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猪传染性胃肠炎病毒S基因RAA检测方法的建立与初步应用
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作者 吕林丹 牟豪 +5 位作者 胡霞 刘明妮 李绍梅 李星 宋振辉 杨柳 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期3590-3599,共10页
本研究旨在建立一种基于猪传染性胃肠炎病毒(porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV)S基因便捷、高效和特异的由重组酶介导的核酸等温扩增(recombinase-aid amplification,RAA)检测方法。通过基因组序列比对,选择TGEV S基... 本研究旨在建立一种基于猪传染性胃肠炎病毒(porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV)S基因便捷、高效和特异的由重组酶介导的核酸等温扩增(recombinase-aid amplification,RAA)检测方法。通过基因组序列比对,选择TGEV S基因中特定片段为检测靶标,构建重组质粒pUC57-S,设计并筛选RAA引物和探针;建立RAA检测方法;评价该方法灵敏度、特异性和重复性;运用该方法检测腹泻临床样品,与荧光定量PCR方法比较检测结果的符合率。结果确定最佳引物对F2/R1和探针PF2;该方法在40℃恒温条件下,30 min即可完成反应;荧光型RAA法最低检出限可达1.34×10^(1)copies·μL^(-1);与猪流行性腹泻病毒、猪丁型冠状病毒、猪呼吸道冠状病毒等常见猪源病毒核酸无交叉反应;采用该方法检测107份临床样本,阳性率为5.61%(6/107),与荧光定量PCR法相比较,检测结果一致。本研究成功建立了一种灵敏、特异、可视化的RAA检测方法,可摆脱对昂贵设备、专业人员和检测技术的依赖,为临床检测TGEV提供良好的技术基础。 展开更多
关键词 传染性胃肠炎病毒 基础型RAA 荧光型RAA 可视化检测
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紫甘薯花色苷制备及其抗猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)活性的研究 被引量:14
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作者 雷用东 陈姗姗 +3 位作者 赵晓燕 张莉 马越 童军茂 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2012年第21期349-352,共4页
为研究紫甘薯花色苷对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的抑制作用,实验纯化了紫甘薯花色苷提取物,并采用液质联机的方法鉴定其结构组成;将制备的花色苷提取物作用于侵染TGEV的猪睾丸(ST)细胞,研究对TGEV诱导ST细胞的形态学变化和凋亡情况的影... 为研究紫甘薯花色苷对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的抑制作用,实验纯化了紫甘薯花色苷提取物,并采用液质联机的方法鉴定其结构组成;将制备的花色苷提取物作用于侵染TGEV的猪睾丸(ST)细胞,研究对TGEV诱导ST细胞的形态学变化和凋亡情况的影响,揭示花色苷对TGEV的预防和治疗效果。结果表明:紫甘薯花色苷提取物中主要含8种花色苷。花色苷质量浓度低于60μg/mL时,ST细胞生长良好且无细胞毒性;接种TGEV后,20μg/mL的花色苷就能抑制TGEV的增殖,且在安全浓度范围内抑制程度成剂量关系。在此体外实验中,花色苷对TGEV的预防效果比治疗效果更明显。结论:紫甘薯花色苷在20~60μg/mL质量浓度范围内对TGEV有很好的抗病毒功效。 展开更多
关键词 紫甘薯 花色苷 睾丸细胞 传染性胃肠炎病毒 MTT法
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猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒二重PCR检测方法的建立 被引量:8
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作者 路超 张莉 +2 位作者 王利丽 杨春蕾 韩伟 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第6期1377-1382,共6页
通过对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因和猪流行性腹泻病毒(PEDV)M基因进行序列分析,本试验利用DNAStar软件分别设计2对特异性引物,扩增片段长度分别为299和437bp,建立一种针对TGEV和PEDV感染的二重PCR鉴别诊断方法。该方法能同时检测到T... 通过对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因和猪流行性腹泻病毒(PEDV)M基因进行序列分析,本试验利用DNAStar软件分别设计2对特异性引物,扩增片段长度分别为299和437bp,建立一种针对TGEV和PEDV感染的二重PCR鉴别诊断方法。该方法能同时检测到TGEV和PEDV,而对猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)等均无扩增,其检测TGEV、PEDV的极限为104拷贝/μL;用该方法对临床收集的68份疑似病毒性腹泻仔猪粪便和肠道组织样本进行检测,结果表明本试验建立的二重PCR方法具有特异性强、灵敏度高等特点,能用于临床诊断及流行病学调查。 展开更多
关键词 传染性胃肠炎病毒(tgev) 流行性腹泻病毒(PEDV) 二重PCR 诊断
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猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒一步法双重RT-PCR检测方法的建立与应用 被引量:8
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作者 胡鸿惠 南文金 +2 位作者 黄健强 吴静波 彭国良 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第9期2279-2284,共6页
本研究旨在建立一种用于临床腹泻病例中猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)快速检测的一步法双重RT-PCR方法。根据GenBank中收录的PEDV和TGEV的基因序列,分别设计两对特性引物,经最佳反应条件的优化和选择,结果显示,该... 本研究旨在建立一种用于临床腹泻病例中猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)快速检测的一步法双重RT-PCR方法。根据GenBank中收录的PEDV和TGEV的基因序列,分别设计两对特性引物,经最佳反应条件的优化和选择,结果显示,该一步法双重RT-PCR检测方法能同时特异性扩增PEDV和TGEV,该方法可检测到稀释度1×10-5的疫苗毒。应用本方法检测2015年度实验室收集的疑似样品,PEDV阳性率为100%。本研究建立的方法快速、敏感性高、特异性强,可用于临床PEDV和TGEV的快速检测及流行病学调查。 展开更多
关键词 流行性腹泻病毒(PEDV) 传染性胃肠炎病毒(tgev) 双重RT-PCR
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猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒和猪博卡病毒多重PCR检测方法的建立 被引量:19
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作者 焦洋 姜焱 +3 位作者 王凯民 张常印 雷治海 唐泰山 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第8期71-75,共5页
根据GenBank登录的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因序列、猪流行性腹泻病毒(PEDV)M基因和猪博卡病毒(PBoV)NP1基因序列,设计合成3对引物。通过优化反应条件,对TGEV、PEDV RNA反转录获得的cDNA模板和PBoV的DNA模板进行多重PCR扩增,同时得... 根据GenBank登录的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因序列、猪流行性腹泻病毒(PEDV)M基因和猪博卡病毒(PBoV)NP1基因序列,设计合成3对引物。通过优化反应条件,对TGEV、PEDV RNA反转录获得的cDNA模板和PBoV的DNA模板进行多重PCR扩增,同时得到3条与试验设计相符的1 060bp(TGEV)、462bp(PEDV)及258bp(PBoV)特异性条带,建立了同时检测TGEV、PEDV和PBoV的多重PCR方法。结果表明,在同一PCR反应体系中,可以同时检测这3种病毒核酸片段,而对其他病毒的检测均为阴性;敏感性分析表明,该方法的最低检测限分别为35、20、10pg的核酸。采用该方法对60份临床样品进行检测,TEGV阳性率为1.6%,PEDV阳性率为6.7%,PBoV阳性率为21.7%,表明建立的方法可以应用于临床检测。 展开更多
关键词 传染性胃肠炎病毒 流行性腹泻病毒 博卡病毒 多重PCR 检测
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猪传染性胃肠炎与流行性腹泻病毒二重RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量:15
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作者 闫若潜 安春霞 +4 位作者 刘淑敏 赵雪丽 郭小玲 赵明军 吴志明 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第9期38-42,共5页
为建立猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)与流行性腹泻病毒(PEDV)的快速鉴别诊断方法,本研究根据GenBank已登录的TGEV核蛋白(N)基因和PEDV膜蛋白(M)基因保守区域序列分别设计了1对特异性引物,以TGEV和PEDV混合总RNA为反转录模板,建立了TGEV和PED... 为建立猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)与流行性腹泻病毒(PEDV)的快速鉴别诊断方法,本研究根据GenBank已登录的TGEV核蛋白(N)基因和PEDV膜蛋白(M)基因保守区域序列分别设计了1对特异性引物,以TGEV和PEDV混合总RNA为反转录模板,建立了TGEV和PEDV的二重RT-PCR检测方法,并进行了特异性、敏感性和重复性试验;利用所建立的检测方法对临床疑似样品进行了应用检测,并对检测到的阳性样品进行克隆测序。结果表明,成功建立了TGEV和PEDV二重RT-PCR检测方法,该方法的检测灵敏度最低极限为10TCID50/mL病毒含量,重复性好,特异性强,可特异性地扩增TGEV和PEDV细胞培养物,但对ST细胞和其他7种病原对照扩增不出任何条带;对22份临床疑似TGEV和PEDV感染样品检测结果与测序结果完全一致。本研究成功建立了TGEV与PEDV二重RT-PCR检测方法,可适用于猪传染性胃肠炎和流行性腹泻病的快速鉴别诊断。 展开更多
关键词 传染性胃肠炎病毒 流行性腹泻病毒 二重RT-PCR 检测 建立 应用
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猪传染性胃肠炎病毒M、sM基因重组杆状病毒的构建及病毒样颗粒的组装 被引量:8
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作者 冷勇 宋振辉 +2 位作者 卿家超 翟少华 买买提.艾孜子 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期1432-1437,共6页
利用RT-PCR方法扩增猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)M和sM结构蛋白基因,将其分别克隆人载体pFastBac^TM Dual,获得转移质粒pFastBac^TM Dual-M和pFastBac^TM Dual-M-sM,将重组质粒转化至DHl0Bac感受态细胞,经抗性与蓝白斑筛选,获得杆... 利用RT-PCR方法扩增猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)M和sM结构蛋白基因,将其分别克隆人载体pFastBac^TM Dual,获得转移质粒pFastBac^TM Dual-M和pFastBac^TM Dual-M-sM,将重组质粒转化至DHl0Bac感受态细胞,经抗性与蓝白斑筛选,获得杆状病毒重组质粒Bacmid-M和Bacmid-M-sM,在Cellfection作用下,将杆状病毒重组质粒转染昆虫细胞sf9,获得重组杆状病毒rBac-M和rBac-M-sM。通过WesternBlot、间接免疫荧光试验(IFA)进行检测,结果显示:重组蛋白在杆状病毒感染的sf9昆虫细胞中获得正确表达。将重组杆状病毒rBac-M和rBae-M-sM分别感染sf9昆虫细胞,进行TGEV病毒样颗粒(VLPs)的体外组装试验。结果表明,M蛋白在sf9细胞内单独表达,M蛋白和sM在sf9细胞内共同表达,都可形成TGEV病毒样颗粒,而且病毒粒子大小不等,直径在61~101nm。试验结果为进一步研究TGEV结构蛋白在病毒装配过程中的作用提供了理论依据。 展开更多
关键词 传染性胃肠炎病毒tgev M基因 sM基因 SF9细胞 病毒样颗粒
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木犀草素对猪传染性胃肠炎病毒的抑制作用 被引量:12
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作者 龚国清 龚国华 +1 位作者 钱之玉 周曙 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期453-456,共4页
目的:建立猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的体外培养方法,观察木犀草素对TGEV的抑制作用.方法:采用细胞培养法,通过结晶紫摄入量测定结合细胞病变作用(CPE),观察木犀草素在不同的加药方式下,对感染TGEV的猪睾丸(ST)细胞的保护作用.结果:TGEV... 目的:建立猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的体外培养方法,观察木犀草素对TGEV的抑制作用.方法:采用细胞培养法,通过结晶紫摄入量测定结合细胞病变作用(CPE),观察木犀草素在不同的加药方式下,对感染TGEV的猪睾丸(ST)细胞的保护作用.结果:TGEV病毒先吸附ST细胞再加入药液,先与TGEV病毒孵育再接种于ST细胞,或药液先与细胞孵育再用病毒感染等不同方式下,木犀草素在0.84~54.50 μmol/L浓度范围内,均能明显地提高细胞的存活数.另外发现TGEV感染ST细胞后随着给药时间的推迟,木犀草素抑制病毒增殖作用越弱.结论:木犀草素对体外培养系统中TGEV有较好的增殖抑制作用. 展开更多
关键词 木犀草素 传染性胃肠炎病毒 细胞病变 体外抗病毒试验
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猪传染性胃肠炎病毒Taq Man荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量:11
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作者 白兴华 冯力 +4 位作者 陈建飞 时洪艳 孙东波 吴波平 高秀春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期476-481,共6页
根据猪传染性胃肠炎病毒和猪肌动蛋白的基因序列设计合成了引物和探针,通过对荧光定量RT-PCR反应条件的优化,建立了TaqMan荧光定量RT-PCR检测TGEV的方法。同时对37份现地病料进行检测并与常规RT-PCR方法、TGEV抗原快速检测试剂盒比较。... 根据猪传染性胃肠炎病毒和猪肌动蛋白的基因序列设计合成了引物和探针,通过对荧光定量RT-PCR反应条件的优化,建立了TaqMan荧光定量RT-PCR检测TGEV的方法。同时对37份现地病料进行检测并与常规RT-PCR方法、TGEV抗原快速检测试剂盒比较。结果,该方法的检测敏感性达到15.3拷贝/μL,且具有很好的特异性和重复性,而常规RT-PCR方法只能检测到1.53×103拷贝/μL。对37份现地病料的检测结果也表明该法(检出17份)比常规RT-PCR方法(检出12份)和TGEV抗原快速检测试剂盒(免疫层析法,检出10份)的敏感性高。 展开更多
关键词 传染性胃肠炎病毒 TAQMAN探针 荧光定量RT-PCR
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猪传染性胃肠炎病毒核衣壳(N)蛋白基因的克隆与表达 被引量:6
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作者 唐丽杰 李一经 +2 位作者 贾永清 王君伟 刘宝全 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期611-614,共4页
以猪传染性胃肠炎病毒亚基因组mRNA为模板根据文献设计一对引物 ,通过RT -RCR技术 ,扩增其核衣壳(N)蛋白基因的cDNA ;将其按正确的阅读框架定向克隆到表达载体pProEXHTb中特异酶切位点 ;将重组质粒PHN转化进大肠杆菌TG1株 ,在浓度为 1 ... 以猪传染性胃肠炎病毒亚基因组mRNA为模板根据文献设计一对引物 ,通过RT -RCR技术 ,扩增其核衣壳(N)蛋白基因的cDNA ;将其按正确的阅读框架定向克隆到表达载体pProEXHTb中特异酶切位点 ;将重组质粒PHN转化进大肠杆菌TG1株 ,在浓度为 1 0mMIPTG和 37℃条件下诱导 ,PHN基因融合蛋白获得了表达 ;经SDS -PAGE ,Western blot试验 ,确定其表达的融合蛋白产物大小为预期的 47kD。试验结果证明 。 展开更多
关键词 传染性胃肠炎病毒 核衣壳 克隆 蛋白基因 基因表达
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我国部分地区猪流行性腹泻、传染性胃肠炎及猪轮状病毒感染的流行现状及防控措施 被引量:17
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作者 王艳丰 张丁华 +2 位作者 李爱心 程征 刘守铉 《动物医学进展》 北大核心 2018年第6期121-125,共5页
猪流行性腹泻(PED)、猪传染性胃肠炎(TGE)和猪轮状病毒(PoRV)感染是目前危害养猪业健康发展的主要疫病,常以单独或混合感染的方式感染猪,发病急、传播速度快,哺乳仔猪发病率和病死率可达80%~100%,后备猪、母猪或育肥猪呈一过性腹泻,发... 猪流行性腹泻(PED)、猪传染性胃肠炎(TGE)和猪轮状病毒(PoRV)感染是目前危害养猪业健康发展的主要疫病,常以单独或混合感染的方式感染猪,发病急、传播速度快,哺乳仔猪发病率和病死率可达80%~100%,后备猪、母猪或育肥猪呈一过性腹泻,发病率较低。猪3种病毒性腹泻的临床表现极为相似,均以呕吐、严重腹泻、脱水和体重减轻为特征。特别自2010年以来,PEDV变异毒株的流行已对全球养猪业造成严重影响,已有的防控措施已经不能应对新的流行态势。近年来,针对PEDV、TGEV、PoRV毒株流行变化及防控措施研究较多,许多新技术或新手段已应用至猪3种病毒性腹泻的控制。论文基于当前3种病毒的遗传变异分析和流行现状,从饲养管理、免疫预防、中药疗法、干扰疗法、特异疗法及返饲疗法等方面对防控措施进行综述。 展开更多
关键词 流行性腹泻 传染性胃肠炎 轮状病毒感染 流行现状 防控措施
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猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒双重RT-PCR鉴别方法的建立 被引量:11
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作者 刘邓 袁秀芳 +3 位作者 徐丽华 牛登元 王朝文 王一成 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第10期1-5,共5页
根据GenBank发表的猪流行性腹泻病毒(PEDV)CV777株和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)Purdue P115株的基因序列,针对其基因保守区,设计1条共用的下游引物和2条各自病毒的上游引物,可特异扩增出大小分别为213 bp和546 bp目的条带。经过对TaqDNA... 根据GenBank发表的猪流行性腹泻病毒(PEDV)CV777株和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)Purdue P115株的基因序列,针对其基因保守区,设计1条共用的下游引物和2条各自病毒的上游引物,可特异扩增出大小分别为213 bp和546 bp目的条带。经过对TaqDNA聚合酶和Mg2+浓度、退火温度(Tm)等PCR反应条件的优化,最终确定该双重RT-PCR的最佳条件为TaqDNA聚合酶浓度为0.03 U/μL,Mg2+浓度为0.05 mmol/L,dNTP浓度为200μmol/L,Tm为51℃。特异性和敏感性检测结果显示,所建立的检测方法具有很好的特异性以及较高的敏感性。 展开更多
关键词 流行性腹泻病毒 传染性胃肠炎病毒 双重RT—PCR
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紫甘蓝花色苷组成及抗猪传染性胃肠炎病毒活性分析 被引量:6
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作者 雷用东 魏向利 +2 位作者 罗小玲 童军茂 赵晓燕 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期95-98,共4页
为在体外探寻紫甘蓝花色苷(Anthocyanins from Purple Cabbage,APC)抗猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus of swine,TGEV)的活性效果。本研究以APC粉为原料,采用高效液相色谱仪与质谱仪联机的方法鉴定其花色苷成分... 为在体外探寻紫甘蓝花色苷(Anthocyanins from Purple Cabbage,APC)抗猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus of swine,TGEV)的活性效果。本研究以APC粉为原料,采用高效液相色谱仪与质谱仪联机的方法鉴定其花色苷成分后,在体外将APC作用于感染TGEV的猪睾丸细胞系(swine testicle,ST)单层表面,通过研究APC对TGEV诱导ST细胞的形态学变化和细胞存活情况,评价APC是否具有抗TGEV的活性作用。结果表明:紫甘蓝花色苷粉中至少含13种花色苷成分,其中主要为矢车菊色素的糖苷;APC对细胞无毒性的最大安全质量浓度为100μg/m L;APC在安全浓度范围内能够显著抑制TGEV诱导的ST细胞形态变化,降低凋亡。因此,紫甘蓝花色苷具有抗TGEV的生物活性作用。 展开更多
关键词 紫甘蓝花色苷 睾丸细胞系 传染性胃肠炎病毒 生物活性
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应用套式PCR检测和区分猪传染性胃肠炎病毒和猪呼吸道冠状病毒的试验 被引量:14
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作者 沈海娥 郭福生 +3 位作者 龚振华 孙淑芳 裘孝良 郝勤宗 《中国动物检疫》 CAS 2003年第7期21-23,共3页
根据猪传染性胃肠炎病毒和猪呼吸道冠状病毒的S基因核苷酸序列 ,设计合成了2对引物 ,以猪传染性胃肠炎病毒和猪呼吸道冠状病毒细胞培养物为模板 ,进行PCR特异性片段扩增 ,猪传染性胃肠炎病毒扩增片段大小为886bp,猪呼吸道冠状病毒扩增... 根据猪传染性胃肠炎病毒和猪呼吸道冠状病毒的S基因核苷酸序列 ,设计合成了2对引物 ,以猪传染性胃肠炎病毒和猪呼吸道冠状病毒细胞培养物为模板 ,进行PCR特异性片段扩增 ,猪传染性胃肠炎病毒扩增片段大小为886bp,猪呼吸道冠状病毒扩增片段大小为214bp。建立的套式PCR经过特异性、敏感性试验及对临床送检样品检测 ,证明本法具有快速、特异和高度敏感的特点。 展开更多
关键词 应用 套式PCR检测 传染性胃肠炎病毒 呼吸道冠状病毒 试验
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猪传染性胃肠炎病毒分子生物学研究进展 被引量:17
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作者 李建强 柳纪省 +7 位作者 胡永浩 程杰 兰喜 殷相平 李宝玉 李志勇 杨彬 马友记 《动物医学进展》 CSCD 2006年第2期1-4,共4页
猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)基因组为不分段的单股正链RNA,其编码4种结构蛋白和3种非结构蛋白。TGEV S蛋白是基因工程研究的重点,近年来,S蛋白在大肠埃希菌、沙门菌、腺病毒等中得到了高效表达。将传染性胃肠炎病毒的基因组人工改造成为... 猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)基因组为不分段的单股正链RNA,其编码4种结构蛋白和3种非结构蛋白。TGEV S蛋白是基因工程研究的重点,近年来,S蛋白在大肠埃希菌、沙门菌、腺病毒等中得到了高效表达。将传染性胃肠炎病毒的基因组人工改造成为感染性cDNA的表达载体,此载体可在ORF3处插入外源基因,异源基因绿荧光蛋白可稳定、高效地表达。TGEV基因1和其他冠状病毒相比保守性很强,所以对TGEV聚合酶的研究,特别是其中保守酶的研究,对于抗TGEV及其他冠状病毒药物的研究有着重要的意义。 展开更多
关键词 传染性胃肠炎病毒 分子生物学特性
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以乳酸杆菌为载体的猪传染性胃肠炎病毒S基因A、D抗原位点DNA疫苗的构建 被引量:8
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作者 苏君鸿 李云岗 +4 位作者 陈树林 陈书民 田夫林 孙圣福 陈静 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第8期19-23,共5页
应用pRc/CMV2真核质粒骨架,先后插入猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因AD抗原位点片段和乳酸杆菌复制子基因Rep.8014,构建了pRc/CMV2-SAD-Rep.8014真核表达穿梭质粒。将其转染PK-15细胞,RT-PCR检测到S基因A D抗原位点的mRNA表达。随后,将pR... 应用pRc/CMV2真核质粒骨架,先后插入猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因AD抗原位点片段和乳酸杆菌复制子基因Rep.8014,构建了pRc/CMV2-SAD-Rep.8014真核表达穿梭质粒。将其转染PK-15细胞,RT-PCR检测到S基因A D抗原位点的mRNA表达。随后,将pRc/CMV2-SAD-Rep.8014质粒电转化猪源的Lactobacillus acidophilusSW1株,成功构建了以乳酸杆菌为载体的带有TGEV S基因AD抗原位点的DNA疫苗株L.acidophilusTGES-1。本研究结合了乳酸杆菌胃肠道常在共生菌的优势和TGE呈现肠道局部发病的特点,达到益生性与免疫预防的双重功效,对乳酸杆菌口服DNA疫苗进行了有益的探索。 展开更多
关键词 乳酸杆菌 传染性胃肠炎病毒 DNA疫苗
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猪传染性胃肠炎病毒N蛋白原核表达和间接ELISA检测方法的建立 被引量:5
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作者 郭宏伟 郑鸣 +3 位作者 乔宏兴 马辉 赵绪永 王永芬 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第9期2296-2301,共6页
试验构建了pET28a-TGEV-N重组表达质粒,完成TGEV N蛋白的表达和纯化,通过SDS-PAGE和Western blotting分析,表明表达产物N蛋白可被猪TGEV阳性血清识别。用TGEV N蛋白作为诊断抗原,建立了检测TGEV血清抗体的间接ELISA检测方法,该方法批内... 试验构建了pET28a-TGEV-N重组表达质粒,完成TGEV N蛋白的表达和纯化,通过SDS-PAGE和Western blotting分析,表明表达产物N蛋白可被猪TGEV阳性血清识别。用TGEV N蛋白作为诊断抗原,建立了检测TGEV血清抗体的间接ELISA检测方法,该方法批内、批间重复试验变异系数均小于5%;检测血清的特异性为100%,假阳性率为0,假阴性率为5%,与7种常见猪病血清无交叉反应。针对临床血清,用该方法检测结果与中和试验结果相比,符合率为100%。该方法能够快速、有效地检出TGEV抗体,重复性和特异性好,为标准化诊断试剂盒的开发奠定了基础。 展开更多
关键词 传染性胃肠炎病毒 N蛋白 原核表达 间接ELISA
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仔猪人工感染猪传染性胃肠炎病毒的病理分析 被引量:5
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作者 王龙涛 葛晨霞 +2 位作者 黄海龙 胡桂学 高丰 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第28期15645-15646,15678,共3页
[目的]研究猪传染性胃肠炎(TGE)在仔猪体内的发病规律,为猪传染性胃肠炎的防治提供理论依据。[方法]将猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)JL分离株口服接种1周龄仔猪,10TCID50/只。应用RT-PCR方法检测发病和死亡仔猪的粪便处理液;采取病猪心脏、... [目的]研究猪传染性胃肠炎(TGE)在仔猪体内的发病规律,为猪传染性胃肠炎的防治提供理论依据。[方法]将猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)JL分离株口服接种1周龄仔猪,10TCID50/只。应用RT-PCR方法检测发病和死亡仔猪的粪便处理液;采取病猪心脏、肝脏、胃、肺脏、肠管,制成病理组织切片,观察病理组织学变化。[结果]接种动物48h后出现典型的传染性胃肠炎临床症状,表现为短时间呕吐,伴有黄色水样腹泻和脱水。剖检发现肠管扩张,充满液体,小肠壁变薄。PCR结果为TGEV阳性。十二指肠近端黏膜绒毛轻微萎缩变短,远端绒毛明显缩短;上皮细胞脱落,呈浆液性或卡他性炎症。空肠、回肠绒毛显著萎缩,肠黏膜皱褶减少,大肠出血,并见卡他性炎症。胃壁变薄,淤血,出血。肺脏表现为间质性肺炎病理变化。[结论]攻毒仔猪表现出典型的TGE病理组织学变化。 展开更多
关键词 传染性胃肠炎病毒 人工感染 病理分析
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中药复方制剂抗猪传染性胃肠炎病毒活性的研究 被引量:13
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作者 姜成刚 张秀英 龙忠臣 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期587-589,共3页
通过体外细胞培养试验,采用3种作用方式:先加药物后加病毒、药物和病毒先作用一段时间后加入、先加病毒后加药物,较系统地研究了抗猪传染性胃肠炎病毒有效单味中草药板蓝根、鱼腥草和败酱草所组成的复方制剂对细胞毒性强度及对猪传染性... 通过体外细胞培养试验,采用3种作用方式:先加药物后加病毒、药物和病毒先作用一段时间后加入、先加病毒后加药物,较系统地研究了抗猪传染性胃肠炎病毒有效单味中草药板蓝根、鱼腥草和败酱草所组成的复方制剂对细胞毒性强度及对猪传染性胃肠炎病毒抗吸附、直接灭活和抑制复制作用机理,筛选出同时具有3种方式抗病毒的有效复方制剂,为筛选抗病毒的有效中草药制剂提供新方法。 展开更多
关键词 中药复方制剂 传染性胃肠炎病毒 作用机理
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猪传染性胃肠炎的防制措施 被引量:2
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作者 吴竞聪 《北方牧业》 2024年第12期37-37,共1页
近年来,养猪场受到环境、管理、卫生、引种等诸多因素的影响,导致各类猪病呈现出高发趋势,传染性胃肠炎就是其中之一。该病具有传染性强、传播速度快、危害性大、致死率高等特征,对猪场乃至养猪业威胁影响甚大。1病原学猪传染性胃肠炎... 近年来,养猪场受到环境、管理、卫生、引种等诸多因素的影响,导致各类猪病呈现出高发趋势,传染性胃肠炎就是其中之一。该病具有传染性强、传播速度快、危害性大、致死率高等特征,对猪场乃至养猪业威胁影响甚大。1病原学猪传染性胃肠炎是冠状病毒属的传染性胃肠炎病毒所引发的疾病,该病毒为单股RNA病毒,有囊膜,形态不一,有的呈多边形,有的呈椭圆形,直径最小约80纳米,最大120纳米。猪传染性胃肠炎病毒主要存在于病猪的病变脏器当中,如:肠系膜淋巴结、十二指肠、空肠等,均可发现有大量病毒。同时,病猪的粪便尿液等排泄物和体液当中也存在诸多病毒。 展开更多
关键词 传染性胃肠炎 防制措施 冠状病毒 RNA病毒 肠系膜淋巴结 传播速度
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