摘要
甲酸脱氢酶是氧化还原酶辅酶NAD(P)^+和NAD(P)H再生循环体系中的关键酶。实验中,用PCR方法扩增了假丝酵母Candida boidinii中甲酸脱氢酶基因(fdh),分别构建了诱导型表达载体pUC-dh和pET- fdh,以E.coli Rosetta为表达宿主,获得了能够高效表达甲酸脱氢酶的重组菌。经诱导后重组菌Rosetta/pET- fdh的FDH比酶活为0.399U/mg(蛋白),Rosetta/pUC-fdh的FDH比酶活为0.163U/mg(蛋白)。经SDS- PAGE分析,Rosetta/pET-fdh和Rosetta/pUC-fdh表达的FDH蛋白分别占菌体可溶性总蛋白的17%和10%,实现了fdh基因在Rosetta中的高效表达。研究中所构建的重组菌为氧化还原反应中的辅酶再生奠定了良好的基础。
Formate dehydrogenase（FDH） is the key enzyme in NAD（P）^＋-NAD（P） H coenzyme regeneration system. In this article, NAD^＋-dependent formate dehydrogenase gene（fdh） was amplified from genome DNA of Candida boidinii by PCR, and constructed recombinant plasmids pET-fdh and pUC-fdh which were then transformed into E. coli Rosetta respectively. The enzymatic activity of FDH in Rosetta/pET-fdh is 0. 399 U/mg protein, while in Rosetta/pUC-fdh is 0. 163 U/mg protein. SDS-PAGE showed that the expression of FDH in Rosetta/pET-fdh and Rosetta/pUC-fdh is 10% and 17% of all total soluble protein respectively. This study laid good foundation for the coenzyme regeneration system.
出处
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第5期5-8,共4页
Food and Fermentation Industries
基金
国家973项目(2003CB716004)
国家自然基金项目(20336010)
作者简介
硕士研究生
何永芳教授，通讯作者
