摘要
[目的]在HEK293细胞中表达人凝血因子Ⅶ(human coagulation factor,hFⅦ)蛋白。[方法]通过PCR分别扩增与hFⅦ羧基化有关的酶(γ-谷氨酰基羧化酶(GGCX)和维生素K环氧化物还原酶复合体亚单位1(VKORC1))基因序列,与hFⅦ基因片段构建真核表达载体p CAEVKORC1-GGCX-hFⅦ,利用脂质体将表达载体转入HEK293细胞,采用Western blotting和ELISA方法检测细胞上清中hFⅦ的表达水平,凝血因子Ⅶ检测试剂盒测定hFⅦ的促凝血活性。[结果]Western blotting检测细胞上清中含有hFⅦ蛋白,经ELISA检测表达量为12 mg/L,凝血因子Ⅶ检测试剂盒测定hFⅦ的促凝血相对比活性为612%。[结论]该表达载体成功在HEK293细胞中瞬时表达hFⅦ蛋白,为进一步深入研究hFⅦ的生物学特性奠定了基础。
[Objective]To express human coagulation factorⅦ(hFⅦ)protein in HEK293 cells.[Methods]The genes of the enzymes(GGCX and VKORC1)associated with hFⅦcarboxylation were amplified by PCR,respectively,the Expression Vector pCAE-VKORC1-GGCX-hFⅦwas constructed with the hFⅦgene fragment.The expression vector was transfected into HEK293 cells by Lipofectamine 2000.The expression level of hFⅦwas detected by Western blotting and ELISA.The procoagulant activity of hFⅦwas measured by coagulation factorⅦKit.Results HFⅦprotein was detected in supernatant of HEK293 cells.The expression level of h FⅦwas 12 mg/L by ELISA and the relative procoagulant activity of hFⅦwas 612%by coagulation factorⅦkit.[Conclusion]The expression vector successfully expressed hFⅦin HEK293 cells,which laid a foundation for further study on the biological characteristics of hFⅦ.
作者
张全爱
赵峰梅
曹鹏程
潘薇薇
赵亚蕊
王伟霞
赵邑
ZHANG Quanai;ZHAO Fengmei;CAO Pengcheng;PAN Weiwei;ZHAO Yarui;WANG Weixia;ZHAO Yi
出处
《山西科技》
2020年第2期17-21,共5页
Shanxi Science and Technology
基金
山西省重点研发计划项目(201603D321108)。
作者简介
张全爱,女,1982年生,山西省生物研究院有限公司助理研究员;赵峰梅,女,1982年生,山西省生物研究院有限公司研究员;曹鹏程,男,1987年生,山西省生物研究院有限公司助理研究员;潘薇薇,女,1982年生,山西省生物研究院有限公司助理研究员;赵亚蕊,女,1982年生,山西省生物研究院有限公司助理研究员;王伟霞,女,1973年生,山西省生物研究院有限公司会计师;通信作者:赵邑,男,1966年生,山西省生物研究院有限公司研究员,E-mail:zhaoyisws@163.com。
