布鲁氏菌病的研究与防控进展 被引量：94

1

作者 任洪林 卢士英 +2 位作者 周玉 李兆辉 柳增善 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第9期139-143,共5页

布鲁氏菌病(Brucellosis,简称"布病")是由布鲁氏菌(Brucella)引起的危害严重的人畜共患病,主要危害人畜生殖系统,人与人之间几乎不传播,患病动物是主要的传染源,近几年疫情急骤回升。作者综述了布病的研究现状及其流行趋势,... 布鲁氏菌病(Brucellosis,简称"布病")是由布鲁氏菌(Brucella)引起的危害严重的人畜共患病,主要危害人畜生殖系统,人与人之间几乎不传播,患病动物是主要的传染源,近几年疫情急骤回升。作者综述了布病的研究现状及其流行趋势,初步探讨布病综合防控面临的主要困境。 展开更多

关键词 布鲁氏菌病 生物学特性 疫苗与诊断 分子生物学 预防与控制

在线阅读 下载PDF 职称材料

消除电网工频信号干扰的陷波电路设计 被引量：10

2

作者 任洪林 陈玥名 《佳木斯大学学报（自然科学版）》 CAS 2007年第1期5-6,13,共3页

工频干扰存在于各种数据采集系统中，直接影响被测信号的测量精度．针对电网频率波动的实际情况，基于双T型阻容有源陷波电路，设计了可以滤除频带在49．5～50．5也之间工频干扰的陷波电路．详细地分析了所设计陷波电路的陷波深度与被... 工频干扰存在于各种数据采集系统中，直接影响被测信号的测量精度．针对电网频率波动的实际情况，基于双T型阻容有源陷波电路，设计了可以滤除频带在49．5～50．5也之间工频干扰的陷波电路．详细地分析了所设计陷波电路的陷波深度与被测信号失真的关系，并给出了其幅相特性．提出的陷波电路信噪比可达60dB以上．通过仿真试验验证了设计的陷波电路具有较好的滤波效果． 展开更多

关键词 信号采集 工频干扰 陷波电路

在线阅读 下载PDF 职称材料

分裂法在分析电路动态过程中的应用 被引量：2

3

作者 任洪林 陈学允 《电子学报》 EI CAS CSCD 北大核心 1999年第10期122-123,共2页

本文研究了动态电路的分块算法，把复杂动态电路分割成若干个线性子电路和联络支路（ 线性和非线性）．根据在任意长时间内子电路的自由动态过程，求解原电路的实际动态过程．建立了线性子电路的等效动态模型及其近似等效模型．

关键词 动态电路 分裂法 等效动态模型

在线阅读 下载PDF 职称材料

分裂法与FFT技术相结合的电路动态分析

4

作者 任洪林 陈学允 侯文斌 《电子与信息学报》 EI CSCD 北大核心 2001年第2期187-191,共5页

提出了分裂法与FFT技术相结合的动态电路分析法。把复杂动态电路分割成若干个线性子电路和一组联络支路(线性和非线性)。在任意长时间间隔内,用多端动态电源等效替代线性子电路。在互联电路的计算中,应用了FFT技术,该方法可降低分析复... 提出了分裂法与FFT技术相结合的动态电路分析法。把复杂动态电路分割成若干个线性子电路和一组联络支路(线性和非线性)。在任意长时间间隔内,用多端动态电源等效替代线性子电路。在互联电路的计算中,应用了FFT技术,该方法可降低分析复杂电路的难度,提高计算效率。 展开更多

关键词 动态电路 分裂法 FFT技术 动态分析

在线阅读 下载PDF 职称材料

分裂法在求解非线性动态电路中的应用

5

作者 任洪林 陈学允 《哈尔滨工业大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 1999年第6期83-86,共4页

研究了非线性动态电路的分块算法． 把非线性动态电路分割成若干个线性子电路和一组含有非线性元件的联络支路． 在任意长时间间隔内，用多端动态电源等效替代线性子电路． 在每一次积分步长的计算中，只需确定联络支路的状态值． 为分... 研究了非线性动态电路的分块算法． 把非线性动态电路分割成若干个线性子电路和一组含有非线性元件的联络支路． 在任意长时间间隔内，用多端动态电源等效替代线性子电路． 在每一次积分步长的计算中，只需确定联络支路的状态值． 为分析含有大量线性元件的非线性电路提供了有效方法． 展开更多

关键词 非线性动态电路 分裂法 多端动态电源 数值法

在线阅读 下载PDF 职称材料

镉、汞、铅污染及其微生物修复研究进展 被引量：29

6

作者 李兆辉 王光明 +2 位作者 徐云明 柳增善 任洪林 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第9期39-43,共5页

随着人类活动的增强,重金属的应用越来越广,同时造成的环境污染问题愈发严重,特别是重金属镉、汞、铅。利用微生物技术修复环境污染中的重金属,以其成本低、效率高等特点,已经成为环境污染修复领域的研究热点。作者综述镉、汞、铅污染... 随着人类活动的增强,重金属的应用越来越广,同时造成的环境污染问题愈发严重,特别是重金属镉、汞、铅。利用微生物技术修复环境污染中的重金属,以其成本低、效率高等特点,已经成为环境污染修复领域的研究热点。作者综述镉、汞、铅污染及其微生物修复的研究进展,并提出利用微生物细胞表面展示技术构建高效吸附重金属的基因工程菌,在微生物修复方面应用的重要价值。 展开更多

关键词 镉 汞 铅 污染 微生物修复 细胞表面展示

在线阅读 下载PDF 职称材料

复合型果蔬粉的研制 被引量：10

7

作者 柳增善 潘风光 +1 位作者 任洪林 陈琦昌 《食品研究与开发》 CAS 2003年第4期62-63,共2页

本文以番茄、胡萝卜、大头莱、苹果为原料,辅以环状糊精,采用先进的固体饮料加工工艺,制成营养和风味俱佳的速溶固体饮料粉。

关键词 番茹 胡萝卜 大头菜 苹果 环状糊精 复合型果蔬粉 研制 速溶固体饮料粉 加工工艺

在线阅读 下载PDF 职称材料

灭菌乳中活阪崎肠杆菌PMA-PCR检测方法的建立 被引量：12

8

作者 刘艳艳 柳增善 +6 位作者 卢士英 任洪林 盖冬雪 崔成 丁艳霞 孟宪梅 于师宇 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第2期65-69,共5页

本试验旨在建立灭菌乳中活阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii)的PMA-PCR检测方法。将DNA染料叠氮溴化丙锭(propidium monoazide,PMA)与聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术结合,优化PMA最佳工作浓度和曝光时间,确定PMA-... 本试验旨在建立灭菌乳中活阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii)的PMA-PCR检测方法。将DNA染料叠氮溴化丙锭(propidium monoazide,PMA)与聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术结合,优化PMA最佳工作浓度和曝光时间,确定PMA-PCR区别死、活阪崎肠杆菌细胞的最佳条件。结果表明,活阪崎肠杆菌经100℃沸水处理20min可完全致死,PMA完全与死阪崎肠杆菌DNA共价交联并光解溶液中游离PMA的最佳曝光时间为15min,完全抑制死阪崎肠杆菌PCR扩增的最小PMA浓度为5μg/mL,不抑制活阪崎肠杆菌PCR扩增的最大PMA浓度为15μg/mL。经PMA处理后,在含有不同比例的死、活阪崎肠杆菌混合液中检测到活阪崎肠杆菌的最低检测限为40CFU/mL,在灭菌乳样品中检测到活阪崎肠杆菌的最低检测限为100CFU/mL。该方法为利用PMA-PCR检测食品中的活阪崎肠杆菌奠定了基础。 展开更多

关键词 PMA PCR 阪崎肠杆菌 灭菌乳

在线阅读 下载PDF 职称材料

海产品贝毒素大田软海绵酸ELISA及HPLC-MS/MS检测方法的研究 被引量：5

9

作者 卢士英 柳增善 +5 位作者 周玉 李岩松 张代辉 于光 于师宇 任洪林 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第8期158-162,共5页

为了检测海产品贝毒大田软海绵酸,保障其食用安全,利用活泼酯法将小分子OA与载体蛋白偶联,免疫BALB/c小鼠,细胞融合技术建立分泌抗OA的杂交瘤细胞株,并对其各种特性进行分析;小鼠腹水法大量生产抗体,纯化后建立ELISA方法,同时建立OA的... 为了检测海产品贝毒大田软海绵酸,保障其食用安全,利用活泼酯法将小分子OA与载体蛋白偶联,免疫BALB/c小鼠,细胞融合技术建立分泌抗OA的杂交瘤细胞株,并对其各种特性进行分析;小鼠腹水法大量生产抗体,纯化后建立ELISA方法,同时建立OA的高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS)检测法,并对部分市售海产品进行了实际检测,ELISA方法标准曲线为y=-34.212x+83.49,相关系数为0.9784,线性范围0.4～25μg/L,灵敏度0.18μg/L;HPLC-MS/MS检测方法标准曲线y=193.07x-780.6(Q1/Q3:m/z827.4～m/z723.5)和y=83.021x-335.6(Q1/Q3:m/z827.4～m/z809.5),R2均为0.9991,线性范围10～800μg/L,灵敏度小于2μg/L,平均RSD为4.34%。在检测的实际样品中两种样品ELISA呈阳性反应,其中一种经过了HPLC-MS/MS的验证。所建立的ELISA及HPLC-MS检测方法均可用于海产品腹泻性贝毒OA限量标准检测,为进出口海产品OA标准方法的建立提供实验基础。 展开更多

关键词 大田软海绵酸 ELISA HPLC-MS/MS 海产品

在线阅读 下载PDF 职称材料

小尾寒羊溶菌酶基因的克隆与差异表达分析 被引量：4

10

作者 李闯 徐云明 +9 位作者 唐峰 邹德颖 刘楠楠 郭兴 杨咏洁 周玉 柳增善 卢士英 鲁承 任洪林 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第3期19-22,共4页

本试验从猪种布鲁氏菌S2疫苗株免疫雄性小尾寒羊构建的白细胞层SSH cDNA文库中筛选1段cDNA序列,经测序和BLAST同源性搜索比对发现其为溶菌酶重组片段,该片段大小为770bp,编码148个氨基酸残基,编码的蛋白质是一种天然抗感染物质,已提交Ge... 本试验从猪种布鲁氏菌S2疫苗株免疫雄性小尾寒羊构建的白细胞层SSH cDNA文库中筛选1段cDNA序列,经测序和BLAST同源性搜索比对发现其为溶菌酶重组片段,该片段大小为770bp,编码148个氨基酸残基,编码的蛋白质是一种天然抗感染物质,已提交GenBank,登录号为JX263305。经荧光定量PCR分析,与正常组羊相比,在S2免疫14和30d的羊白细胞层中该溶菌酶基因表达轻微上调,但差异不显著(P>0.05);在免疫40d时恢复到正常水平。这也进一步说明溶菌酶是一种存在机体内必不可少的天然免疫因子,为布鲁氏菌病有效防控方面的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 白细胞层 布鲁氏菌 溶菌酶 差异表达分析 荧光定量PCR

在线阅读 下载PDF 职称材料

猪繁殖与呼吸综合征病毒流行株Nsp2基因的克隆及序列分析 被引量：6

11

作者 闫东明 卢士英 +6 位作者 任洪林 周玉 宫彬彬 郑鑫 杜运升 王光明 柳增善 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第9期48-52,共5页

采用RT-PCR方法,从吉林省部分地区猪场的病料中扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的Nsp2基因并测序。应用DNAStar 7.0、ClustalX1.83、MEGA4.0软件对测序结果进行分析,并与NCBI上已登录的PRRSV代表毒株的Nsp2基因进行序列比对,结果显示... 采用RT-PCR方法,从吉林省部分地区猪场的病料中扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的Nsp2基因并测序。应用DNAStar 7.0、ClustalX1.83、MEGA4.0软件对测序结果进行分析,并与NCBI上已登录的PRRSV代表毒株的Nsp2基因进行序列比对,结果显示,得到的Nsp2基因与VR-2332、CH-1a等代表毒株的一致性为62.0%～87.5%,与国内高致病性PRRSV毒株JXA1、HUB2等的一致性为97.8%～98.9%;氨基酸序列比对结果显示与VR-2332、CH-1a等代表毒株的一致性为34.4%～59.0%,与国内高致病性PRRSV毒株JXA1、HUB2等的一致性为95.1%～98.4%。因此,引起吉林省部分地区猪场发生猪繁殖与呼吸综合征的PRRSV与国内流行的高致病性PRRSV毒株亲缘关系较近。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 NSP2基因 序列分析

在线阅读 下载PDF 职称材料

石房蛤毒素单克隆抗体的制备及其特性研究 被引量：4

12

作者 闫东明 于师宇 +5 位作者 任洪林 周玉 孟宪梅 林超 柳增善 卢士英 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第3期73-76,共4页

将石房蛤毒素(Saxitoxin,STX)与牛血清白蛋白(BSA)偶联构建完全抗原STX-BSA,免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术获得1株稳定分泌抗STX单克隆抗体的杂交瘤细胞株,单抗亚类为IgM。体内诱生法收集腹水单抗,间接ELISA方法测定抗体效价为1∶1024... 将石房蛤毒素(Saxitoxin,STX)与牛血清白蛋白(BSA)偶联构建完全抗原STX-BSA,免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术获得1株稳定分泌抗STX单克隆抗体的杂交瘤细胞株,单抗亚类为IgM。体内诱生法收集腹水单抗,间接ELISA方法测定抗体效价为1∶102400,抗体亲和常数为3.71×106L/mol。 展开更多

关键词 石房蛤毒素 抗原偶联 单克隆抗体 亲和常数

在线阅读 下载PDF 职称材料

花鲈肝脏hepcidin相关cDNA Hepc2的克隆及序列分析 被引量：3

13

作者 陈君慧 王克坚 +2 位作者 周红玲 任洪林 杨明 《中国生态农业学报》 CAS CSCD 2007年第3期129-132,共4页

Hepcidin(Hepc)是一类性质独特的抗菌肽,具有广谱的抗革兰氏阳性、阴性细菌和真菌等作用。利用RT-PCR和RACE等技术,从经过多种细菌攻毒的花鲈(Lateolabrax japonicus)肝组织中克隆出Hepc全长cDNA,命名为Hepc2,Genbank登录号为AY604195。... Hepcidin(Hepc)是一类性质独特的抗菌肽,具有广谱的抗革兰氏阳性、阴性细菌和真菌等作用。利用RT-PCR和RACE等技术,从经过多种细菌攻毒的花鲈(Lateolabrax japonicus)肝组织中克隆出Hepc全长cDNA,命名为Hepc2,Genbank登录号为AY604195。Hepc2有581个碱基,其中阅读框有258个碱基,编码86个氨基酸。预测氨基酸序列和白鲈及其他鱼种在相同保守的区域有8个半胱氨酸,相对分子量为9418.55dal。在3’非编码区有225bp,包含终止密码子下游189nt处的多腺苷酸化AATAAA信号和212nt处的polyA信号。预测蛋白的信号肽断裂位点在第24和第25个密码子之间。通过与白鲈(Morone chrysops)、人和其他鱼种来源的Hepc cDNA和蛋白质同源性分析表明,从花鲈肝中分离的Hepc2 cDNA属于Hepc基因家族的新成员。 展开更多

关键词 花鲈 HEPCIDIN 抗菌肽 基因克隆 序列分析

在线阅读 下载PDF 职称材料

乳品中热带假丝酵母菌的双抗夹心ELISA快速检测方法 被引量：2

14

作者 常江 刘熙 +8 位作者 柳增善 任洪林 卢士英 胡盼 李岩松 盖冬雪 金雯 张嵩 孟宪梅 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2016年第24期63-68,共6页

本研究用于乳品中热带假丝酵母菌的快速检测。采用热带假丝酵母菌超声破碎后的上清蛋白作为免疫原分别免疫新西兰大耳白兔和Hartley豚鼠,获得热带假丝酵母菌的多克隆抗体。以兔抗体作为捕获抗体,豚鼠抗体作为检测抗体,通过矩阵法及正交... 本研究用于乳品中热带假丝酵母菌的快速检测。采用热带假丝酵母菌超声破碎后的上清蛋白作为免疫原分别免疫新西兰大耳白兔和Hartley豚鼠,获得热带假丝酵母菌的多克隆抗体。以兔抗体作为捕获抗体,豚鼠抗体作为检测抗体,通过矩阵法及正交分析建立乳品中热带假丝酵母菌快速、特异的双抗夹心ELISA检测方法。该方法检出限为98 ng/m L,板内变异系数小于2%,板间变异系数小于6%,特异性及重复性良好。实际样品检测中,通过对乳制品进行滤膜集菌并选择性增菌培养,超声后提取的蛋白上清应用本研究建立的双抗夹心ELISA检测方法,100 CFU/m L热带假丝酵母菌可在22 h内准确检测出阳性反应。 展开更多

关键词 乳品 热带假丝酵母菌 双抗夹心ELISA 快速检测 选择性增菌 滤膜集菌

在线阅读 下载PDF 职称材料

鲜乳中常见污染细菌的分离与鉴定 被引量：2

15

作者 刘艳艳 卢士英 +5 位作者 任洪林 崔成 盖冬雪 丁燕霞 柳增善 孟宪梅 《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2014年第6期16-18,33,共4页

对吉林省污染鲜乳的细菌进行分离鉴定,以分析本地区鲜乳污染情况,为建立针对性检测鲜乳中的污染细菌提供参考。采集吉林省部分地区奶牛养殖场及农户散养奶牛自产鲜乳,采用常规培养方法进行分离培养。用聚合酶链式反应(PCR)扩增细菌16S r... 对吉林省污染鲜乳的细菌进行分离鉴定,以分析本地区鲜乳污染情况,为建立针对性检测鲜乳中的污染细菌提供参考。采集吉林省部分地区奶牛养殖场及农户散养奶牛自产鲜乳,采用常规培养方法进行分离培养。用聚合酶链式反应(PCR)扩增细菌16S rDNA,对PCR产物测序、分析,与Genbank上已知的细菌16S rDNA序列对比同源性,交叉同源性较高的细菌进行生化实验加以补充鉴定。结果表明,分离并鉴定出吉林省污染鲜乳的常见细菌,为鲜乳在生产加工过程中有针对性的检测特异性细菌奠定了基础。 展开更多

关键词 鲜乳 分离鉴定 常规培养 16S RDNA 聚合酶链式反应

在线阅读 下载PDF 职称材料

肺炎克雷伯菌环介导等温扩增技术检测方法的建立 被引量：5

16

作者 徐云明 魏利斌 +7 位作者 周弇扬 李叶辉 孙智远 仲思远 陈爱宁 郭丽娟 柳增善 任洪林 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第11期3003-3010,共8页

本研究旨在建立一种环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测食品中的肺炎克雷伯菌。选取肺炎克雷伯菌特有的毒力基因区域,设计2对引物(1对内引物、1对外引物),进行体外恒温扩增反应。对反应体系内的甜菜... 本研究旨在建立一种环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测食品中的肺炎克雷伯菌。选取肺炎克雷伯菌特有的毒力基因区域,设计2对引物(1对内引物、1对外引物),进行体外恒温扩增反应。对反应体系内的甜菜碱、核酸原料(dNTPs)、内外引物比例、Mg^(2+)浓度、反应时间和温度进行优化和选择,并进行特异性和灵敏性试验检测。应用建立的LAMP方法对灭菌鸡肉人工污染加标样品进行检测。结果表明,通过优化试验,筛选到最优反应体系和反应条件;应用优化后的LAMP反应体系对包括肺炎克雷伯菌在内的18种常见微生物进行特异性检测试验,特异性良好。肺炎克雷伯菌LAMP反应体系对基因组的最低检测限是0.875pg/μL,比传统PCR方法灵敏性高100倍。对人工鸡肉阳性样品进行检测,检测限为30CFU/mL。本试验成功建立了一种能检测食物中致病肺炎克雷伯菌的LAMP检测方法,该方法利用2对引物针对肺炎克雷伯菌目的基因6个区域进行体外恒温核酸阶梯性扩增,灵敏性更高,反应时间更短,检测成本更低。 展开更多

关键词 肺炎克雷伯菌 环介导等温扩增(LAMP) 检测

在线阅读 下载PDF 职称材料

拟态弧菌OmpK基因的克隆及原核表达 被引量：1

17

作者 李研东 李菲 +5 位作者 卢士英 任洪林 周玉 朱元银 宫彬彬 柳增善 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第6期52-55,共4页

克隆拟态弧菌(Vibrio mimicus)OmpK(outer membrane protein K)基因并进行相关序列的分析。根据已发表的拟态弧菌OmpK基因序列设计合成引物,以拟态弧菌CGMCC 1.1969标准株的基因组DNA为模板进行PCR扩增,获得801bp片段并测序,序列已提交... 克隆拟态弧菌(Vibrio mimicus)OmpK(outer membrane protein K)基因并进行相关序列的分析。根据已发表的拟态弧菌OmpK基因序列设计合成引物,以拟态弧菌CGMCC 1.1969标准株的基因组DNA为模板进行PCR扩增,获得801bp片段并测序,序列已提交至GenBank(GenBank登录号为FJ462707)。拟态弧菌OmpK序列比对结果显示,溶藻弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌、河弧菌OmpK基因序列的同源性均大于78%。该基因编码1个含267个氨基酸残基的蛋白质,预测分子质量为29.6 ku。利用基因工程方法将该基因片段定向克隆至表达载体中,并在大肠杆菌中获得高效表达,表达后的OmpK蛋白分子质量约为28 ku。 展开更多

关键词 拟态弧菌 OmpK基因 克隆 表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

最小方差无偏估计方法提高Gm-APD啁啾调制光子雷达的测距精度

18

作者 张子静 任洪林 +2 位作者 吴龙 张宇 赵远 《红外与激光工程》 EI CSCD 北大核心 2011年第6期1125-1128,共4页

啁啾调制光子雷达由于探测器Gm-APD的死时间限制了采样频率和调制带宽的提高,FFT进行信号处理时存在着固有的频域采样间隔,使得测距精度的提高受到很大限制。按照啁啾光子雷达接收机的信号处理过程对回波信号进行了推导,获得了系统回波... 啁啾调制光子雷达由于探测器Gm-APD的死时间限制了采样频率和调制带宽的提高,FFT进行信号处理时存在着固有的频域采样间隔,使得测距精度的提高受到很大限制。按照啁啾光子雷达接收机的信号处理过程对回波信号进行了推导,获得了系统回波中频信号的解析表达式,并采用最小方差无偏估计的方法对中频频谱进行处理,最后对该方法进行了仿真,并用仿真结果与质心估计中频后处理方法的仿真结果进行了比较。最大测距误差可由4.3 m降低到0.4 m,表明最小方差无偏估计的中频处理方法可以有效提高Gm-APD啁啾光子雷达的测距精度。 展开更多

关键词 测距精度 Gm-APD 最小方差无偏估计法 啁啾调制

在线阅读 下载PDF 职称材料

肠炎沙门菌avrA蛋白的原核表达及其生物信息学分析

19

作者 徐云明 卜永谦 +5 位作者 卞蓉蓉 杨剑波 孙智远 陈益 柳增善 任洪林 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第11期4168-4177,共10页

【目的】表达具有生物学活性的肠炎沙门菌(Salmonella Enteritidis)avrA蛋白,并对其进行生物信息学分析,为研究肠炎沙门菌avrA蛋白对猪肠道细胞免疫功能的影响提供参考。【方法】根据GenBank中肠炎沙门菌avrA蛋白全基因序列(基因ID:1254... 【目的】表达具有生物学活性的肠炎沙门菌(Salmonella Enteritidis)avrA蛋白,并对其进行生物信息学分析,为研究肠炎沙门菌avrA蛋白对猪肠道细胞免疫功能的影响提供参考。【方法】根据GenBank中肠炎沙门菌avrA蛋白全基因序列(基因ID:1254388)设计引物扩增avrA基因,回收的目的片段与表达载体pGEX-4T-1进行重组、克隆,用限制性内切酶和基因测序验证重组表达质粒的正确性。将验证后的重组表达质粒转化大肠杆菌Rosetta 2(DE3)感受态细胞,并在不同条件下对重组表达菌进行诱导表达。应用SDS-PAGE和Western blotting检测avrA蛋白的表达情况。将酶切测序后目的基因序列进行BLAST比对分析,并用ExPASy-Translate Tool软件预测avrA蛋白的氨基酸组成。应用生物信息学软件预测avrA蛋白的跨膜结构域、二级结构、三级结构及抗原性。【结果】肠炎沙门菌avrA基因CDS序列全长为909 bp,编码302个氨基酸。限制性内切酶及基因测序分析结果表明,重组表达质粒pGEX-4T-1-avrA构建成功。SDS-PAGE和Western-blotting结果表明,重组菌所表达的avrA蛋白为可溶性蛋白。重组菌在15℃诱导16 h表达的蛋白量为10 mg/L,蛋白溶解度为40%。生物信息学分析表明,avrA蛋白为膜外蛋白,该蛋白的16―301位氨基酸具有来自超家族YopJ丝氨酸/苏氨酸乙酰转移酶的保守结构域;avrA蛋白二级结构中无规则卷曲、α-螺旋、延伸链分别占43.71%、39.40%和16.89%;avrA蛋白三级结构预测结果与二级结构一致;avrA蛋白有9个与B细胞结合的抗原表位,分别在第5―40、51―68、80―92、94、101―109、146―157、160―168、199―231和236―298位氨基酸处。【结论】试验成功克隆出肠炎沙门菌avrA基因,并成功构建重组表达质粒和表达菌,诱导表达的avrA蛋白为可溶性表达;avrA蛋白为膜外蛋白,有9个能与B细胞结合的抗原表位。本研究结果为进一步制备检测肠炎沙门菌感染的抗体提供参考。 展开更多

关键词 肠炎沙门菌 avrA蛋白 原核表达 生物信息学分析

在线阅读 下载PDF 职称材料

乳品中大肠杆菌PMA-qPCR活菌检测方法的建立 被引量：7

20

作者 盖冬雪 任洪林 +9 位作者 卢士英 胡盼 孟宪梅 刘熙 宋德刚 金雯 张嵩 常江 刘艳艳 柳增善 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第2期493-498,共6页

本试验旨在建立一种乳品中大肠杆菌PMA-qPCR活菌检测方法。优化qPCR检测方法,探究菌浓度为1×108 CFU/mL的大肠杆菌活菌悬液、热致死菌悬液细胞数来确定不同的PMA剂量、暗孵育时间、曝光时间对死菌抑制效果的影响,确定最佳PMA处理... 本试验旨在建立一种乳品中大肠杆菌PMA-qPCR活菌检测方法。优化qPCR检测方法,探究菌浓度为1×108 CFU/mL的大肠杆菌活菌悬液、热致死菌悬液细胞数来确定不同的PMA剂量、暗孵育时间、曝光时间对死菌抑制效果的影响,确定最佳PMA处理方案。结果表明,qPCR检测可特异性扩增大肠杆菌,1×108 CFU/mL的大肠杆菌经90℃水浴30s全部致死后,采用10μg/mL的PMA暗孵育15min后冰上曝光10min为最佳处理方案,这种处理方案可最大程度抑制死细胞信号,而对活细胞几乎没有影响,样品中微生物初始浓度不低于1×108 CFU/mL时较稳定,得到标准曲线回归方程y=-3.356x+47.413,R2=0.9989,最低检测限为103 CFU/mL,加标样本检测结果与实际相符。该方法为利用PMA-qPCR检测食品中的活大肠杆菌杆菌奠定了基础。 展开更多

关键词 大肠杆菌 叠氮溴化丙啶 qPCR 计数

在线阅读 下载PDF 职称材料