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定点突变提高IL-4免疫毒素对淋巴瘤的选择性和杀伤活性
1
作者
崔京霞
纪剑飞
+1 位作者
吕安国
吴文芳
《高等学校化学学报》
SCIE
EI
CAS
CSCD
北大核心
2005年第5期874-879,F006,共7页
采用软件分析选择与IL-4分子结合与活性相关的重要位点13T,121R,通过定点突变得到IL-4突变基因cpIL4(13D121E),将其与绿脓杆菌外毒素突变基因PE38KDEL融合,成功地构建了编码免疫毒素cpIL4(13D121E)-PE38KDEL的融合基因.该基因在原核表...
采用软件分析选择与IL-4分子结合与活性相关的重要位点13T,121R,通过定点突变得到IL-4突变基因cpIL4(13D121E),将其与绿脓杆菌外毒素突变基因PE38KDEL融合,成功地构建了编码免疫毒素cpIL4(13D121E)-PE38KDEL的融合基因.该基因在原核表达系统中得到了高效表达,表达量占细胞全蛋白的30%以上.表达产物经亲和色谱和阴离子交换色谱纯化后,进行细胞毒性实验,证明其对表达型IL-4受体的淋巴瘤细胞Daudi具有良好的细胞毒作用,活性是同类型IL-4免疫毒素的2倍,而对表达型IL-4受体的内皮细胞活性较低.
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关键词
免疫毒素
白细胞介素-4(IL-4)
绿脓杆菌外毒素
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职称材料
运用一步化体外转录-翻译系统筛查基因突变的新技术
2
作者
刘敬忠
冯继农
+2 位作者
王立荣
刘强
SteveS.Sommer
《高技术通讯》
EI
CAS
CSCD
1997年第7期5-9,共5页
报道了一种筛查基因突变的新技术──PCR结合一步化体外转录－翻译系统。该技术包括：（1）PCR扩增靶DNA片段，并使DNA产物的一端或两端带上T7T1序列（T1：翻译起始信号，CCACCATG）；（2）以该PCR产物为模板，利用一步化体外转录－翻...
报道了一种筛查基因突变的新技术──PCR结合一步化体外转录－翻译系统。该技术包括：（1）PCR扩增靶DNA片段，并使DNA产物的一端或两端带上T7T1序列（T1：翻译起始信号，CCACCATG）；（2）以该PCR产物为模板，利用一步化体外转录－翻译系统（CoupledInVitroTranscription－TranslationSystem）合成相应肽链；（3）用SDS－PAGE及高分辨pH梯度PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）分离分析多肽产物，通过异常电泳图谱而发现基因突变。本文以已知突变的乙型血友病（HemophiaB，即HB）患者DNA及正常人DNA为标本，建立了上述技术方法。4个HB患者FIX基因外显子H内的无突变，在SDS-PAGE的射自显影图谱上全部显示出变短了的多肽区带。11个在外显子E中有错义突变的标本中，有10例可用pH梯度PAGE检出。说明运用PCR及体外一步化转录－翻译系统，并结合SDS－PAGE或PH梯度PAGE，是一种能快速、灵敏地筛查基因突变的技术，值得进一步研究推广。
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关键词
体外转录
翻译
乙型血友病
基因突变
凝胶电泳
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职称材料
题名
定点突变提高IL-4免疫毒素对淋巴瘤的选择性和杀伤活性
1
作者
崔京霞
纪剑飞
吕安国
吴文芳
机构
中国科学院沈阳应用生态研究所
beckmanresearchinstitute
出处
《高等学校化学学报》
SCIE
EI
CAS
CSCD
北大核心
2005年第5期874-879,F006,共7页
基金
沈阳市科技局科学基金项目(批准号:20011221-03)
中国科学院沈阳应用生态研究所与屹昌科技集团股份有限公司合作项目资助.
文摘
采用软件分析选择与IL-4分子结合与活性相关的重要位点13T,121R,通过定点突变得到IL-4突变基因cpIL4(13D121E),将其与绿脓杆菌外毒素突变基因PE38KDEL融合,成功地构建了编码免疫毒素cpIL4(13D121E)-PE38KDEL的融合基因.该基因在原核表达系统中得到了高效表达,表达量占细胞全蛋白的30%以上.表达产物经亲和色谱和阴离子交换色谱纯化后,进行细胞毒性实验,证明其对表达型IL-4受体的淋巴瘤细胞Daudi具有良好的细胞毒作用,活性是同类型IL-4免疫毒素的2倍,而对表达型IL-4受体的内皮细胞活性较低.
关键词
免疫毒素
白细胞介素-4(IL-4)
绿脓杆菌外毒素
Keywords
Immunotoxin
Interleukin-4(IL-4R)
Pseudomonas exotoxin A
分类号
Q784 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
运用一步化体外转录-翻译系统筛查基因突变的新技术
2
作者
刘敬忠
冯继农
王立荣
刘强
SteveS.Sommer
机构
首都医科大学附属北京红十字朝阳医院
Dept.ofMolecularGeneticsandMolecularDiagnosis
出处
《高技术通讯》
EI
CAS
CSCD
1997年第7期5-9,共5页
文摘
报道了一种筛查基因突变的新技术──PCR结合一步化体外转录－翻译系统。该技术包括：（1）PCR扩增靶DNA片段，并使DNA产物的一端或两端带上T7T1序列（T1：翻译起始信号，CCACCATG）；（2）以该PCR产物为模板，利用一步化体外转录－翻译系统（CoupledInVitroTranscription－TranslationSystem）合成相应肽链；（3）用SDS－PAGE及高分辨pH梯度PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）分离分析多肽产物，通过异常电泳图谱而发现基因突变。本文以已知突变的乙型血友病（HemophiaB，即HB）患者DNA及正常人DNA为标本，建立了上述技术方法。4个HB患者FIX基因外显子H内的无突变，在SDS-PAGE的射自显影图谱上全部显示出变短了的多肽区带。11个在外显子E中有错义突变的标本中，有10例可用pH梯度PAGE检出。说明运用PCR及体外一步化转录－翻译系统，并结合SDS－PAGE或PH梯度PAGE，是一种能快速、灵敏地筛查基因突变的技术，值得进一步研究推广。
关键词
体外转录
翻译
乙型血友病
基因突变
凝胶电泳
Keywords
PCR, In vitro Transcription-Translation, Hemophilia B, SDS-PAGE, pH Gradient PAGE
分类号
Q343.13 [生物学—遗传学]
R319 [医药卫生—基础医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
定点突变提高IL-4免疫毒素对淋巴瘤的选择性和杀伤活性
崔京霞
纪剑飞
吕安国
吴文芳
《高等学校化学学报》
SCIE
EI
CAS
CSCD
北大核心
2005
0
在线阅读
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职称材料
2
运用一步化体外转录-翻译系统筛查基因突变的新技术
刘敬忠
冯继农
王立荣
刘强
SteveS.Sommer
《高技术通讯》
EI
CAS
CSCD
1997
0
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职称材料
已选择
0
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参考文献
引证文献
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