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红松PkSERKs基因克隆及在不同类型愈伤组织中的表达分析
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作者 梁艳 王宇含 +3 位作者 赵雪莹 马天意 贯春雨 周璐 《中南林业科技大学学报》 北大核心 2025年第8期1-11,94,共12页
【目的】通过克隆红松PkSERKs基因,分析其表达特性,为研究该基因在红松体胚发生中的功能奠定基础。【方法】克隆红松PkSERK1~3基因的编码区序列(CDS)全长,采用生物信息学分析方法分析其蛋白结构、理化性质、进化关系,利用绿色荧光蛋白(G... 【目的】通过克隆红松PkSERKs基因,分析其表达特性,为研究该基因在红松体胚发生中的功能奠定基础。【方法】克隆红松PkSERK1~3基因的编码区序列(CDS)全长,采用生物信息学分析方法分析其蛋白结构、理化性质、进化关系,利用绿色荧光蛋白(GFP)标记技术进行亚细胞定位,同时采用实时荧光定量PCR(qRTPCR)技术研究3个红松PkSERKs基因在7种类型红松愈伤组织中的表达模式。【结果】成功克隆PkSERK1、PkSERK2和PkSERK3基因,其cDNA全长分别为1824、1887和1437 bp,分别编码607、628和448个氨基酸。PkSERK1为酸性的亲水性稳定蛋白,PkSERK2为酸性的亲水性不稳定蛋白,PkSERK3为碱性的亲水性不稳定蛋白;PkSERK1和PkSERK2有1个信号肽,而PkSERK3没有信号肽;3个蛋白均为跨膜蛋白。PkSERK1、PkSERK2、PkSERK3分别与杉木ClSERK1~3、茶树CsSERK1-like、柳杉CjSERK3亲缘关系最近。PkSERK1和PkSERK2定位在细胞膜,PkSERK3定位在细胞膜和细胞核。qRT-PCR分析结果表明,PkSERK1基因在红松高胚性的愈伤组织和含球形胚的愈伤组织中均高表达;PkSERK2在褐化的愈伤组织中高表达;PkSERK3仅在高胚性的愈伤组织中高表达。【结论】从红松中克隆获得PkSERK1、PkSERK2、PkSERK3基因,PkSERK1可能在红松愈伤组织胚性的保持及早期球形胚分化中起作用,高水平的PkSERK2可能与红松胚性愈伤组织(Embryogenic callus,EC)褐化及球形胚分化有关,PkSERK3可能仅在红松愈伤组织胚性的保持中起作用。 展开更多
关键词 红松 体细胞胚发生 胚性愈伤组织 PkSERKs 基因克隆 表达分析
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