摘要
目的:为防控禽流感在家禽和水禽中的流行,从而控制对人的感染,探讨一种能区别自然感染鸡和疫苗免疫鸡的鉴别诊断方法。方法:采用RT-PCR方法扩增禽流感病毒H9N2的NS1基因(660bp);并将该片段克隆至pET-28(a)质粒中,构建重组表达载体pET-NS1,转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,以终浓度0.7mmol/L的IPTG诱导表达6h,并应用Western-blot方法分析表达产物的反应原性。结果:pET-NS1载体能高效表达NS1蛋白,相对分子质量约25000,纯化产物能与该亚型的AIV活病毒感染鸡血清发生特异性反应而与灭活病毒免疫鸡血清不发生反应。结论:NS1基因在大肠埃希氏菌中的表达产物可用来鉴别禽流感免疫鸡群和感染鸡群。
Objective To prevent and control avian influenza virus spread between poultry and waterfowl, differentiate avian influenza virus （AIV）-infected chickens and chickens immunized with inactivated avian influenza virus. Methods The NS1 gene was amplified by RT-PCR from AIV subtype H9N2. The NS1 fragment was inserted into plasmid pET-28 （a） to obtain recombinant plasmid named pET-NS1 which transformed into E. coli BL 21（DE3） to induce NS1 gene expression with 0. 7 mmol/L IPTG, for 6 hours. The immunoreactivity of expression protein was analyzed by Western blot. Results The pET-NS1 plasmid could highly express NS1 protein with relative molecular mass of approximately 25 000 observed on the SDS-PAGE gel. The purification production of expression protein （NS1） could react specificically with live influenza virus （AIV）-infected chickens serum（H9N2）and not react with inactivated serum（H5N1）. Conclusion The protein expressed in E. coli BL could be applied to discriminate the infected flocks and vaccinated ones.
出处
《实用诊断与治疗杂志》
2007年第12期885-887,I0011,共4页
Journal of Practical Diagnosis and Therapy
基金
农业部畜禽病毒学重点开放实验室开放课题资助项目编号(KFKT2005-06)
关键词
禽流感
非结构蛋白
表达
H9N2
Avian influenza virus
non-structural protein
prokaryotic expression
H9N2
作者简介
易华山（1980年-），男，在读硕士研究生，研究方向：畜禽传染病学及病原分子生物学。
通讯作者：常惠芸（1965年-），女，研究员，博士，研究方向：分子病毒学。E-mail：changhuiyun@126．com。
