摘要
采用混合酸酐法合成30:1～10:1三个不同起始物质的量比的氯霉素免疫抗原(HAP-KLH),采用活泼酯法(EDC-NHS)合成40:1～1:1七个不同起始物质的量比的包被抗原(HAP-OVA),紫外测定HAP-KLH偶联比25:1～8:1,HAP-OVA偶联比23:1～1:3。间接竞争ELISA实验优化包被抗原,在23:1～3:1偶联比范围内,氯霉素(CAP)IC50值为36～15ng/mL,随着偶联比的减小而降低,当偶联比低于3:1则略为上升。确定了包被抗原HAP-OVA最佳偶联比为3:1。本研究表明包被抗原的偶联比对ELISA测定IC50值有重要影响,应合成不同偶联比的包被抗原,选出最佳偶联比。
Chloramphenicolsuccinate and keyhole limpet hemocyanin （KLH） were mixed at 3 initial molar ratios, namely 30：1, 20：1 and 10：1, to synthesize chloramphenicol （CAP） immunogens （hapten-KLH conjugates） with coupling ratios of 25：1, 16：1 and 8：1, respectively. Additionally, chloramphenicolsuccinate was mixed with ovalbumin （OVA） at 7 initial molar ratios, namely 40：1, 30：1, 20：1, 10：1, 7：1, 4：1 and 1：1, to synthesize CAP coating antigens （hapten-OVA conjugates） with coupling ratios determined by the UV spectrometric method of 23：1, 20：1, 14：1, 6：1, 3：1, 1：1 and 1：3, respectively. Indirect competitive enzyme linked immunosorbent assay （ic-ELISA） experiments were carried out to choose a CAP coating antigen with an optimal coupling ratio. CAP was determined with the CAP coating antigens to have IC50 values ranging from 15 to 36 ng/mL. As the coupling ratio between chloramphenicolsuccinate and OVA decreased from 26：1 to 3：1, there was a decrease in the IC50 value of CAP. When the coupling ratio was less than 3：1, the IC50 value of CAP exhibited a slight increase. These findings demonstrate that a CAP coating antigen with an optimal coupling ratio should be synthesized for the ic-ELISA assay of IC50 significantly influenced by coupling ratio.
出处
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2010年第10期91-94,共4页
Food Science
基金
江西省教育厅科学技术研究项目(GJJ09062)
关键词
氯霉素
免疫抗原
包被抗原
偶联比
chloramphenicol
immunogen
coating antigen
coupling ratio
作者简介
作者简介：罗舜菁（1969-），女，副教授，硕士，研究方向为食品安全。E—mail：1uoshunjing@yahoo．com．cn
