摘要
目的探讨益气养阴活血方通过调控Kelch样ECH关联蛋白1(recombinant Kelch like ECH associated protein 1,Keap1)/核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf2)/抗氧化反应原件(antioxidant response ele-ment,ARE)信号通路对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠的肾脏保护作用机制。方法清洁级雄性SD大鼠50只,适应性喂养1周后,随机分为5组:空白组、模型组、缬沙坦(代文)组、益气养阴活血方等剂量(等剂量)组及高剂量(高剂量)组,每组10只。除空白组外各组均应用高脂高糖喂养,联合单次注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)建立DN大鼠模型。除去造模失败5只,死亡5只,每组剩余8只。造模成功后空白组和模型组灌服生理盐水,中药两组均灌服益气养阴活血方颗粒剂,代文组按8.33mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,6周后留取大鼠24小时尿液、血液和肾脏组织。生化检测各组大鼠24h尿总蛋白定量(24-UTP)、血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)、白蛋白(ALB)、谷丙转氨酶(ALT)、葡糖糖(GLU)、总胆固醇(CHO)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL);HE染色光镜观察肾组织病理改变;PCR法检测大鼠肾脏keap1、Nrf2、HO-1mRNA表达水平;蛋白免疫印迹(Western Blot)检测肾组织中keap1、Nrf2、HO-1蛋白水平;ELISA法检测血清Keap1、Nrf2、HO-1水平。结果生化指标:与空白组对比,模型组24hUTP、Scr、BUN、ALT、GLU、CHO及TG均明显升高(P<0.05或P<0.01),ALB、HDL明显降低(P<0.05);与模型组对比,代文组及中药两组24hUTP、Scr、BUN、ALT、GLU、CHO及TG均降低(P<0.05或P<0.01),ALB、HDL升高(P<0.05);与代文组对比,等剂量组、高剂量组BUN降低(P<0.05)。肾脏病理:与正常组对比,模型组大鼠肾脏组织多见肾小管上皮细胞气球样变性,可见胞质空泡化以及间质纤维化,并多见血管瘀血、扩张;与模型组对比,代文组及中药两组肾小管扩张、间质纤维化、血管瘀血等情况均有改善。PCR:与空白组对比,模型组Keap1 mRNA表达升高,Nrf2 mRNA、HO-1 mRNA表达降低(P<0.05);与模型组对比,代文组及中药两组Keap1 mRNA表达水平降低,Nrf2 mRNA、HO-1 mRNA表达升高(P<0.05或P<0.01);与代文组对比,等剂量组、高剂量组Nrf2 mRNA表达升高(P<0.05)。WB:与空白组对比,模型组大鼠肾脏Keap1蛋白升高,Nrf2、HO-1蛋白降低(P<0.001);与模型组对比,代文组及中药两组Keap1蛋白降低,Nrf2、HO-1蛋白升高(P<0.001);与代文组对比,等剂量组、高剂量组Nrf2蛋白升高(P<0.05)。Elisa:与空白组对比,模型组大鼠血清Keap1水平升高,Nrf2、HO-1水平降低(P<0.001);与模型组对比,代文组与中药两组血清Keap1水平降低,Nrf2、HO-1蛋白升高(P<0.001);与代文组对比,高剂量组血清Nrf2水平升高(P<0.05)。结论益气养阴活血方可能通过调控DN大鼠肾组织Keap1/Nrf2/ARE信号通路,从而改善上述生化指标,增强机体抗氧化应激能力,减轻肾脏病理损害,延缓肾纤维化。
出处
《时珍国医国药》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第5期1049-1052,共4页
Lishizhen Medicine and Materia Medica Research
基金
国家自然科学基金(82074493)
河南省自然科学基金面上项目(20230041026)
河南省中医药学科领军人才项目(豫卫中医函(2021)8号)
作者简介
宋珂(1994-),女(汉族),河南新乡人,河南中医药大学在读博士研究生,硕士学位,主要从事小儿肾脏病的中西医研究工作;通讯作者:宋纯东(1967-),男(汉族),河南民权人,河南中医药大学第一附属医院主任医师,教授,博士研究生导师,博士学位,主要从事肾小球疾病的中西医诊治机制研究工作.
