摘要
目的:构建ATP4B-SV40T-IRES-GFP重组质粒并进行鉴定.方法:根据小鼠ATP4B启动子序列设计引物,获得的小鼠ATP4B基因启动子序列,并加入限制性内切酶酶切位点.将其装入载体IRES-GFP,获得重组载体ATP4B-IRES-GFP并进行酶切鉴定.之后将SV40T基因克隆入ATP4B-IRES-GFP载体,并用限制性内切酶PstI和AseⅠ进行验证.结果:将小鼠ATP4B启动子序列插入IRES-GFP载体,经过酶切验证获得正确的ATP4B-IRES-GFP质粒;将SV40T片段插入ATP4B-IRES-GFP,质粒测序及酶切结果验证获得正确的ATP4B-SV40T-IRES-GFP重组质粒.显微注射入小鼠受精卵可获得阳性小鼠.结论:成功构建ATP4B-SV40T-IRES-GFP重组质粒,可用于下一步构建原发性胃癌转基因小鼠.
AIM：To construct and identify ATP4B-SV40TIRES-GFP transgenic vector.METHODS：The mouse ATP4B gene promoter was amplified and inserted into IRES-GFP vector after the addition of restriction enzyme sitesto result in ATP4B-IRES-GFP.After restriction enzyme digestion,the SV40T gene sequence was inserted into ATP4B-IRES-GFP.The resultant recombinant plasmid was identified by digestion with restriction enzymes PstI and AseⅠ.RESULTS：The recombinant plasmids ATP4BIRES-GFP and ATP4B-SV40T-IRES-GFP have been successfully constructed and can be used to generate transgenic mice.CONCLUSION：The recombinated plasmid ATP4B-SV40T-IRES-GFP was constructed successfully and it could be used to construct the transgenic mice with primary gastric cancer.
出处
《世界华人消化杂志》
CAS
北大核心
2012年第4期314-318,共5页
World Chinese Journal of Digestology
基金
上海市科委科技发展基金实验动物专项基金资助项目
No.09140903300
No.10140902600
上海市重点学科基金资助项目
No.S30302
上海市教育委员会创新重点项目基金资助项目
No.12ZZ118
上海市卫生局重点基金资助项目
No.2010019~~
作者简介
张隆，硕士，助理研究员，主要从事肿瘤发病机制基础的研究
通讯作者：范忠泽，教授．200062，上海市兰溪路164号，上海中医药大学附属普陀医院，上海中医药大学中西医结合肿瘤介入研究所Izwf@hotmail.com
