摘要
以马哇、文椰78F1和海南高种为试材,利用改良的CTAB法提取的基因组DNA纯度高,完整性好。将PCR体系的主要成分设定5个梯度,根据每个成分的变化引起的PCR-SSR的效果差异,探讨了椰子SSR技术中PCR体系的主要成分对扩增结果的影响,并对引物co007的适宜退火温度进行优化。最终确定了引物co007的最适退火温度为46.4～54℃,20μlPCR反应体系的最佳条件为:Mg2+浓度为2.0～4.0mmol/L,dNTPs的浓度为0.1～0.25mmol/L,Taq聚合酶用量为1.0～2.0U,引物浓度为0.5～2.0μmol/L。利用此反应体系对部分椰子品种进行PCR扩增并电泳检测,扩增结果清晰且有较高的多态性,表明该体系适合椰子的亲缘关系分析。
The high quality genomic DNA of Serveral coconut cultivars, such as Mawa, WY78F1 and Hainai tall, were isolated by the modified CTAB method. Five different concentration of PCR components were designed and the annealing temperature was optimized for SSR primer co007. The results showed that its optimal annealing temperature was 46.4 to 54℃, and its optimized concentrations of SSR-PCR in 20μl reaction system was： Mg^2＋ 2.0 to 4.0 mmol/L, dNTPs 0.1 to 0.25 mmol/L, Taq polymerase 1.0 to 2.0U, primer 0.5 to 2.0 μmol/L. Using this PCR system, SSR fragments of 12 coconut cultivars were obtained. The clear and abundant polymorphism indicated that this system was suitable for SSR analysis of coconut.
出处
《中国农学通报》
CSCD
2008年第3期417-422,共6页
Chinese Agricultural Science Bulletin
关键词
椰子
DNA提取
SSR
优化
coconut, DNA extraction, SSR, optimization
作者简介
吴翼，男，1980年出生，海南文昌人，硕士，主要从事椰子组织培养与遗传育种研究。通信地址：571339海南省文昌市清澜开发区椰子研究所资源与育种研究室。Tei：0898-63330917;E-mail：wuyi-scuta@163．com。
通讯作者：武耀廷，男，1962年出生，研究员，博士生导师，主要从事作物遗传育种和生物技术研究。通信地址：570228海南省海口市人民大道58号海南大学校长办公室。Tel：0898-66295028;E-maii：wuyaoting@tsinghua．org．cn。
