摘要
[目的]建立和优化银缕梅ISSR-PCR反应体系。[方法]采用正交试验和单因子试验对影响PCR扩增体系中的Mg^(2+)浓度、dNTPs、模板DNA及引物浓度、Taq酶用量5个因子进行分析研究。[结果]银缕梅ISSR-PCR 25μL反应体系中5个因子最优水平:DNA模板(20 ng/μL)2.50μL,引物(10μmol/L)1.00μL,Taq酶(5 U/μL)0.10μL,Mg^(2+)(25 mmol/L)3.00μL,d NTPs(2.5 mmol/L)1.50μL。[结论]银缕梅ISSR-PCR反应最优体系的建立为进一步利用ISSR对其进行分子标记辅助育种、分子指纹图谱构建和遗传多样性分析等后续研究奠定了基础。
[Objective]To establish and optimize ISSR-PCR reaction system.[Method]Effect for ISSR-PCR reaction of Parrotia subaequalis on 5 factors(Mg 2+,dNTPs,DNA template,Taq polymerase and primer)were analyzed by orthogonal design and single factor test.[Result]The optimal ISSR-PCR reaction system(25μL)mixture contained DNA template(20 ng/μL)2.50μL,primer(10μmol/L)1.00μL,Taq polymerase(5 U/μL)0.10μL,Mg 2+(25 mmol/L)3.00μL,dNTPs(2.5 mmol/L)1.50μL.[Conclusion]The establishment of ISSR-PCR reaction system for P.subaequalis laid the foundation for the further use of ISSR to study molecular marker-assisted breeding,molecular identity and genetic diversity.
作者
陈云霞
路志远
肖卓恒
CHEN Yun-xia;LU Zhi-yuan;XIAO Zhuo-heng(Nanjing Forest Police College,Nanjing,Jiangsu 210023)
出处
《安徽农业科学》
CAS
2018年第11期81-83,共3页
Journal of Anhui Agricultural Sciences
基金
国家级大学生创新训练项目(201612213012)
关键词
银缕梅
ISSR
PCR反应体系
资源保护
Parrotia subaequalis
ISSR
PCR reaction system
Resources protection
作者简介
陈云霞(1982—),女,山西吉县人,副教授,博士,从事野生动植物鉴定与保护研究。;共同第一作者:路志远(1996—),男,安徽亳州人,专业:刑事科学技术。
