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一种新型具有纤溶活性的沙蚕金属蛋白酶的分离纯化及鉴定 被引量:13
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作者 邓志会 孙贺 +3 位作者 林岩 王国忠 金莉 洪敏 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期768-774,共7页
通过硫酸铵分级盐析、DEAE-Sepharose FF阴离子交换色谱、CM-Sepharose FF阳离子交换色谱和Sephacryl S-100 HR凝胶过滤色谱,从沙蚕体内分离纯化出一种新型的具有纤溶活性的金属蛋白酶,命名为NVMP.采用SDS-PAGE和MALDI-TOF MS质谱检测,... 通过硫酸铵分级盐析、DEAE-Sepharose FF阴离子交换色谱、CM-Sepharose FF阳离子交换色谱和Sephacryl S-100 HR凝胶过滤色谱,从沙蚕体内分离纯化出一种新型的具有纤溶活性的金属蛋白酶,命名为NVMP.采用SDS-PAGE和MALDI-TOF MS质谱检测,该酶是一种分子质量为28~32 kD的单链蛋白,等电聚焦电泳显示其等电点为8.0.NVMP酶活性被EGTA完全性抑制,表明其是一种典型的金属蛋白酶,最适温度为40℃,最适pH为6,Cu2+、Co2+和Zn2+可阻断其酶活性,而Ca2+和Mg2+可增强蛋白酶活性.经肽指纹图谱分析发现,NVMP是一种未知的新蛋白.NVMP可直接水解纤维蛋白,也可通过激活纤溶酶原转变成纤溶酶的方式,间接水解纤维蛋白.因此,NVMP对预防和治疗血栓性疾病具有一定的药用价值. 展开更多
关键词 沙蚕 金属蛋白酶 纯化与鉴定 纤维蛋白水解活性
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内质网应激介导白藜芦醇对心肌细胞肥大的保护作用 被引量:9
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作者 林岩 肖薇 +4 位作者 金莉 邓志会 李波 王国忠 刘吉成 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1721-1725,共5页
目的探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导的心肌细胞肥大的保护作用及与内质网应激的关系。方法利用ISO建立乳鼠心肌肥大细胞模型,分为正常对照组、ISO组,白藜芦醇干预组和白藜芦醇对照组。检测心肌细... 目的探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导的心肌细胞肥大的保护作用及与内质网应激的关系。方法利用ISO建立乳鼠心肌肥大细胞模型,分为正常对照组、ISO组,白藜芦醇干预组和白藜芦醇对照组。检测心肌细胞表面积和ANP基因表达;流式细胞仪检测细胞凋亡率;检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)和丙二醛(MDA)漏出量;实时定量PCR和Western blot分析GRP78和CHOP的基因和蛋白表达。结果 Res有效抑制ISO诱导的心肌细胞肥大和凋亡,表现为降低心肌细胞表面积和ANP基因表达,减少LDH、MDA漏出量和心肌细胞凋亡率,同时下调GRP78和CHOP的基因和蛋白表达。结论Res可能通过抑制内质网应激相关因子GRP78和CHOP表达发挥对心肌肥大的保护作用。 展开更多
关键词 心肌肥大 内质网应激 白藜芦醇 细胞凋亡 GRP78 CHOP
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PI3K/Akt通路在缺氧活化钙敏感受体介导的A549细胞转移中的作用 被引量:4
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作者 李光伟 王珺 +5 位作者 肖薇 金莉 李波 赵宇 张宁宁 汪娜 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期776-781,共6页
目的探讨PI3K/Akt信号通路在缺氧活化钙敏感受体(calcium sensing receptor,Ca SR)介导的A549及A549/DDP细胞转移中的作用。方法将处于对数生长期的A549及A549/DDP细胞随机分为对照组、缺氧组、缺氧+Gd Cl_3(Ca SR激动剂)组、缺氧+NPS21... 目的探讨PI3K/Akt信号通路在缺氧活化钙敏感受体(calcium sensing receptor,Ca SR)介导的A549及A549/DDP细胞转移中的作用。方法将处于对数生长期的A549及A549/DDP细胞随机分为对照组、缺氧组、缺氧+Gd Cl_3(Ca SR激动剂)组、缺氧+NPS2143(Ca SR抑制剂)组、缺氧+LY294002(PI3K通路抑制剂)+Gd Cl_3组。应用Western blot分析不同处理情况下,Ca SR、MMP-2及p-Akt蛋白在A549、A549/DDP细胞的表达水平;采用细胞划痕及Transwell小室方法,检测不同处理因素对细胞迁移和侵袭能力的影响;应用ELISA法,分析不同处理因素对A549及A549/DDP细胞分泌MMP-2蛋白的影响。结果与对照组比较,缺氧能够增强A549及A549/DDP细胞Ca SR的表达,增强细胞迁移能力,提高细胞及培养液中MMP-2蛋白表达水平、促进Akt蛋白的磷酸化,NPS2143能减弱缺氧的作用,Gd Cl_3放大缺氧的作用,而LY294002抑制缺氧和Gd Cl_3的上述作用。结论缺氧活化Ca SR促进A549及A549/DDP细胞转移,其机制可能涉及PI3K/Akt通路。 展开更多
关键词 钙敏感受体 A549细胞 缺氧 转移 磷脂酰肌醇-3激酶 磷酸化AKT
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钙敏感受体在胰岛素抵抗状态下肾动脉平滑肌细胞增殖和迁移中的作用 被引量:4
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作者 李光伟 李波 +3 位作者 金莉 邱丽萍 张亚珍 吴淑琴 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期62-68,共7页
目的探讨钙敏感受体(calcium sensing receptor,CaSR)在胰岛素抵抗状态下肾动脉平滑肌细胞(renal artery smooth muscle cell,RAMSC)增殖和迁移中的作用及机制。方法将对数生长期的RASMC随机分为:对照组、单纯模型组、模型+GdCl 3(CaSR... 目的探讨钙敏感受体(calcium sensing receptor,CaSR)在胰岛素抵抗状态下肾动脉平滑肌细胞(renal artery smooth muscle cell,RAMSC)增殖和迁移中的作用及机制。方法将对数生长期的RASMC随机分为:对照组、单纯模型组、模型+GdCl 3(CaSR激动剂)组、模型+NPS2143(CaSR抑制剂)组。应用α平滑肌肌动蛋白免疫组化染色鉴定RAMSC;Western blot检测CaSR、PCNA及MMP-2蛋白的表达;采用流式细胞术检测细胞增殖周期变化;应用Transwell小室法检测细胞迁移能力;应用ELISA法检测MMP-2蛋白的含量;应用激光共聚焦扫面显微镜技术检测细胞中钙离子浓度的变化。结果与对照组比较,模型组RAMSC CaSR蛋白表达增多,PCNA及细胞增殖指数增加,细胞穿膜数量及MMP-2表达增多,同时细胞内钙离子浓度升高。GdCl 3及NPS2143分别上调和下调胰岛素抵抗引起的上述作用。结论胰岛素抵抗活化的CaSR能够促进大鼠RASMC的增殖与迁移过程,细胞内钙离子在其中发挥重要作用。 展开更多
关键词 钙敏感受体 肾动脉平滑肌细胞 高糖 高胰岛素 增殖 迁移
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二氟甲基鸟氨酸对2型糖尿病大鼠心肌肥厚及内质网应激的影响 被引量:3
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作者 林岩 王珺 +4 位作者 肖薇 李波 金莉 廉洁 于水 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期500-503,共4页
目的研究二氟甲基鸟氨酸(difluoromethylornithine,DFMO)对2型糖尿病(T2DM)大鼠心肌肥厚的作用,以及对内质网应激蛋白GRP78和CHOP的影响。方法采用高糖高脂膳食负荷链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)单次腹腔注射,建立T2DM大鼠模型。实验... 目的研究二氟甲基鸟氨酸(difluoromethylornithine,DFMO)对2型糖尿病(T2DM)大鼠心肌肥厚的作用,以及对内质网应激蛋白GRP78和CHOP的影响。方法采用高糖高脂膳食负荷链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)单次腹腔注射,建立T2DM大鼠模型。实验大鼠分为正常对照组、T2DM模型组和DFMO治疗组,上述条件继续饲养12周。检测各组大鼠空腹血糖、心脏参数、心肌纤维化程度;测定MDA含量、SOD和T-AOC活性;检测GRP78和CHOP蛋白表达。结果 DFMO治疗后,降低T2DM大鼠空腹血糖和心脏参数(P<0.05),心肌间质纤维化程度下降(P<0.05),MDA含量降低,SOD和T-AOC活性增加。同时,DFMO治疗可以下调GRP78和CHOP蛋白表达水平(P<0.05)。结论 DFMO抑制T2DM大鼠心肌肥厚,机制与下调GRP78和CHOP蛋白表达,抑制内质网应激有关。 展开更多
关键词 2型糖尿病 心肌肥厚 二氟甲基鸟氨酸 GRP78 CHOP 内质网应激
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