摘要
以荧光虫荧光素酶报告载体pXP2 DNA为模板,扩增得到编码萤火虫荧光素酶(LUC)的基因(luc),构建了诱导型表达载体pQE30-luc。将载体导入E.coliM15获得高效诱导表达萤火虫荧光素酶基因的重组菌M15/pQE30-luc。SDS-PAGE电泳分析显示:重组蛋白的相对分子质量为60 000,表达量占全菌胞内可溶性蛋白质的50.9%.利用表达载体pQE30上的His.Tag标记选用Ni柱纯化表达具有活性的萤火虫荧光素酶(LUC),纯化后比酶活达到1.43×109RFU/mg,纯化倍数达10.6倍,回收率为25.3%.
In this research, the luc gene coding firefly luciferase （LUC） was amplified by using the DNA of Lueiferase reporter vector pXP2 as the template. The luc gene was subcloned into expression vector pQE30 and its product LUC was overexpressed in Escherichia coli M15. LUC purified by Ni-NTA affinity chromatography showed a single band about 60 000 on SDS-PAGE gel and the expressed LUC accounted for 50.9 % in E. coli. The specified activity was about 1.43 109RFU/mg, the purification fold is 10.6 times and the activity recovery is 25.3%.
出处
《食品与生物技术学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第5期62-66,共5页
Journal of Food Science and Biotechnology
基金
国家自然科学基金项目(20676053)
国家863计划项目(2006AA020103)
江苏省青年科技创新人才基金项目(BK2006504)
长江学者和创新团队发展计划资助项目(IRT0532)
关键词
萤火虫荧光素酶
克隆
表达
纯化
firefly luciferase
cloing
expression
purification
作者简介
夏蕾（1983-），女，江苏宿迁人，微生物学硕士研究生．
通讯作者：饶志明（1975-），男，江西临川人，农学博士，教授，硕士生导师，主要从事工业微生物育种及分子生物学改造方面的研究．Email：raozm@yahoo.com.cn
