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红嘴鸥TLR7基因克隆与生物信息学分析 被引量:4
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作者 常华 段纲 +5 位作者 阮谦 罗倩敏 余琬玲 刘清琦 黄翠琴 项勋 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第1期43-52,共10页
【目的】克隆野生鸟类红嘴鸥Toll样受体7(TLR7)基因,并对其编码蛋白进行生物信息学分析,为后期TLR7蛋白的抗病毒活性研究做准备。【方法】采用cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends,RACE)扩增红嘴鸥TLR7基因全序列,... 【目的】克隆野生鸟类红嘴鸥Toll样受体7(TLR7)基因,并对其编码蛋白进行生物信息学分析,为后期TLR7蛋白的抗病毒活性研究做准备。【方法】采用cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends,RACE)扩增红嘴鸥TLR7基因全序列,通过生物信息学软件分析TLR7基因序列、稀有密码子、相似性及其编码蛋白的理化性质、跨膜区域、信号肽、N-糖基化位点、磷酸化位点和亚细胞定位,分别利用SOPMA和SWISS-MODEL软件预测TLR7蛋白的二级结构和三级结构。【结果】试验成功克隆红嘴鸥TLR7基因(GenBank登录号:MZ668652),全长1720 bp,开放阅读框(ORF)大小为1182 bp,存在39个稀有密码子,其中含8个连续稀有密码子,编码393个氨基酸;红嘴鸥TLR7基因与GenBank中原鸡、红腹角雉、鹌鹑、绿头鸭、黑天鹅、山雀、白鹭、帝企鹅、红喉潜鸟和巴布亚企鹅的TLR7基因相似性分别为85.7%、84.9%、85.4%、87.0%、87.8%、86.8%、91.0%、93.1%、93.1%和93.1%。系统进化树结果显示,其与白鹭的亲缘关系最近。TLR7蛋白分子式为C_(2080)H_(3256)N_(556)O_(567)S_(19),分子质量约为63 ku,理论等电点为9.25;该蛋白不存在跨膜结构和信号肽,含有6个N-糖基化位点和33个磷酸化位点,是疏水性蛋白,主要存在于细胞质中;TLR7蛋白二级结构主要以α-螺旋为主,约占48.09%,其次为无规则卷曲(32.06%)、延伸链(13.23%)和β-转角(6.62%),TLR7蛋白的三级结构与二级结构一致,且与模型蛋白人TLR7蛋白相似性为68.78%。【结论】红嘴鸥TLR7基因与白鹭进化关系较近,含有8个连续稀有密码子,体外表达较难,研究为进一步探索红嘴鸥TLR7蛋白抗病毒免疫机制提供重要参考。 展开更多
关键词 红嘴鸥 Toll样受体7(TLR7) 克隆 生物信息学分析
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大孔树脂纯化红腰豆总黄酮的工艺优化及其体外抗氧化活性比较 被引量:8
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作者 黎英 曾珍清 +3 位作者 张薇 郑兰香 李子月 陈雪梅 《中国粮油学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第11期128-136,143,共10页
以红腰豆总黄酮粗提液为原料,研究大孔树脂对红腰豆黄酮的纯化工艺和效果,比较了8种树脂对红腰豆总黄酮的静态吸附和解吸性能,对AB-8型大孔树脂分离纯化红腰豆总黄酮进行了单因素、BoxBenhnken中心组合设计和响应面法优化试验,并考察了... 以红腰豆总黄酮粗提液为原料,研究大孔树脂对红腰豆黄酮的纯化工艺和效果,比较了8种树脂对红腰豆总黄酮的静态吸附和解吸性能,对AB-8型大孔树脂分离纯化红腰豆总黄酮进行了单因素、BoxBenhnken中心组合设计和响应面法优化试验,并考察了红腰豆总黄酮纯化前后体外抗氧效果。结果表明:AB-8树脂为纯化红腰豆总黄酮的最佳树脂,其最佳的吸附工艺条件为:上样质量浓度4.0 mg/m L,上样液pH 6.3,上样流速2.0 m L/min,上样体积5.0 BV,在此条件下吸附率可达(98.03±0.30)%;最佳的解吸工艺条件为乙醇体积分数75%,洗脱流速3.0 m L/min,洗脱体积2.0 BV,在此条件下解吸率可达(94.52±0.24)%。纯化后红腰豆总黄酮纯度提高了约2.85倍,纯化前DPPH·、·OH和O-2·的清除率IC50值分别为1.18、1.40、6.51 mg/m L,纯化后分别为0.37、0.82、1.77 mg/m L,纯化后红腰豆总黄酮提取物的体外抗氧化活性明显增强。 展开更多
关键词 红腰豆 总黄酮 大孔树脂 响应面 抗氧化活性
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艾叶水煎醇提液对肉兔血液及生化指标的影响 被引量:7
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作者 王华 周孝琼 +3 位作者 陈慧芳 李炳贵 张燕 潘灿阳 《动物医学进展》 北大核心 2017年第8期67-70,共4页
为研究艾叶水煎醇提液不同剂量对肉兔血液及生化指标的影响,将24只断奶体重相当的伊拉兔,随机分为A组、B组、C组和D组,每组6只,其中A组、B组、C组肉兔每天每只灌服艾叶水煎醇提液的量分别为2.0、3.0、4.0mL,D为生理盐水对照组,总灌胃量... 为研究艾叶水煎醇提液不同剂量对肉兔血液及生化指标的影响,将24只断奶体重相当的伊拉兔,随机分为A组、B组、C组和D组,每组6只,其中A组、B组、C组肉兔每天每只灌服艾叶水煎醇提液的量分别为2.0、3.0、4.0mL,D为生理盐水对照组,总灌胃量为4.0mL。结果显示,与D组比较,A组、B组、C组白细胞(WBC)、中性粒细胞百分比(NEUT,%)、中性粒细胞(NEUT)、淋巴细胞/单核细胞百分比(LYMPH/MONO,%)和谷草转氨酶(AST)差异极显著(P<0.01)。表明艾叶水煎醇提液可以显著提升肉兔血液中白细胞数量,对肉兔血清谷草转氨酶(AST)的活性有一定降低作用,具有提高动物机体免疫力的功效。 展开更多
关键词 艾叶 水煎醇提液 血液指标 生化指标 肉兔
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猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因重组DNA疫苗的构建及其免疫效果评价 被引量:3
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作者 魏春华 黄夏玲 +8 位作者 杨圆 何乐 林志锋 徐叶 黄文琳 柳开隆 戴爱玲 杨小燕 刘建奎 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2022年第7期17-25,共9页
【目的】利用DNA改组技术(DNA shuffling)对不同谱系的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5基因进行体外重组,构建具有良好交叉保护作用的DNA疫苗,为研制新型PRRSV疫苗提供参考。【方法】利用DNA改组技术对PRRSV谱系1、3、5.1、8.7毒株的... 【目的】利用DNA改组技术(DNA shuffling)对不同谱系的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5基因进行体外重组,构建具有良好交叉保护作用的DNA疫苗,为研制新型PRRSV疫苗提供参考。【方法】利用DNA改组技术对PRRSV谱系1、3、5.1、8.7毒株的ORF5基因进行体外突变重组,筛选去除信号肽的重组突变体。将重组突变体与真核表达载体pCAGGS-HA连接,构建重组表达质粒并进行酶切和测序鉴定,经脂质体转染MARC-145细胞,利用间接免疫荧光试验(IFA)和Western blotting试验检测目的蛋白的表达情况。将重组质粒pCA-ΔORF5-8和pCA-ΔORF5-46(ORF5基因重组的DNA疫苗)免疫小鼠,试验同时设pCAGGS-HA空载体组、PBS空白对照组、弱毒疫苗组(经典弱毒疫苗Ingelvac PRRS MLV,MLV组)和pCA-ORF5-MLV组(ORF5基因来自Ingelvac PRRS MLV),评估其免疫效果。【结果】筛选到2个去除信号肽的重组突变体(ΔORF5-8和ΔORF5-46)。成功构建重组表达质粒pCA-ΔORF5-8和pCA-ΔORF5-46,其可在MARC-145细胞中表达GP5蛋白。与pCAGGS-HA空载体组和PBS空白对照组相比,pCA-ΔORF5-8和pCA-ΔORF5-46组免疫小鼠血清白介素4(IL-4)和干扰素γ(INF-γ)含量均极显著提高(P<0.01),脾淋巴细胞增殖能力均极显著增强(P<0.01),均能产生针对GP5蛋白的抗体,血清中和试验表明,免疫组小鼠血清能对异源毒株产生交叉中和抗体(抗体平均滴度为10~16)。【结论】重组DNA疫苗pCA-ΔORF5-8和pCA-ΔORF5-46均能有效刺激并诱导机体产生细胞及体液免疫应答,具有良好的免疫原性。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5基因 DNA改组技术 重组DNA疫苗 交叉保护
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大孔树脂分离纯化状元豆黄酮及其抗油脂氧化研究 被引量:2
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作者 黎英 刘春艳 +4 位作者 潘银来 李子月 曾珍清 郑兰香 陈雪梅 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2016年第11期2155-2163,共9页
为研究大孔树脂对状元豆黄酮的纯化工艺条件和效果,以状元豆黄酮粗提液为原料,吸附率和解吸率为评价指标,比较6种不同树脂对状元豆黄酮的静态吸附和解吸性能,筛选出AB-8树脂进行分离状元豆黄酮,并考察了纯化前后状元豆黄酮对食用油脂(... 为研究大孔树脂对状元豆黄酮的纯化工艺条件和效果,以状元豆黄酮粗提液为原料,吸附率和解吸率为评价指标,比较6种不同树脂对状元豆黄酮的静态吸附和解吸性能,筛选出AB-8树脂进行分离状元豆黄酮,并考察了纯化前后状元豆黄酮对食用油脂(猪油和花生油)的抗氧化效果。结果表明:最佳工艺条件为上样质量浓度4.0 mg/m L,上样流速3.0 BV/h,上样体积140 m L,用60 m L 65%体积分数乙醇溶液(p H6.0)为洗脱剂,以2.0 BV/h流速洗脱,得到AB-8树脂对状元豆黄酮的吸附率和解吸率分别为93.06%和95.12%,回收率为89.04%,得率为52.46%,纯度提高了约2.91倍。状元豆黄酮对油脂有一定的抗氧化效果,对猪油氧化抑制效果好于花生油,且纯化后抗氧化效果明显增强,是一种潜在的天然抗氧化剂资源。 展开更多
关键词 状元豆 黄酮 大孔吸附树脂 纯化 油脂 抗氧化
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漳平水仙茶饼多酚的纯化及其体外活性研究 被引量:1
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作者 黎英 曾珍清 +3 位作者 张薇 郑兰香 陈雪梅 石小琼 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2017年第8期1456-1463,共8页
为了研究大孔树脂对水仙茶饼多酚的纯化效果,试验以水仙茶饼多酚粗提液为原料,比较了9种不同型号大孔树脂对水仙茶饼粗多酚的静态吸附和解吸性能,再以吸附率和解吸率为指标通过静态、动态吸附解吸试验。考察了各因素对LX-28树脂纯化水... 为了研究大孔树脂对水仙茶饼多酚的纯化效果,试验以水仙茶饼多酚粗提液为原料,比较了9种不同型号大孔树脂对水仙茶饼粗多酚的静态吸附和解吸性能,再以吸附率和解吸率为指标通过静态、动态吸附解吸试验。考察了各因素对LX-28树脂纯化水仙饼茶粗多酚的影响,最后探讨了纯化前后的水仙茶饼多酚的体外抗氧化和抑菌效果。结果表明:最佳纯化树脂LX-28,最佳吸附和解吸条件为1.5 mg/mL的质量浓度的水仙茶饼多酚粗提取液(pH4.0~5.0)以2.0 mL/min的流速上样95 mL,吸附平衡后去离子水冲洗至无色,再用70 mL,65%体积分数乙醇溶液(pH6.0)为洗脱剂,以3.0 mL/min流速洗脱,在此纯化条件下LX-28树脂对水仙茶饼多酚的吸附率和解吸率分别为(93.587±0.379)%和(95.330±1.282)%,树脂可重复使用4次,纯度提高了约3.04倍;对DPPH·和ABTS+·自由基清除率的IC50值分别从纯化前的1.279、3.682 mg/mL降低到0.295、1.525 mg/mL;对供试的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、米根霉和紫红曲霉均有不同程度的抑制作用,纯化后的水仙茶饼多酚的抑菌效果优于纯化前。 展开更多
关键词 漳平水仙茶饼 多酚 大孔树脂 纯化 抗氧化 抑菌
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鱼精蛋白对大肠杆菌急性感染小鼠的保护作用研究 被引量:3
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作者 娄欣宇 倪敬轩 林炜明 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期506-511,共6页
为探究鱼精蛋白(PP)对大肠杆菌(E.coli)急性感染小鼠的保护作用,本研究将20只小鼠随机分为2组,每组10只,PP组皮下注射PP 100μg/0.2 mL/只,对照组皮下注射等体积生理盐水,7 d后采用致病性E.coli攻菌,观察小鼠的发病和死亡情况;同时,将1... 为探究鱼精蛋白(PP)对大肠杆菌(E.coli)急性感染小鼠的保护作用,本研究将20只小鼠随机分为2组,每组10只,PP组皮下注射PP 100μg/0.2 mL/只,对照组皮下注射等体积生理盐水,7 d后采用致病性E.coli攻菌,观察小鼠的发病和死亡情况;同时,将16只小鼠随机分为2组,每组8只,按照上述方法皮下注射PP后攻菌,分别于攻菌12 h,24 h采集眼眶血,迫杀后无菌采集部分小鼠肝脏、脾脏,采用活菌计数法检测攻菌后小鼠外周血、脾脏、肝脏中的细菌载量,利用试管定量显色基质法检测小鼠外周血脂多糖(LPS)含量,利用动物生化分析仪进行血液生化检测;采用qRT-PCR方法检测攻菌后48 h小鼠脾脏中IFN-β、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、TLR4、NF-κB、IRF3、IRF7等炎症相关因子的mRNA转录水平。结果显示,与对照组比较,PP能极显著提高攻菌小鼠的存活率(p<0.01);亚剂量攻菌后,PP能极显著降低小鼠外周血、脾脏、肝脏中的细菌载量,极显著降低小鼠外周血中LPS含量以及血清谷丙转氨酶(ALT)含量(p<0.01)。同时,PP能显著降低攻菌所致的与LPS-TLR4通路相关的细胞因子(TLR4、NF-κB、IL-1β、IL-6、IRF7、IFN-β)mRNA转录水平(p<0.05)。以上结果表明PP注射后7 d可对E.coli急性感染小鼠提供较好的保护作用,这可能与PP通过增强机体对细菌清除能力,从而有效控制E.coli感染后的病程发展有关。本研究为PP临床防治E.coli急性感染的应用潜力探究提供了实验依据。 展开更多
关键词 鱼精蛋白 炎症反应 早期免疫 大肠杆菌
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