及氧化应激生物标志物水平影响 被引量：35

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作者 彭张辉 谢安卫 +4 位作者 郭建 刘万平 匡静 何兴林 刘莉 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2021年第2期203-207,共5页

目的观察活血定颤汤联合多巴丝肼片治疗帕金森病(Parkinson’s disease,PD)伴认知障碍患者的疗效及探究其对认知功能及氧化应激生物标志物的影响。方法随机将2015年1月—2019年8月医院神经内科门诊或住院收治的PD伴轻度认知障碍120例患... 目的观察活血定颤汤联合多巴丝肼片治疗帕金森病(Parkinson’s disease,PD)伴认知障碍患者的疗效及探究其对认知功能及氧化应激生物标志物的影响。方法随机将2015年1月—2019年8月医院神经内科门诊或住院收治的PD伴轻度认知障碍120例患者分为两组,各60例,对照组采用多巴丝肼片进行治疗。在对照组的基础上,观察组给予活血定颤汤治疗。两组连续治疗12周。于治疗前后,比较两组的临床疗效、中医证候积分、生活质量评分(UPDRS)、认知功能(MMSE及MoCA评分)、不良反应、5-羟色胺(5-HT)、P物质(SP)、同型半胱氨酸(Hcy)、丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)的水平。结果治疗后观察组临床疗效总有效率为76.7%(46/60),对照组总有效率为93.3%(56/60),两组比较差异有统计学意义(Z=6.395,P<0.05);治疗后两组的表情呆滞、头或肢体颤动、肢体拘挛、言语不利、步态顺畅程度等中医证候积分均显著降低(P<0.05),观察组的各项中医证候积分均显著低于对照组(P<0.05)。治疗后两组MMSE、MoCA评分、分均有显著降低(P<0.05),并且观察组的MMSE、MoCA评分显著低于对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。两组治疗后SP、Hcy及MDA均有显著降低(P<0.05),并且观察组的SP、Hcy及MDA显著低于对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);治疗后5-HT、SOD显著升高(P<0.05),并且观察组的5-HT、SOD明显高于对照组(P<0.05)。对照组不良反应发生率为65.0%(39/60),观察组不良反应发生率为23.3%(14/60),两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论活血定颤汤联合多巴丝肼片治疗帕金森病伴认知障碍患者可有效促进认知功能的改善,并且有效调节血清5-HT、SP、Hcy、SOD及MDA水平,值得临床推广。 展开更多

关键词 帕金森病 活血定颤汤 多巴丝肼 认知障碍

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控释肥用量对水稻干物质积累和产量的影响 被引量：10

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作者 李贵勇 高森 +10 位作者 栾鸭红 资月娥 常小详 杨翠玲 何兴林 相罕章 黄军 夏琼梅 龙瑞平 朱海平 杨从党 《中国稻米》 北大核心 2015年第4期88-90,94,共4页

本文研究了不同控释肥用量对水稻干物质积累及产量的影响。试验结果表明,随着控释肥用量的增加,水稻抽穗后干物质积累量和产量先增加后降低;参试籼稻在控释肥用量为600 kg/hm2时获得最高产,为12.20 t/hm2,比不施肥处理增产5.89 t/hm2,... 本文研究了不同控释肥用量对水稻干物质积累及产量的影响。试验结果表明,随着控释肥用量的增加,水稻抽穗后干物质积累量和产量先增加后降低;参试籼稻在控释肥用量为600 kg/hm2时获得最高产,为12.20 t/hm2,比不施肥处理增产5.89 t/hm2,差异显著,其抽穗后干物质最大积累量为595.36 g/m2,肥料最大贡献率为48.23%;参试粳稻在控释肥施用量为750 kg/hm2时获得最高产,为9.33 t/hm2,比不施肥处理增产2.33 t/hm2,差异显著,其抽穗后干物质最大积累量为566.62 g/m2,肥料最大贡献率为25.00%;籼稻控释肥用量超过600 kg/hm2,粳稻控释肥用量超过750 kg/hm2,均不利于其后期干物质的积累和产量的提高。 展开更多

关键词 控释肥 施肥量 干物质 产量 水稻

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表达非洲猪瘟病毒p54蛋白重组伪狂犬病病毒的构建及鉴定 被引量：1

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作者 何兴林 邹忠 +5 位作者 龚文孝 张宇飞 李成飞 徐婷 陈焕春 金梅林 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第11期4182-4191,共10页

试验旨在构建能高效表达非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)p54蛋白的重组伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)。通过无缝克隆构建含有PRV TK基因同源臂和绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的PRV通用转移载体pCAGIG-TK_((l+r)),参... 试验旨在构建能高效表达非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)p54蛋白的重组伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)。通过无缝克隆构建含有PRV TK基因同源臂和绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的PRV通用转移载体pCAGIG-TK_((l+r)),参考China/2018/AnhuiXCGQ株基因序列,优化合成E183L基因,并连入通用转移载体,构建重组中间转移质粒pCAGIG-TK_((l+r))-p54;重组质粒ScaⅠ酶切线性化后经脂质体介导转染BHK-21细胞,6 h后感染0.1个感染复数(MOI)PRV变异株,出现病变后通过空斑挑选和PCR鉴定纯化重组PRV,进一步通过Western blotting和间接免疫荧光试验(IFA)检测外源蛋白表达,并对重组病毒的遗传稳定性和增殖特性进行研究。结果显示,转染重组质粒pCAGIG-TK_((l+r))-p54的BHK-21细胞24 h后可观察到绿色荧光,说明重组质粒成功转入BHK-21细胞;纯化后的重组病毒表达绿色荧光蛋白且含有ASFV E183L基因,Western blotting和IFA结果证实重组PRV在BHK-21细胞中能表达p54外源蛋白,在26 ku处呈现特异性条带,且能与ASFV阳性血清发生特异性反应,免疫原性较好;重组病毒在BHK-21细胞上连续传代20次均能检测到ASFV E183L基因,遗传稳定性较好;一步生长曲线显示,重组病毒与亲本病毒的增殖特性差异不大,且二者的最高病毒滴度分别为10^(7.34)/0.1 mL和10^(7.61)/0.1 mL,外源片段的插入不影响重组病毒在细胞上的增殖能力。本研究成功获得了表达ASFV p54蛋白的重组病毒rPRV-p54,为进一步研究p54蛋白的免疫原性及开发非洲猪瘟多基因重组PRV载体疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒(ASFV) 伪狂犬病病毒(PRV) p54蛋白

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杂交水稻农艺性状的配合力研究概况 被引量：2

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作者 李贵勇 杨从党 +5 位作者 袁平荣 卢义宣 李本逊 邱崇力 何兴林 邓安凤 《云南农业科技》 2009年第B11期38-40,共3页

关于杂交水稻农艺性状配合力的问题,许多水稻育种工作者做了大量的研究工作,但可能是由于所用的试验材料或试验方法不同,导致有些研究结果不太一致。通过论述不同学者的研究结果,以向读者提供一些关于杂交水稻农艺性状的配合力研究现状... 关于杂交水稻农艺性状配合力的问题,许多水稻育种工作者做了大量的研究工作,但可能是由于所用的试验材料或试验方法不同,导致有些研究结果不太一致。通过论述不同学者的研究结果,以向读者提供一些关于杂交水稻农艺性状的配合力研究现状以及一般配合力与特殊配合力之间的关系等信息,以便人们对水稻配合力有进一步的研究。 展开更多

关键词 杂交水稻 农艺性状 配合力 研究概况

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滇中地区春季青花菜引种观察试验初报 被引量：2

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作者 龚亚菊 钟利 +3 位作者 黄文静 黎志彬 鲍锐 何兴林 《长江蔬菜》 2010年第6期41-44,共4页

2007年春引进40个青花菜品种,在昆明市海拔1920m的试验地安排青花菜引种观察试验,试验结果表明,玉皇、优秀、捷保鲜2号、佳绿、艾伦特产量较高,抗病性较好,蕾粒表现中或细,商品性状优良,综合表现较好,适宜在滇中地区种植,可进一步参加... 2007年春引进40个青花菜品种,在昆明市海拔1920m的试验地安排青花菜引种观察试验,试验结果表明,玉皇、优秀、捷保鲜2号、佳绿、艾伦特产量较高,抗病性较好,蕾粒表现中或细,商品性状优良,综合表现较好,适宜在滇中地区种植,可进一步参加翌年的品种比较试验。 展开更多

关键词 青花菜 引种观察试验 滇中地区 品种

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云南省水稻超高产育种研究进展及展望 被引量：1

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作者 邓安凤 胡廷菊 +3 位作者 何兴林 杨从党 李贵勇 夏琼梅 《云南农业科技》 2009年第B11期19-22,共4页

回顾了水稻超高产育种发展历程,从水稻新株型育种理论、理想株型与杂种优势利用相结合、籼粳亚种间杂交、借助分子技术选育超高产组合4个方面总结了目前水稻超高产育种取得的研究进展,并针对当前云南省水稻超高产育种存在的一些问题,提... 回顾了水稻超高产育种发展历程,从水稻新株型育种理论、理想株型与杂种优势利用相结合、籼粳亚种间杂交、借助分子技术选育超高产组合4个方面总结了目前水稻超高产育种取得的研究进展,并针对当前云南省水稻超高产育种存在的一些问题,提出水稻超高产育种研究的总体设想。 展开更多

关键词 水稻 超高产育种 理想株型 杂种优势利用

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南充及广安地区急性自发性脑出血患者生存分析 被引量：5

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作者 官念 刘万平 +6 位作者 彭张辉 何兴林 陈捷 邓虹 刘君 吴碧华 熊鸿榆 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2018年第10期1069-1073,共5页

目的探讨南充及广安地区急性自发性脑出血患者的生存状况。方法选择2010年1月~2013年12月在南充及广安地区5所医院住院的急性自发性脑出血患者1468例,根据年龄分为青年组141例(<45岁),中年组401例(45~59岁),老年组926例(≥60岁)。收... 目的探讨南充及广安地区急性自发性脑出血患者的生存状况。方法选择2010年1月~2013年12月在南充及广安地区5所医院住院的急性自发性脑出血患者1468例,根据年龄分为青年组141例(<45岁),中年组401例(45~59岁),老年组926例(≥60岁)。收集患者住院期间一般情况、入院时美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分及格拉斯哥昏迷量表(GCS)评分、影像学检查、实验室检查、治疗并发症等,并进行3年随访,对脑出血后1、3、6个月,1、2、3年的生存状况进行随访。采用寿命表法描述生存过程,Cox比例风险模型分析影响患者生存时间的因素。结果脑出血患者发病后1、3、6个月,1、2、3年生存率分别为69%、68%、67%、65%、62%、60%。青年组发病后1、3、6个月,1、2、3年生存率分别为77%、77%、76%、73%、72%、71%,中年组生存率分别为76%、75%、74%、72%、72%、71%,老年组生存率分别为65%、64%、62%、60%、57%、54%。老年组发病后1、3、6个月,1、2、3年生存率较青年组及中年组明显降低(P<0.01)。Cox模型多因素分析显示,入院时影响生存时间的因素包括年龄、血糖、经济状况、收缩压、GCS评分、NIHSS评分;住院期间影响生存时间的因素包括颅内高压/脑疝及呼吸道感染;出院后影响生存时间的因素包括:血压控制、脑出血复发。结论老年脑出血患者死亡风险高。 展开更多

关键词 脑出血 格拉斯哥昏迷量表 颅内高压 脑疝

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外销型茄子品种比较试验 被引量：2

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作者 黄文静 龚亚菊 +2 位作者 黎志彬 鲍锐 何兴林 《长江蔬菜》 2009年第07X期48-49,共2页

通过对7个茄子品种的比较试验,结果表明,乐满田二号、华育二号、庆丰茄品种表现出单果质量较大、肉质紧密、综合商品性状较好、产量高、采收期较长、后期果不易变形、抗挤压和耐储运等特点。可作为外销蔬菜出口基地的主栽品种,但需进一... 通过对7个茄子品种的比较试验,结果表明,乐满田二号、华育二号、庆丰茄品种表现出单果质量较大、肉质紧密、综合商品性状较好、产量高、采收期较长、后期果不易变形、抗挤压和耐储运等特点。可作为外销蔬菜出口基地的主栽品种,但需进一步试种,以保证其可靠性。 展开更多

关键词 茄子 丰产性 商品性

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福州2021年6月29日大暴雨天气过程特征分析 被引量：1

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作者 谢建芳 何兴林 林森鸿 《农业灾害研究》 2021年第8期14-16,共3页

本文利用常规观测资料、EC细网格资料、风廓线资料、福州探空资料,分析2021年6月29日发生在福州地区一次大暴雨天气过程,寻找强对流天气发生机理,为以后出现类似的强对流天气预报提供依据,提高气象部门的气象服务水平。

关键词 强降水 对流 分析

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DZZ5电源故障排查分析

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作者 谢建芳 何兴林 《农村实用技术》 2019年第4期42-42,共1页

本文主要针对DZZ5新型自动气象站供电系统日常工作中出现的故障,逐级解析了供电系统故障的原因,详细说明了故障的排查和修复步骤,进一步探讨了新型自动气象站供电系统的故障判断方法和维修技术,为确保新型自动气象站的连续运行提供保障。

关键词 DZZ5 供电系统 故障解析

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