摘要
构建靶向DPPA2基因构建的特异性siRNA重组质粒,筛选出能高效抑制DPPA2基因表达的siRNA重组质粒。 方法 设计并构建针对DPPA2的特异性siRNA重组质粒,经酶切和DNA测序鉴定后,用脂质体转染法将沉默基因导入SGC-7901细胞中,用实时荧光定量PCR方法和Western Blot方法分别检测转染前后DPPA2 mRNA水平和DPPA2蛋白表达水平。 结果RT-PCR结果显示DPPA2 mRNA在SGC7901细胞中呈阳性表达,相对表达量68±7%,空载体转染组的相对表达量为61±9%,DPPA2基因沉默组的相对表达量为22±4%。WesternBlot结果显示转染siRNA组与未转染组和空载体转染组之间有显著性差异,蛋白抑制率高达75.5%。结论 合理设计的特异性siRNA重组质粒可大幅度下调DPPA2 mRNA水平,能有效抑制DPPA2蛋白表达。
基金
河南省高等学校青年骨干教师培养计划项目(2017GGJS285)
河南省科技厅科技攻关项
(182102310083)
漯河市科技创新项目(20181000008)
河南漯河医学高等专科学校创新创业发展能力提升工程项目(2019LYZKYZD008)。
作者简介
通讯作者:徐纪伟,副教授,研究方向为肿瘤治疗和神经修复。
