摘要
参考GenBank上发表的H5亚型禽流感(AIV)血凝素(HA)基因序列及鸡白细胞介素18成熟蛋白(mChIL-18)的cDNA基因序列,分别设计了HA1和mChIL-18的cDNA的2对引物。然后以pMD18-T-HA质粒和pGEX-mChIL-18质粒为模板,扩增出了H5亚型AIV的HA1基因和mChIL-18的cDNA片段。再以杆状病毒pFastBacTM dual为载体,将H5亚型AIV HA中的HA1基因和mChIL-18基因分别插入到双表达载体pFastBacTM dual的p10启动子(PP10)和多角体蛋白启动子(PPH)的下游,构建携带HA1基因和mChIL-18基因的重组pFastBacTM dualH-A1-mChIL-18真核表达质粒。最后将构建的真核表达质粒转座入大肠杆菌DH10Bac,为下一步进行昆虫细胞的转染奠定了基础。这个重组载体的构建为考察mChIL-18作为免疫增强剂的作用及下一步AIV疫苗的研究奠定了坚实的基础。
The hemagglutinin（HA） gene of Avian Influenza Virus （AIV） subtype H5 and mature chicken interleukin-18 （mChlL-18） gene were amplified by designing two pairs of primers aeeording to the sequence published on GenBank. Recombinant baeulovirus eoexpressing HA1 gene from AIV subtype H5 plus ehieken interleukin-18 gene were constructed by inserting eDNA copy of HA gene and eDNA copy of mChIL-18 gene into the baculovirus expression plasmid pFast BaeTM Dual, furthermore eDNAs respectively inserted into the downstreams of P10 promoter and PH promoter. Finally, the constructing eukaryotie expression plasmid pFastBaeTM dual-HA1-mChIL-18 was transposited into Bacterium Coli DH10Bae ,which was based on next step insect cell＇ s transfeetion. The construction of this recombinant plasmid was benefit to investigate the effect of mChlL-18＇ s immunologie enhancement and study a new AIV recombinant vaccine.
出处
《西南农业学报》
CSCD
2008年第5期1438-1442,共5页
Southwest China Journal of Agricultural Sciences
基金
山东省科技攻关重大项目“山东省畜禽重大疫病防治技术研究”(SDSP2005041005)
国家“十一五”科技支撑计划重大项目“食品安全的综合示范”(2006BAK02A21)
作者简介
孔娜（1982-），女，山东乳山人，在读硕士研究生，主要从事动物流行病学与疫病防治技术的研究.
为通讯作者。
