摘要
为了获得在体外表达的猪圆环病毒2型(Porcine circovirus 2,PCV2)Cap蛋白,研究其免疫原性,试验根据GenBank公布的国内PCV2-Cap蛋白基因序列特点,结合毕赤酵母密码子偏好对Cap基因进行优化,合成目的基因后,构建分泌型表达载体pPIC9K-Cap,转化毕赤酵母GS115后,经诱导表达获得重组Cap蛋白。重组蛋白以50μg/只的剂量连续3次免疫豚鼠后检测抗体水平。结果表明:含有PCV2-Cap基因的质粒成功转化到酵母菌基因组中,重组酵母菌株在30℃,经1%甲醇诱导表达96 h后,培养液中能够检测到33 ku的重组蛋白,重组蛋白表达量为155μg/mL,占培养上清液总蛋白的9.362%,Western-blot试验结果显示重组蛋白具有良好的抗原活性。重组蛋白以50μg/只的剂量连续3次免疫豚鼠后,能够刺激豚鼠产生特异性抗体且与接种0.3头份/只剂量的市售PCV2灭活疫苗产生的抗体水平无显著差异(P>0.05)。说明成功利用毕赤酵母表达系统分泌表达了PCV2-Cap蛋白,表达的重组蛋白具有良好的抗原活性。
作者
李富强
王利丽
田向学
谭世旭
任卫科
周瑞敏
李秀丽
张莉
鄢明华
LI Fuqiang;WANG Lili;TIAN Xiangxue;TAN Shixu;REN Weike;ZHOU Ruimin;LI Xiuli;ZHANG Li;YAN Minghua
出处
《黑龙江畜牧兽医》
CAS
北大核心
2020年第10期66-69,79,共5页
Heilongjiang Animal Science And veterinary Medicine
基金
天津市农业科学院院长基金项目(16014)
天津市生猪产业技术体系猪病防控岗位项目(ITTPRS2017003)
天津市农村科技帮扶工程项目(18ZXBFNC00250)。
作者简介
李富强(1987-),男,助理研究员,硕士,研究方向为动物疫病诊断与防治,lifuqiang2208@163.com;通信作者:张莉(1979-),女,副研究员,硕士,研究方向为分子生物学,rookiezhangl979@126.com.
