摘要
超速离心技术是目前分离亚细胞器最有效、最常用的一项技术。而高质量溶酶体的获得在自噬溶酶体途径的相关研究中尤为关键。本文旨在将二者运用于本科实验教学中,提高学生的科研创新思维能力。方法 本研究以Nycodenz作为密度梯度介质分离大鼠黑质组织中CMA激活型溶酶体,利用免疫印迹试验检测溶酶体的纯度,底物结合与摄取试验确定其活性,通过检测β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶的释放量评价其完整性。结果 使用该方法提取的CMA激活型溶酶体位于Nycodenz梯度介质的P1层;6-OHDA处理后P1层溶酶体的CMA活性显著提高;且在整个提取过程中溶酶体破损率低于10%。结论 该实验对研究自噬-溶酶体途径在相关疾病发生发展中的作用具有重要意义,同时在教学实验中可以使学生更深入、系统地理解并掌握超速离心和亚细胞器分离技术,有利于培养学生的科研思维,促进教学与科研的相互融合。
基金
2022年江苏省大型科学仪器开放共享自主研究课题(配套)(KY14092202)。
作者简介
付涵予(1987—),女,博士,讲师,从事重大脑病分子机制研究。
