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蓖麻毒素A链蛋白的表达、活性及其对人肺腺癌细胞SPC的毒性作用 被引量：4
1
作者 乔生军 莫忠根 林琳 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2000年第1期27-30,共4页
目的 :研究构建重组单链免疫毒素 ,对人体肿瘤进行导向治疗。方法 :采用PCR方法从克隆化载体中拉出蓖麻毒素A链 (ricinA)基因 ,装入经过改建的pTSA 18F表达载体 ,进行目的基因DNA序列分析后导入E .coliBL2 1(DE3)中进行表达 ,表达产物进... 目的 :研究构建重组单链免疫毒素 ,对人体肿瘤进行导向治疗。方法 :采用PCR方法从克隆化载体中拉出蓖麻毒素A链 (ricinA)基因 ,装入经过改建的pTSA 18F表达载体 ,进行目的基因DNA序列分析后导入E .coliBL2 1(DE3)中进行表达 ,表达产物进行SDS PAGE和Westernblot检查 ,表达产物的生物活性通过RNAN 糖苷酶活性检查、无细胞体系中对蛋白质生物合成的抑制以及对肿瘤细胞的毒性作用来分析。结果 :SDS PAGE检查表明 ,转化子E .coliBL2 1(DE3) (pTSRA)中出现 1条Mr约 30× 10 3 大小、较空载体对照E .coliBL2 1(DE3) (pTS)明显浓黑的条带 ;Westernblot检查表明 ,转化子E .coliBL2 1(DE3) (pTSRA)中有杂交条带出现 ,而E .coliBL2 1(DE3) (pTS)中没有 ;表达蓖麻毒素A链蛋白能够特异地作用于大鼠肝 2 8S核糖体RNA ,使其产生约 45 0nt大小的核酸片段 ;对无细胞体系中蛋白质生物合成的IC50 为 3 7× 10 -9mol/L ,略高于天然蓖麻毒蛋白 ;具有与天然蓖麻毒蛋白相近的肿瘤细胞毒性。结论 :蓖麻毒素A链基因在转化子E .coliBL2 1(DE3) (pTSRA)中获得表达 ,表达产物具有与天然蓖麻毒蛋白相近的RNAN 糖苷酶活性 ,在无细胞体系中对蛋白质生物合成具有抑制作用 。 展开更多
关键词 蓖麻毒素A链 肺腺癌 SPC 基因表达
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