摘要
【背景】牛结核病(bovine tuberculosis,BTB)是一种由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)复合体中的牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis)引起的慢性传染性疾病,对牛群健康、畜牧业经济和公共卫生构成了重大威胁。【目的】筛选牛分枝杆菌新型诊断分子标识物,以期建立牛结核病新型诊断方法。【方法】利用同位素标记的相对与绝对定量技术并结合文献报道筛选出Mpb70、GroEL2、HspX、DnaK、Mpb83、EsxW、BfrB、Hrp1、EsxL、AtpD和EsxN这11种蛋白质进行制备,并通过豚鼠模型评价其致敏效果。【结果】当重组蛋白量为100μg时,Mpb70、HspX、Mpb83和EsxN可引起明显的迟发型过敏反应,并且出现破溃。当使用量为50μg时,Mpb70、HspX、Mpb83、EsxW、EsxL和EsxN可引起明显的迟发型过敏反应。当使用量低至12.5μg时,则无法引起豚鼠的迟发型过敏反应。对不同蛋白进行组合使用,EsxW/EsxL/EsxN组合的活性最好,可刺激豚鼠产生明显的迟发型过敏反应;EsxW/EsxL、EsxW/EsxN、EsxL/EsxN组合也可引起迟发型过敏反应,但其反应程度不如EsxW/EsxL/EsxN组合。【结论】重组蛋白Mpb70、HspX、Mpb83、EsxW、EsxL和EsxN可引起较好的迟发型过敏反应,具有可替代结核菌素的应用前景。
[Background]Bovine tuberculosis(BTB)is a chronic infectious disease caused by Mycobacterium bovis,a part of the Mycobacterium tuberculosis complex,posing threats to cattle health,livestock economies,and public health.[Objective]In order to screen new diagnostic molecular markers of Mycobacterium bovis and establish new diagnostic method for bovine tuberculosis.[Methods]Using isotopic labeling-based relative and absolute quantification techniques and article screening,we identified 11 proteins(Mpb70,GroEL2,HspX,DnaK,Mpb83,EsxW,BfrB,Hrp1,EsxL,AtpD,and EsxN)for further evaluation.These recombinant proteins were then assessed for sensitization effects in a guinea pig model.[Results]At a dose of 100μg,Mpb70,HspX,Mpb83,and EsxN induced marked delayed-type hypersensitivity(DTH)and rupture.At a dose of 50μg,Mpb70,HspX,Mpb83,EsxW,EsxL,and EsxN provoked significant DTH.At a dose of 12.5μg,the proteins did not induce DTH.Among the protein combinations,EsxW/EsxL/EsxN showed the highest activity,triggering robust DTH in guinea pigs.Other combinations such as EsxW/EsxL,EsxW/EsxN,and EsxL/EsxN also induced DTH,though to a lesser extent than EsxW/EsxL/EsxN.[Conclusion]Recombinant proteins Mpb70,HspX,Mpb83,EsxW,EsxL,and EsxN elicited notable DTH,demonstrating the potential as tuberculin substitutes.
作者
辛凌翔
孙伟峰
王楠
李俊平
朱良全
王豪杰
徐磊
郭鑫
XIN Lingxiang;SUN Weifeng;WANG Nan;LI Junping;ZHU Liangquan;WANG Haojie;XU Lei;GUO Xin(China Agricultural University,Beijing 100193,China;China Institute of Veterinary Drug Control,Beijing 100081,China)
出处
《微生物学通报》
北大核心
2025年第2期623-631,共9页
Microbiology China
基金
国家重点研发计划(2022YFD1800703)。
关键词
豚鼠模型
迟发型过敏反应
重组蛋白
结核菌素
guinea pig model
delayed-type hypersensitivity
recombinant protein
tuberculin
作者简介
Corresponding authors:徐磊.E-mail:XU Lei,609697832@qq.com;Corresponding authors:郭鑫.E-mail:GUO Xin,guoxincau@cau.edu.cn。
