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快速检测小反刍兽疫病毒RT-LAMP方法的建立
被引量：
23
1
作者
李伟
李刚
+4 位作者
范晓娟
张坤
贾风琴
史利军
Hermann Unger
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第5期374-378,共5页
本研究采用一步法反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP)建立了一种快速、灵敏、高度特异的检测小反刍兽疫病毒(PPRV)的方法。针对PPRV-N基因保守区域设计4条引物,在Bst大片段聚合酶的作用下,可以实现DNA的梯状等温扩增。优化RT-LAMP的反...
本研究采用一步法反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP)建立了一种快速、灵敏、高度特异的检测小反刍兽疫病毒(PPRV)的方法。针对PPRV-N基因保守区域设计4条引物,在Bst大片段聚合酶的作用下,可以实现DNA的梯状等温扩增。优化RT-LAMP的反应体系,并检验其灵敏性、特异性。一步法RT-LAMP检测方法从核酸抽提到检测结果出现仅需70 min,该方法具有良好的特异性,与同属的犬瘟热病毒无交叉反应,灵敏度是RT-PCR的1 000倍,是巢式RT-PCR的100倍。结果证明,RT-LAMP方法可快速、灵敏、特异、经济地检测PPRV,在基层和实验室都具有良好的应用前景。
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关键词
小反刍兽疫病毒
RT—LAMP
核酸检测
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职称材料
小反刍兽疫病毒N基因重组杆状病毒的构建及间接ELISA抗体检测方法的建立
被引量：
9
2
作者
李伟
李刚
+3 位作者
吴晓东
邱文英
张坤
Hermann Unger
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第9期1147-1153,共7页
本研究旨在建立基于真核表达的小反刍兽疫病毒(PPRV)N蛋白的诊断小反刍兽疫的间接ELISA方法。利用Bac-to-Bac杆状病毒-昆虫表达系统,构建含有PPRV N基因的重组供体质粒pFastBacHTA-N,转化E.coliDH10Bac感受态细胞,得到重组穿梭质粒pBacm...
本研究旨在建立基于真核表达的小反刍兽疫病毒(PPRV)N蛋白的诊断小反刍兽疫的间接ELISA方法。利用Bac-to-Bac杆状病毒-昆虫表达系统,构建含有PPRV N基因的重组供体质粒pFastBacHTA-N,转化E.coliDH10Bac感受态细胞,得到重组穿梭质粒pBacmid-PPRV-V,转染昆虫细胞Sf21,获得含有PPRV N基因的重组杆状病毒。用重组病毒感染昆虫细胞后,SDS-PAGE鉴定出60ku左右的表达蛋白,Western blot检测该蛋白具有很好的反应原性。以重组Bacmid-PPRV-N蛋白作为包被抗原,建立间接ELISA检测方法。临床检测来自西藏疫区的37份山羊血清和来自青海省非疫区的92份山羊血清,与法国蒙彼利埃农学发展研究国际合作中心(CIRAD-EMVT)提供的竞争ELISA试剂盒相比较,特异性为96.2%,敏感性为100%,二者的符合率达到96.9%。结果表明本研究建立的间接ELISA方法可以很好地用于小反刍兽疫的临床诊断。
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关键词
小反刍兽疫病毒
杆状病毒
昆虫细胞
间接ELISA
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职称材料
题名
快速检测小反刍兽疫病毒RT-LAMP方法的建立
被引量：
23
1
作者
李伟
李刚
范晓娟
张坤
贾风琴
史利军
Hermann Unger
机构
中国
农业
科学院北京畜牧兽医研究所
动物营养学国家重点
实验室
fao/iaea农业生物技术实验室
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第5期374-378,共5页
基金
“十一五”国家科技支撑计划(2006BAD06A13-4)
国家“863”计划(2008AA10Z411)
+1 种基金
FAO/IAEA项目(14515-0,R1)
“948”项目(2007-G57-C)
文摘
本研究采用一步法反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP)建立了一种快速、灵敏、高度特异的检测小反刍兽疫病毒(PPRV)的方法。针对PPRV-N基因保守区域设计4条引物,在Bst大片段聚合酶的作用下,可以实现DNA的梯状等温扩增。优化RT-LAMP的反应体系,并检验其灵敏性、特异性。一步法RT-LAMP检测方法从核酸抽提到检测结果出现仅需70 min,该方法具有良好的特异性,与同属的犬瘟热病毒无交叉反应,灵敏度是RT-PCR的1 000倍,是巢式RT-PCR的100倍。结果证明,RT-LAMP方法可快速、灵敏、特异、经济地检测PPRV,在基层和实验室都具有良好的应用前景。
关键词
小反刍兽疫病毒
RT—LAMP
核酸检测
Keywords
PPRV
RT-LAMP
nucleic acid detection
分类号
S852.659.5 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
小反刍兽疫病毒N基因重组杆状病毒的构建及间接ELISA抗体检测方法的建立
被引量：
9
2
作者
李伟
李刚
吴晓东
邱文英
张坤
Hermann Unger
机构
中国
农业
科学院北京畜牧兽医研究所动物分子营养学国家重点
实验室
中国动物卫生与流行病学中心外来病诊断中心
fao/iaea农业生物技术实验室
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第9期1147-1153,共7页
基金
国家高技术研究发展计划(863计划)(2008AA10Z411)
"十一五"国家科技支持撑计划(2006BAD06A13-4)
+2 种基金
"948"项目(2007-G57-C)
FAO/IAE(14515-0
R1)
文摘
本研究旨在建立基于真核表达的小反刍兽疫病毒(PPRV)N蛋白的诊断小反刍兽疫的间接ELISA方法。利用Bac-to-Bac杆状病毒-昆虫表达系统,构建含有PPRV N基因的重组供体质粒pFastBacHTA-N,转化E.coliDH10Bac感受态细胞,得到重组穿梭质粒pBacmid-PPRV-V,转染昆虫细胞Sf21,获得含有PPRV N基因的重组杆状病毒。用重组病毒感染昆虫细胞后,SDS-PAGE鉴定出60ku左右的表达蛋白,Western blot检测该蛋白具有很好的反应原性。以重组Bacmid-PPRV-N蛋白作为包被抗原,建立间接ELISA检测方法。临床检测来自西藏疫区的37份山羊血清和来自青海省非疫区的92份山羊血清,与法国蒙彼利埃农学发展研究国际合作中心(CIRAD-EMVT)提供的竞争ELISA试剂盒相比较,特异性为96.2%,敏感性为100%,二者的符合率达到96.9%。结果表明本研究建立的间接ELISA方法可以很好地用于小反刍兽疫的临床诊断。
关键词
小反刍兽疫病毒
杆状病毒
昆虫细胞
间接ELISA
Keywords
Peste des Petitis Ruminants Virus
baculovirus
insect cells
indirect ELISA
分类号
S852.659.5 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
快速检测小反刍兽疫病毒RT-LAMP方法的建立
李伟
李刚
范晓娟
张坤
贾风琴
史利军
Hermann Unger
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009
23
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
小反刍兽疫病毒N基因重组杆状病毒的构建及间接ELISA抗体检测方法的建立
李伟
李刚
吴晓东
邱文英
张坤
Hermann Unger
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
9
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职称材料
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