摘要
为了省去繁杂的mRNA提取纯化过程,简便,快速,重现性好的克隆里氏木霉RutC-30β-甘露聚糖酶cDNA,本研究依据其cDNA序列设计了一对引物F1和R1,然后用总RNA直接进行RT-PCR,其产物经过EcoRI,BamHI酶切后插入P^GEM-32克隆载体,再转化到JM109感受态细胞中,克隆转化子,酶切测序。结果获得了β-甘露聚糖酶编码的成熟肽cDNA,其序列与GenBank报道完全一样,另外,对有利于用RT-PCR克隆cDNA的高诱导产生β-甘露聚糖酶的里氏木霉RutC-30菌体培养条件进行了研究。