摘要
差速离心和蔗糖密度梯度离心纯化鸭病毒性肠炎病毒(DEV)免疫兔制备兔抗DEV高免血清后,用DEAE-Sephadex A-50柱层析纯化的兔抗DEVIgG建立了间接免疫荧光染色法(IFA)检测石蜡切片中DEV的方法。IFA的最佳条件为:石蜡切片用10mmol/L pH6.0的柠檬酸缓冲液为微波修复液微波修复10min,胰酶修复20min;10%小牛血清室温封闭30min;加入1∶25的兔抗DEVIgG于4℃孵育过夜;再加入FITC标记的羊抗兔IgG于37℃孵育45min。以建立的IFA对DEV人工皮下感染死亡鸭的各组织器官进行检测,在死亡鸭的脾脏、胸腺、法氏囊、肝脏、食道、十二指肠、直肠及肺脏中检测到DEV抗原。研究表明,IFA检测石蜡切片中的DEV具有直观、特异性强的优点,是对DEV进行检测和抗原定位的良好方法。
The duck enteritis virus(DEV) was propagated by duck embryos,and then purified through differential centrifugation,sucrose discontinuous gradient ultracentrifugation method.Rabbits were immunized with the purified virus in complete Freund s adjuvant(CFA) to obtain DEV-specific antibodies,which were then purified through DEAE-SephadexA-50 columns.An indirect immuno-fluorescent staining method(IFA) was established to detect the DEV antigen in paraffin sections.The optimum conditions of this IFA were as follow...
出处
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第8期871-875,共5页
Chinese Journal of Veterinary Science
基金
国家自然科学基金项目(30771598)
国家"十一五"科技支撑计划(2007Z06-017)
教育部"新世纪优秀人才支持计划项目(NCET-04-0906
NCET-06-0818)
教育部高校科技创新工程重大项目培育资金(706050)
四川省杰出青年学科带头人基金后续资助项目(05ZQ026-038)
四川省基础研究项目(07JY029-016
07JY029-017)
四川省重点建设学科项目(SZD0418)
关键词
间接免疫荧光
石蜡切片
鸭病毒性肠炎病毒
检测
抗原定位
indirect immuno-fluorescent staining
paraffin section
duck enteritis virus
detection
antigen location
