摘要
针对A型禽流感(AI)保守的M基因设计引物,并分别用地高辛和生物素标记,建立检测A型AIV的RT-PCRELISA方法。试验主要对RT-PCRELISA的各种反应条件进行了优化,确定了2mg/mL的链霉亲和素包被、1:3000抗地高辛的过氧化物酶及孵育时间等最适反应条件。该方法的敏感性比常规琼脂糖凝胶电泳检测方法高l00倍以上,而且特异性强,克服了组织样品中AIV含量少而难以检测的困难,为禽流感的早期诊断和分子流行病学调查提供了一条新途径。
In this study a RT-PCR ELISA method was established using the primer which was designed according to M gene sequence of AIV and labeled by biotin and DIG. The optimal reaction conditions were determined including the streptavidin was 2 mg/mL and anti-digoxigenin-POD dilution titer was 1：3000. This method had a strong specificity and high sensitivity. The sensitivity was more than 100 times compared to RT-PCR, so that it could overcome the difficulty for the little AIV in the samples. It provided a new way for the molecular epidemiologic investigation and early diagnosis of AIV.
出处
《中国农学通报》
CSCD
2012年第2期48-52,共5页
Chinese Agricultural Science Bulletin
基金
山东省自然科学基金"检测禽流感病毒的"RT-PCR-微孔板杂交-ELISA"试剂盒的研究"(Y2008D54)
现代农业产业技术体系建设专项
作者简介
杨少华，女，1978年出生，山东烟台人，助理研究员，硕士，主要从事禽病防治研究。通信地址：250100济南桑园路8号山东省农科院畜牧兽医研究所，Tel：0531-8862261l，E-mail：ysh7865@163．com
通讯作者：黄艳艳，女，1977年出生，山东肥城人，副研究员，博士，主要从事禽病分子病毒学研究。通信地址：250100济南桑园路8号山东省农科院畜牧兽医研究所，Tel：0531-88622611，E-mail：99030366@qq．com。
