甲酸脱氢酶基因在大肠杆菌Rosetta中的高效表达 被引量：13

1

作者 徐娴 贾红华 +1 位作者 何冰芳 韦萍 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期5-8,共4页

甲酸脱氢酶是氧化还原酶辅酶NAD(P)^+和NAD(P)H再生循环体系中的关键酶。实验中,用PCR方法扩增了假丝酵母Candida boidinii中甲酸脱氢酶基因(fdh),分别构建了诱导型表达载体pUC-dh和pET- fdh,以E.coli Rosetta为表达宿主,获得了能够高... 甲酸脱氢酶是氧化还原酶辅酶NAD(P)^+和NAD(P)H再生循环体系中的关键酶。实验中,用PCR方法扩增了假丝酵母Candida boidinii中甲酸脱氢酶基因(fdh),分别构建了诱导型表达载体pUC-dh和pET- fdh,以E.coli Rosetta为表达宿主,获得了能够高效表达甲酸脱氢酶的重组菌。经诱导后重组菌Rosetta/pET- fdh的FDH比酶活为0.399U/mg(蛋白),Rosetta/pUC-fdh的FDH比酶活为0.163U/mg(蛋白)。经SDS- PAGE分析,Rosetta/pET-fdh和Rosetta/pUC-fdh表达的FDH蛋白分别占菌体可溶性总蛋白的17%和10%,实现了fdh基因在Rosetta中的高效表达。研究中所构建的重组菌为氧化还原反应中的辅酶再生奠定了良好的基础。 展开更多

关键词 辅酶再生 甲酸脱氢酶 甲酸脱氢酶基因 高效表达

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农杆菌介导的花生Δ^(12)脂肪酸脱氢酶基因AhFAD2 RNAi抑制表达遗传转化研究 被引量：10

2

作者 张小茜 单雷 +2 位作者 唐桂英 滕娜 毕玉平 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期409-415,419,共8页

以成熟花生种子萌动4d的上胚轴为受体材料,采用农杆菌介导的转化方法,将倒位重复Δ12脂肪酸脱氢酶基因AhFAD2片段分别与CaMV35S启动子和种子特异性表达的大豆凝集素启动子相连导入花生。经PCR检测证实含有AhFAD2倒位重复基因片段的RNAi... 以成熟花生种子萌动4d的上胚轴为受体材料,采用农杆菌介导的转化方法,将倒位重复Δ12脂肪酸脱氢酶基因AhFAD2片段分别与CaMV35S启动子和种子特异性表达的大豆凝集素启动子相连导入花生。经PCR检测证实含有AhFAD2倒位重复基因片段的RNAi抑制表达框架已成功转入花生。 展开更多

关键词 花生 农杆菌介导法 △^12脂肪酸脱氢酶基因 RNA干扰

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枯草芽孢杆菌葡萄糖脱氢酶基因的克隆及高效表达 被引量：12

3

作者 徐娴 谢承佳 何冰芳 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期75-78,共4页

扩增了枯草芽孢杆菌中的葡萄糖脱氢酶基因(gdh),构建了诱导型表达载体pET-gdh,导入E.coliBL21(DE3)后获得了高效表达葡萄糖脱氢酶基因的重组菌BL21/pET-gdh。经过诱导时间、诱导温度参数的优化,IPTG诱导后重组菌BL21/pET-gdh的葡萄糖脱... 扩增了枯草芽孢杆菌中的葡萄糖脱氢酶基因(gdh),构建了诱导型表达载体pET-gdh,导入E.coliBL21(DE3)后获得了高效表达葡萄糖脱氢酶基因的重组菌BL21/pET-gdh。经过诱导时间、诱导温度参数的优化,IPTG诱导后重组菌BL21/pET-gdh的葡萄糖脱氢酶比酶活高达9.65 U/mg蛋白,SDS-PAGE电泳分析表明,重组蛋白质表达量占全菌胞内可溶性蛋白的53%,实现了葡萄糖脱氢酶基因的高效表达,为氧化还原酶催化系统提供高效率的NADP+与NADPH循环奠定了基础。 展开更多

关键词 葡萄糖脱氢酶 葡萄糖脱氢酶基因 高效表达 辅酶再生

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转甜菜碱醛脱氢酶基因水稻的获得及其耐盐性研究 被引量：11

4

作者 卢德赵 王慧中 +3 位作者 华志华 颜美仙 钱前 黄大年 《科技通报》 北大核心 2003年第3期179-182,共4页

利用农杆菌介导法和基因枪法将来源于山菠菜的甜菜碱醛脱氢酶基因(BADH)转入水稻基因组,并获得了具有一定耐盐性状的转基因植株,在0.5%NaCl盐浓度下生长良好,同时对Kan和G418的筛选效果及两种转化方法进行了比较.

关键词 遗传学 甜菜碱醛脱氢酶基因 基因转化 耐盐性

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牛链球菌L-(+)-乳酸脱氢酶基因的克隆及在大肠杆菌中表达 被引量：4

5

作者 张黎 韦宇拓 +2 位作者 黄彦 杜丽琴 黄日波 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期24-28,共5页

利用PCR方法从牛链球菌(Streptococcus bovis)基因组DNA中扩增出了L(+)乳酸脱氢酶基因(ldh),并将其连接到表达载体pSE380上,得到重组质粒pSEldh,将重组质粒转化到大肠杆菌菌株JM109。利用SDS-PAGE分析ldh表达产物的分子量为36KD,重组菌... 利用PCR方法从牛链球菌(Streptococcus bovis)基因组DNA中扩增出了L(+)乳酸脱氢酶基因(ldh),并将其连接到表达载体pSE380上,得到重组质粒pSEldh,将重组质粒转化到大肠杆菌菌株JM109。利用SDS-PAGE分析ldh表达产物的分子量为36KD,重组菌株的乳酸脱氢酶酶活力为168.2U/mL,最适反应温度25℃,最适作用pH为5.0,重组质粒的稳定性达99.9%。 展开更多

关键词 L-乳酸 L-(+)-乳酸脱氢酶 克隆 表达 牛链球菌 L-(+)-乳酸 脱氢酶基因 大肠杆菌 链球菌 基因组DNA

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高山被孢霉Δ^6-脂肪酸脱氢酶基因转化大豆的研究 被引量：4

6

作者 王广科 李明春 +3 位作者 李晋川 潘渠 何思思 刑来君 《成都医学院学报》 CAS 2010年第2期93-96,共4页

目的从高山被孢霉中克隆的Δ6-脂肪酸脱氢酶基因与植物表达载体pBA121连接,构建重组质粒pBMACL6,采用农杆菌介导的大豆子叶节转化系统成功地将该基因导入到栽培大豆吉林47品种中,获得一批转基因植株。方法利用子叶节外植体诱导出丛生芽... 目的从高山被孢霉中克隆的Δ6-脂肪酸脱氢酶基因与植物表达载体pBA121连接,构建重组质粒pBMACL6,采用农杆菌介导的大豆子叶节转化系统成功地将该基因导入到栽培大豆吉林47品种中,获得一批转基因植株。方法利用子叶节外植体诱导出丛生芽和再生植株,利用卡那霉素的抗性筛选培养基连续筛选以及PCR方法、DNA分子杂交分析检测转基因植株中的Δ6-脂肪酸脱氢酶基因表达状况。结果经PCR检测和DNA分子杂交分析,初步证明Δ6-脂肪酸脱氢酶基因已导入并整合到大豆基因组中。结论成功地将Δ6-脂肪酸脱氢酶基因导入并整合到大豆基因组中。 展开更多

关键词 Δ6-脂肪酸脱氢酶基因 大豆 农杆菌介导转化 转基因植株

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不同油酸亚油酸比值花生品种油酸脱氢酶基因的时空表达特征 被引量：3

7

作者 殷冬梅 胡晓峰 +3 位作者 张幸果 宋佳静 王允 崔党群 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期137-141,共5页

以不同油酸/亚油酸比值(O/L)花生品种为材料,利用实时荧光定量PCR技术,对四个不同O/L花生品种不同组织中油酸脱氢酶基因(FAD2)的表达进行相对定量分析。结果表明:FAD2基因在不同O/L基因型中组成型表达,其在根、茎、叶中表达量低,在花中... 以不同油酸/亚油酸比值(O/L)花生品种为材料,利用实时荧光定量PCR技术,对四个不同O/L花生品种不同组织中油酸脱氢酶基因(FAD2)的表达进行相对定量分析。结果表明:FAD2基因在不同O/L基因型中组成型表达,其在根、茎、叶中表达量低,在花中表达量最高,显著高于荚果等其它组织中的表达量,且品种间差异达显著水平;花U606和花U12在花、幼荚、成熟荚果中的表达量呈依次下降趋势;花育17和狮油红4号在花、幼荚、成熟荚果中的表达量则呈现高-低-次高的表达趋势,差异达显著水平。 展开更多

关键词 花生 油酸脱氢酶基因(FAD2) 实时荧光定量PCR 基因表达

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Pichia stipitis木糖醇脱氢酶基因XYL2在酿酒酵母中的表达 被引量：5

8

作者 陈叶福 王正祥 +1 位作者 方慧英 诸葛健 《无锡轻工大学学报（食品与生物技术）》 CSCD 北大核心 2003年第2期26-29,共4页

通过PCR方法克隆得到树干毕赤氏酵母木糖醇脱氢酶(XDH)基因XYL2.将该基因连入酵母表达载体pYX212的强启动子磷酸丙糖异构酶(TPI)启动子下,得到融合表达载体pYX-XYL2.通过电转化方法将pYX-XYL2转入酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae W303... 通过PCR方法克隆得到树干毕赤氏酵母木糖醇脱氢酶(XDH)基因XYL2.将该基因连入酵母表达载体pYX212的强启动子磷酸丙糖异构酶(TPI)启动子下,得到融合表达载体pYX-XYL2.通过电转化方法将pYX-XYL2转入酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae W303-1A中,酶活测定表明在酿酒酵母中树干毕赤氏酵母木糖醇脱氢酶基因XYL2得到活性表达,酿酒酵母转化子粗酶液中木糖醇脱氢酶比活为每毫克蛋白0.6 U左右,约为供体菌的2.4倍.与基因供体菌不同,木糖醇脱氢酶基因在酿酒酵母中表达不需木糖诱导,为组成型表达. 展开更多

关键词 树干毕赤氏酵母 木糖醇脱氢酶基因XYL2 酿酒酵母 基因表达

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米根霉L-乳酸脱氢酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 被引量：2

9

作者 郑志 姜绍通 +3 位作者 章建国 罗水忠 潘丽军 蒋诗平 《合肥工业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期489-491,共3页

文章以米根霉基因组DNA为模板,根据已公布的米根酶L-乳酸脱氢酶基因(ldnL)序列设计引物,PCR扩增得到含有ldnL的DNA片段;PCR产物T/A克隆后再双酶切,将ldnL片段连接到大肠杆菌表达载体pET17b,得到重组表达质粒pET17b-ldnL;pET17b-ldnL转... 文章以米根霉基因组DNA为模板,根据已公布的米根酶L-乳酸脱氢酶基因(ldnL)序列设计引物,PCR扩增得到含有ldnL的DNA片段;PCR产物T/A克隆后再双酶切,将ldnL片段连接到大肠杆菌表达载体pET17b,得到重组表达质粒pET17b-ldnL;pET17b-ldnL转化大肠杆菌BL21(DE3),摇瓶培养诱导表达后的菌体经SDS-PAGE电泳分析,结果表明克隆的ldnL基因在大肠杆菌中实现表达。 展开更多

关键词 L-乳酸脱氢酶基因 大肠杆菌 克隆

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白菜型油菜八氢番茄红素脱氢酶基因PDS3的克隆与序列分析 被引量：3

10

作者 薛蕾 闫贵欣 +3 位作者 伍晓明 高桂珍 陈碧云 许鲲 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期622-627,共6页

利用电子克隆技术,从数据库中找到与拟南芥高度同源的油菜EST序列,继而通过RT-PCR和RACE等方法,成功克隆了白菜型油菜八氢番茄红素脱氢酶(类胡萝卜素合成途径中的一个关键限速酶)基因PDS3的cDNA,命名为BrPDS3(GenBank登记号GQ200741)。c... 利用电子克隆技术,从数据库中找到与拟南芥高度同源的油菜EST序列,继而通过RT-PCR和RACE等方法,成功克隆了白菜型油菜八氢番茄红素脱氢酶(类胡萝卜素合成途径中的一个关键限速酶)基因PDS3的cDNA,命名为BrPDS3(GenBank登记号GQ200741)。cDNA序列全长1 940bp,其中包含114bp的5'前导序列和134bp的3'不翻译序列,编码区长度为1 692bp,编码63kD的蛋白。序列分析表明,BrPDS3蛋白与其他植物的PDS蛋白具有较高相似性;在系统进化树中,BrPDS3与甘蓝亲缘关系最近。根据全长cDNA序列设计引物,从白菜型油菜青油13号DNA中克隆得到BrPDS3基因的全长DNA,长度为3 911bp,ORF(开放阅读框)1 692bp,含有15个外显子和14个内含子。 展开更多

关键词 白菜型油菜 类胡萝卜素 八氢番茄红素脱氢酶基因BrPDS3

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酵母菌3-磷酸甘油脱氢酶基因(gpd1)的克隆及其在高渗胁迫下mRNA转录水平的差异 被引量：2

11

作者 张凡 马向东 +5 位作者 余华顺 姚娟 郭永豪 邢学森 阎淳泰 梁运祥 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期15-19,共5页

YY、FHS和WFB是生产中常用的酵母菌株。在高渗胁迫下的生长速度依次为FHS、YY、WFB。克隆gpd1基因片段并测序,再与NCBI公布的gpd1序列(X76859)比较,WFB、YY、FHS的同源性分别为99·32%、99·83%、99·83%,YY、FHS菌株的gpd... YY、FHS和WFB是生产中常用的酵母菌株。在高渗胁迫下的生长速度依次为FHS、YY、WFB。克隆gpd1基因片段并测序,再与NCBI公布的gpd1序列(X76859)比较,WFB、YY、FHS的同源性分别为99·32%、99·83%、99·83%,YY、FHS菌株的gpd1序列与NCBI上的gpd1序列(X76859)对应的氨基酸序列完全一致,WFB与它们的同源性只有98·5%。用不同浓度的NaCl培养酵母细胞进行渗透胁迫处理,RNA点杂交显示YY、FHS菌株gpd1基因的mRNA表达量在NaCl浓度上升时候有上升的趋势;WFB菌株gpd1基因的mRNA表达量随NaCl浓度的上升逐渐降低。实验结果显示,gpd1基因mRNA转录水平与抗高渗能力相关。 展开更多

关键词 mRNA 转录水平 脱氢酶基因 克隆 NaCl浓度 甘油 磷酸 RNA点杂交 NCBI 氨基酸序列 酵母菌株 生长速度 基因片段 胁迫处理 酵母细胞 同源性 表达量 上升 显示 测序

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菌B49乙醛乙醇脱氢酶基因克隆中的引物设计 被引量：1

12

作者 林海龙 任南琪 +2 位作者 郑国香 张坤 段志洁 《哈尔滨工业大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第6期865-869,共5页

为研究乙醛乙醇脱氢酶基因及其在乙醇发酵生物制氢中的重要作用,采用clustalw对12个菌种的乙醛乙醇脱氢酶蛋白质序列进行多重比对分析,共得到6个保守区,以这6个保守区设计引物,共选用9对简并引物,命名为ADHJ1、ADHJ2、ADHJ3、ADHJ4、AD... 为研究乙醛乙醇脱氢酶基因及其在乙醇发酵生物制氢中的重要作用,采用clustalw对12个菌种的乙醛乙醇脱氢酶蛋白质序列进行多重比对分析,共得到6个保守区,以这6个保守区设计引物,共选用9对简并引物,命名为ADHJ1、ADHJ2、ADHJ3、ADHJ4、ADHJ5、ADHJ6、ADHJ7、ADHJ8、ADHJ9.用这9对引物对B49总DNA进行简并PCR,共有两对引物的扩增得到预期的结果.其PCR产物经pMD18-T克隆转化至大肠杆菌DH5α中,经筛选后测序.结果表明,这两段DNA推导的氨基酸序列与Bacillus cereus的乙醛乙醇脱氢酶基因的相似性最高为69%,证实所克隆的序列为乙醛乙醇脱氢酶基因DNA片段.尽管采用clustalw软件设计ADHJ5简并引物的简并度分别达1048576倍和98304倍,引物长度分别为30 bp和26 bp,但扩增结果特异性强.说明采用clustalw软件设计的简并引物可信度高,同时,也说明简并度不是合理评判简并引物质量的标准. 展开更多

关键词 乙醛乙醇脱氢酶基因 clustalw 生物制氢细菌 简并引物

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新疆耐盐植物藜的甜菜碱醛脱氢酶基因(CaBADH)的克隆、盐胁迫表达分析及植物表达载体的构建

13

作者 袁军文 谷丽丽 +2 位作者 陈莎莎 徐栋生 兰海燕 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期1273-1279,共7页

【目的】为开展植物耐盐基因工程提供候选基因。【方法】研究以新疆耐盐植物藜为材料,利用同源克隆技术从藜中克隆到BADH基因,并通过RT-PCR方法对其在不同盐胁迫下的表达进行了初步分析,随后将该基因构建至高效植物表达载体pCN2300上。... 【目的】为开展植物耐盐基因工程提供候选基因。【方法】研究以新疆耐盐植物藜为材料,利用同源克隆技术从藜中克隆到BADH基因,并通过RT-PCR方法对其在不同盐胁迫下的表达进行了初步分析,随后将该基因构建至高效植物表达载体pCN2300上。【结果】(1)经测序分析并与藜科其他植物进行同源性比对显示,得到的序列为藜的BADH基因,开放阅读框长度为1503bp,编码500个氨基酸;(2)以BADH基因核心序列设计引物对此基因在盐胁迫下的表达进行了RT-RCR分析,发现其本底表达量较高,以100mmol/LNaCl处理2、5、12和24h后其表达量没有明显增加趋势,而以50mmol/LNaCl或KCl长期胁迫后其表达量则比对照和100mmol/L时的表达量高;(3)经双酶切鉴定,已成功将CaBADH基因构建到植物表达载体pCN2300,得到重组质粒pCN2300-CaBADH。【结论】研究为进一步从生理和分子水平阐明藜的耐盐机制提供了一定参考。并为通过转基因技术获得耐盐作物新品种打下基础。 展开更多

关键词 藜 甜菜碱醛脱氢酶基因 盐胁迫 表达分析 表达载体构建

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丹墨胶囊灌胃大鼠组织11β-羟基类固醇脱氢酶及己糖-6-磷酸脱氢酶基因的表达

14

作者 傅晓华 李瑞明 +3 位作者 洪晓丹 韦炳华 叶毅芳 任斌 《山东医药》 CAS 2014年第1期24-26,共3页

目的探讨丹墨胶囊对11β-羟基类固醇脱氢酶(11β-HSD)和己糖-6-磷酸脱氢酶(H6PD)基因表达的影响,分析丹墨胶囊与糖皮质激素相互作用的具体机制。方法选取雄性SD大鼠12只,随机分为丹墨胶囊组和对照组各6只。丹墨胶囊组每日给予丹墨胶囊0.... 目的探讨丹墨胶囊对11β-羟基类固醇脱氢酶(11β-HSD)和己糖-6-磷酸脱氢酶(H6PD)基因表达的影响,分析丹墨胶囊与糖皮质激素相互作用的具体机制。方法选取雄性SD大鼠12只,随机分为丹墨胶囊组和对照组各6只。丹墨胶囊组每日给予丹墨胶囊0.864 g/kg灌胃,对照组则给予1%羧甲基纤维素钠溶液灌胃。定量RT-PCR法测定两组大鼠肝、肾、胸腺、脾、脂肪、肌肉、心脏、肺、小肠、睾丸等组织11β-HSD1、11β-HSD2、H6 PD基因表达。结果与对照组比较,丹墨胶囊组肝脏、睾丸、脑组织11β-HSD1基因表达分别提高203%、62%、63%(P均<0.01),肾脏、胸腺、脾、脂肪、肌肉、小肠、心脏组织11β-HSD1的基因表达分别降低24%、36%、63%、56%、69%、35%、63%(P均<0.01);丹墨胶囊组大鼠肾脏、脂肪、胸腺组织11β-HSD2的基因表达分别升高135%、70%、57%(P均<0.05),肝脏、肌肉组织11β-HSD2基因表达分别降低64%、73%(P均<0.01);丹墨胶囊组心脏、睾丸、脑、小肠和肌肉组织H6 PD基因表达分别升高40%、73%、67%、64%、74%(P均<0.01),肝脏、肾脏、脂肪、肺、脾、胸腺组织H6 PD基因表达分别降低81%、19%、74%、55%、34%、54%(P均<0.01)。结论丹墨胶囊通过影响大鼠组织中11β-HSD1、11β-HSD2及H6 PD基因表达,从而影响糖皮质激素体内活化及局部组织中激素水平。 展开更多

关键词 丹墨胶囊 糖皮质激素 11Β-羟基类固醇脱氢酶 己糖-6-磷酸脱氢酶基因

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深黄被孢霉Δ~6-脂肪酸脱氢酶基因的原核表达和转基因植株再生研究

15

作者 王广科 李明春 +1 位作者 李晋川 刑来君 《成都医学院学报》 CAS 2009年第1期1-6,共6页

目的通过农杆菌介导法将来源于深黄被孢霉的Δ6-脂肪酸脱氢酶(D6D)基因导入到东北大豆绥农10和吉林47中,最终获得转基因植株。方法利用子叶节外植体诱导出丛生芽和再生植株,利用卡那霉素的抗性筛选培养基连续筛选以及PCR方法、DNA分子... 目的通过农杆菌介导法将来源于深黄被孢霉的Δ6-脂肪酸脱氢酶(D6D)基因导入到东北大豆绥农10和吉林47中,最终获得转基因植株。方法利用子叶节外植体诱导出丛生芽和再生植株,利用卡那霉素的抗性筛选培养基连续筛选以及PCR方法、DNA分子杂交分析和GC分析检测转基因植株中的Δ6-脂肪酸脱氢酶基因表达状况。结果经过含50 mg/L卡那霉素的抗性筛选培养基连续筛选,获得了一批转基因植株。经PCR检测和DNA分子杂交分析,初步证明Δ6-脂肪酸脱氢酶基因已导入并整合到大豆基因组中。将转基因大豆T1代和T2代种子进行脂肪酸GC分析,结果在大豆种子中检测到Δ6-脂肪酸脱氢酶基因的产物GLA,证明该基因在大豆中得到了表达。 展开更多

关键词 Δ6-脂肪酸脱氢酶基因 大豆 农杆菌介导转化 脂肪酸GC分析 转基因植株

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克雷伯氏菌乙醛脱氢酶基因过表达及产乙醇发酵工艺优化 被引量：1

16

作者 查凡 周柱 +3 位作者 张琴 陈振 陈翔宇 胡永安 《中国酿造》 CAS 北大核心 2022年第11期66-72,共7页

为获得高效产乙醇的基因重组菌,该研究从克雷伯氏菌(Klebsiella sp.)WL1316中克隆乙醛脱氢酶aldh基因,进行同源过表达,考察其利用木质纤维素水解液中葡萄糖和木糖的能力,并以乙醇含量为响应值,通过单因素试验及响应面试验对其发酵稻草... 为获得高效产乙醇的基因重组菌,该研究从克雷伯氏菌(Klebsiella sp.)WL1316中克隆乙醛脱氢酶aldh基因,进行同源过表达,考察其利用木质纤维素水解液中葡萄糖和木糖的能力,并以乙醇含量为响应值,通过单因素试验及响应面试验对其发酵稻草水解液产乙醇的工艺条件进行优化。结果表明,成功构建了同源过表达aldh基因的重组菌株aldh-pET-28a-Klebsiella sp.WL1316,其保持了野生菌株Klebsiella sp.WL1316利用木质纤维素水解液中葡萄糖和木糖的特性,且发酵稻草水解液产乙醇的最优发酵工艺为发酵时间60 h,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导浓度1.5 mmol/L,发酵培养基初始pH值7.3,初始还原糖含量59 g/L。在此最优工艺条件下,重组菌株的乙醇含量为(5.39±0.51)g/L,是野生菌株[(3.67±0.32)g/L]的1.47倍,表明aldh基因的过表达促进了乙醇产量的提高。 展开更多

关键词 克雷伯氏菌 乙醇 乙醛脱氢酶基因 过表达 发酵工艺优化

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乙醛脱氢酶基因过表达酿酒酵母在黄酒中降高级醇作用 被引量：6

17

作者 江森 王欢 +4 位作者 何亚辉 陈叶福 邓庆博 郭学武 肖冬光 《中国酿造》 CAS 北大核心 2020年第12期153-159,共7页

为降低黄酒中高级醇产量,以酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)单倍体菌株AY12α为出发菌,利用同源重组技术构建乙醛脱氢酶基因过表达菌株,并在不同黄酒发酵工艺下探究其对酿酒酵母产高级醇的影响。结果表明,成功构建了5株乙醛脱氢酶基... 为降低黄酒中高级醇产量,以酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)单倍体菌株AY12α为出发菌,利用同源重组技术构建乙醛脱氢酶基因过表达菌株,并在不同黄酒发酵工艺下探究其对酿酒酵母产高级醇的影响。结果表明,成功构建了5株乙醛脱氢酶基因(ALD2、ALD3、ALD4、ALD5和ALD6)过表达菌株,在大米加麦曲的传统黄酒发酵工艺下,所有改造菌株均可以促进乙酸、降低高级醇的生成,其中改造菌株α-ALD6效果最显著(P<0.01),乙酸产量是出发菌AY12α的2.92倍,总高级醇产量下降72.04%。在不同发酵工艺中,改造菌株α-ALD5与α-ALD6均可显著促进乙酸、降低高级醇生成(P<0.01);在纯种根霉曲做糖化剂的发酵工艺中,改造菌株在培菌糖化24 h后接入降高级醇效果更好。与纯种根霉曲相比,改造菌株以麦曲作糖化剂时降高级醇效果更好,且改造菌株α-ALD6在大米加麦曲的传统黄酒发酵工艺下降高级醇效果最好。 展开更多

关键词 黄酒 乙醛脱氢酶基因 酿酒酵母 高级醇 发酵工艺

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花生油酸脱氢酶基因AhFAD2A和AhFAD2B的时空表达特征 被引量：2

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作者 刘华 薛金嫚 +3 位作者 徐倩玉 易昕 王维艳 刘宏波 《浙江农林大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期14-20,共7页

花生Arachis hypogaea油酸脱氢酶AhFAD2是调控花生种子中油酸与亚油酸比值(oleic acid/linoleic acid, O/L)的关键酶,已确定存在2个编码AhFAD2的基因:AhFAD2A和AhFAD2B,但两者在花生中的时空表达特征尚不清楚。选取2个有代表性O/L的花... 花生Arachis hypogaea油酸脱氢酶AhFAD2是调控花生种子中油酸与亚油酸比值(oleic acid/linoleic acid, O/L)的关键酶,已确定存在2个编码AhFAD2的基因:AhFAD2A和AhFAD2B,但两者在花生中的时空表达特征尚不清楚。选取2个有代表性O/L的花生品种‘山花15’‘Shanhua 15’(O/L为1)和高油酸花生突变体(O/L大于20)为材料,根据AhFAD2A和AhFAD2B基因3′-UTR核苷酸序列的差异,设计了新型、简便的区分两者的特异性引物,并利用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)技术,对2个花生品种的7个不同组织(根,茎,叶,花,开花后20, 40, 60 d种子)中AhFAD2A和AhFAD2B的表达特征进行了分析。结果表明:AhFAD2A和AhFAD2B在‘山花15’和高油酸花生突变体7个组织中都有表达;其中,在2个花生品种3个不同发育时期的种子中, AhFAD2A和AhFAD2B在开花后40 d的种子中表达量最高,推测在开花至花后40 d这一阶段种子中FAD2的表达量可能对花生最终O/L起主要的调控作用。另外,‘山花15’种子中AhFAD2B的表达量显著高于AhFAD2A,而在高油酸花生突变体种子中则相反,推测花生中AhFAD2B在催化油酸去饱和生成亚油酸的过程中比AhFAD2A可能起更重要的调控作用。 展开更多

关键词 分子生物学 花生 油酸脱氢酶基因 QRT-PCR 基因表达

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异柠檬酸脱氢酶基因突变的弥漫性较低级别胶质瘤中α地中海贫血伴智力低下综合征基因缺失与1p/19q联合缺失的表达分析

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作者 王君祥 孙成法 +4 位作者 褚荣涛 姜华 龚铭杰 周幽心 李学涛 《中国医药科学》 2021年第15期31-34,87,共5页

目的探讨不同亚型异柠檬酸脱氢酶(IDH)突变弥漫性较低级别胶质瘤中α地中海贫血伴智力低下综合征X染色体连锁基因(ATRX)缺失和1号染色体短臂和19号染色体长臂(1p/19q)联合缺失的表达及意义。方法回顾性分析2012年6月至2017年6月确诊并... 目的探讨不同亚型异柠檬酸脱氢酶(IDH)突变弥漫性较低级别胶质瘤中α地中海贫血伴智力低下综合征X染色体连锁基因(ATRX)缺失和1号染色体短臂和19号染色体长臂(1p/19q)联合缺失的表达及意义。方法回顾性分析2012年6月至2017年6月确诊并在苏州大学第一附属医院和常熟市第二人民医院手术及放化疗治疗的IDH突变型成年较低级别弥漫性胶质瘤患者142例,依据组织学分型分为星形细胞瘤与少突胶质细胞瘤两组,采用免疫组化法检测ATRX缺失,FISH法检测1p/19q联合缺失,比较两组ATRX缺失及1p/19q联合缺失的差异,χ2检验评价各参数间相关性的显著性。平均随访40个月(10-88个月),分析ATRX缺失及1p/19q联合缺失与生存时间之间的关系。结果星形细胞瘤组ATRX缺失显著高于少突胶质细胞瘤组,少突胶质细胞瘤组1p/19q联合缺失显著高于星形细胞瘤组,差异有统计学意义(P<0.05)。星形细胞瘤组中ATRX缺失的患者预后优于野生型ATRX的患者,中位生存时间分别为46、40个月,差异有统计学意义(P<0.05)。少突胶质细胞瘤组中1p/19q联合缺失患者的预后优于1p/19q正常患者,中位生存时间分别为53个月、42个月,差异有统计学意义(P<0.05)。结论ATRX缺失和1p/19q联合缺失可用于鉴别IDH突变型星形细胞瘤与少突胶质细胞瘤,可作为评价IDH突变型弥漫性较低级别胶质瘤预后的独立因素。联合应用基因变异的分类比单纯组织学分类更准确。 展开更多

关键词 弥漫性较低级别胶质瘤 α地中海贫血伴智力低下综合征基因 1p/19q联合缺失 异柠檬酸脱氢酶基因

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八氢番茄红素脱氢酶(PDS)基因分子进化特征 被引量：4

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作者 梁成伟 程江峰 +2 位作者 苏忠亮 梁琰 王帅 《青岛科技大学学报（自然科学版）》 CAS 2009年第5期408-411,共4页

对来自蓝藻、绿藻和高等植物中的pds基因用最大似然法进行了系统发育分析,来估算pds基因在进化过程中的正选择位点。通过位点模型和分支-位点模型分别对PDS不同位点和不同分支中的位点进行正选择作用的估算。结果发现,pds基因的适应性... 对来自蓝藻、绿藻和高等植物中的pds基因用最大似然法进行了系统发育分析,来估算pds基因在进化过程中的正选择位点。通过位点模型和分支-位点模型分别对PDS不同位点和不同分支中的位点进行正选择作用的估算。结果发现,pds基因的适应性进化主要发生在系统发育树的不同分支上。在绿藻分支中,有7.9%位点受到正选择作用;在高等植物分支中,有6.1%位点受到正选择作用;在蓝藻分支中,有2.6%位点受到正选择作用。这些正选择位点的识别,可以为PDS活性研究提供重要的线索。 展开更多

关键词 八氢番茄红素脱氢酶基因 PAML 正选择作用 基因进化

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