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兔抗人FAM21多克隆抗体的制备与鉴定
1
作者
汤拓
卢彦基
+3 位作者
李文龙
王涛
洪鲜
邓志会
《中国免疫学杂志》
北大核心
2025年第6期1484-1489,共6页
目的:制备兔抗人FAM21多克隆抗体并分析抗体特异性。方法:以编码人FAM21全长基因的表达质粒为模板,PCR扩增其2431~3006碱基的核苷酸序列,连接至pGEX-6p-1原核表达载体,构建表达FAM21第811~1002氨基酸片段的pGEX-6p-1-FAM21重组表达质粒...
目的:制备兔抗人FAM21多克隆抗体并分析抗体特异性。方法:以编码人FAM21全长基因的表达质粒为模板,PCR扩增其2431~3006碱基的核苷酸序列,连接至pGEX-6p-1原核表达载体,构建表达FAM21第811~1002氨基酸片段的pGEX-6p-1-FAM21重组表达质粒。将重组质粒转化至BL21(DE3)感受态大肠杆菌中并进行诱导表达,用GST融合蛋白纯化磁珠纯化蛋白。将纯化后的GST融合蛋白作为抗原免疫新西兰兔,收集的抗血清经过含GST蛋白的琼脂糖柱进行纯化。在FAM21基因沉默的HeLa细胞中,通过Western blot和免疫荧光实验检测抗体的特异性。结果:成功构建pGEX-6p-1-FAM21原核表达质粒,并在BL21(DE3)大肠杆菌中成功诱导表达,纯化后的GST融合蛋白分子量约为50 kD,免疫新西兰兔后纯化的抗体滴度>1∶128000,并且具有较高的特异性。结论:成功构建了pGEX-6p-1-FAM21原核表达质粒,并制备了可用于Western blot和免疫荧光检测的兔抗人FAM21多克隆抗体。
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关键词
FAM21
原核表达
蛋白表达与纯化
多克隆抗体
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职称材料
WASH通过与核内不均一核糖核蛋白A1(hnRNP A1)的相互作用调控选择性剪接和基因转录
被引量：
3
2
作者
洪瑜
都晓辉
+2 位作者
洪鲜
王涛
邓志会
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第6期507-512,共6页
目的探讨Wiskott-Aldrich综合征蛋白和富含脯氨酸同源物(WASH)与核内不均一核糖核蛋白A1(hnRNP A1)的相互作用及其生物学功能.方法利用质谱鉴定、免疫共沉淀技术,研究WASH复合体核心成员WASH/FAM21与hnRNP A1相互作用.使用实时定量PCR检...
目的探讨Wiskott-Aldrich综合征蛋白和富含脯氨酸同源物(WASH)与核内不均一核糖核蛋白A1(hnRNP A1)的相互作用及其生物学功能.方法利用质谱鉴定、免疫共沉淀技术,研究WASH复合体核心成员WASH/FAM21与hnRNP A1相互作用.使用实时定量PCR检测WASH沉默细胞与对照细胞中端粒长度.使用RNA-Seq检测WASH沉默细胞与对照细胞转录谱.结果质谱鉴定结果显示包括hnRNP A1在内的多种hnRNP家族成员与FAM21-d219N相互作用.免疫沉淀结果验证了内源WASH/FAM21与hnRNP A1的相互作用.WASH沉默并未对端粒的相对长度产生影响,但明显提高了外显子跳跃的数量,并且影响包括部分核因子κB(NF-κB)靶基因在内的数百基因的转录.结论细胞核内的WASH可与hnRNP A1相互作用,参与选择性剪接和基因转录的调控.
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关键词
Wiskott-Aldrich综合征蛋白和富含脯氨酸同源物(WASH)
核内不均一核糖核蛋白A1(hnRNP
A1)
选择性剪接
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职称材料
题名
兔抗人FAM21多克隆抗体的制备与鉴定
1
作者
汤拓
卢彦基
李文龙
王涛
洪鲜
邓志会
机构
齐齐哈尔
医学院
医学
技术
学院
齐齐哈尔医学院医药科学研究院蛋白质结构与功能研究室
出处
《中国免疫学杂志》
北大核心
2025年第6期1484-1489,共6页
基金
黑龙江省自然科学基金优秀青年项目(YQ2022C036)
齐齐哈尔医学院研究生创新基金项目(QYYCX2023-01)
齐齐哈尔市科技局联合引导项目(LSFGG-2022045)。
文摘
目的:制备兔抗人FAM21多克隆抗体并分析抗体特异性。方法:以编码人FAM21全长基因的表达质粒为模板,PCR扩增其2431~3006碱基的核苷酸序列,连接至pGEX-6p-1原核表达载体,构建表达FAM21第811~1002氨基酸片段的pGEX-6p-1-FAM21重组表达质粒。将重组质粒转化至BL21(DE3)感受态大肠杆菌中并进行诱导表达,用GST融合蛋白纯化磁珠纯化蛋白。将纯化后的GST融合蛋白作为抗原免疫新西兰兔,收集的抗血清经过含GST蛋白的琼脂糖柱进行纯化。在FAM21基因沉默的HeLa细胞中,通过Western blot和免疫荧光实验检测抗体的特异性。结果:成功构建pGEX-6p-1-FAM21原核表达质粒,并在BL21(DE3)大肠杆菌中成功诱导表达,纯化后的GST融合蛋白分子量约为50 kD,免疫新西兰兔后纯化的抗体滴度>1∶128000,并且具有较高的特异性。结论:成功构建了pGEX-6p-1-FAM21原核表达质粒,并制备了可用于Western blot和免疫荧光检测的兔抗人FAM21多克隆抗体。
关键词
FAM21
原核表达
蛋白表达与纯化
多克隆抗体
Keywords
FAM21
Prokaryotic expression
Protein expression and purification
Polyclonal antibody
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
WASH通过与核内不均一核糖核蛋白A1(hnRNP A1)的相互作用调控选择性剪接和基因转录
被引量：
3
2
作者
洪瑜
都晓辉
洪鲜
王涛
邓志会
机构
齐齐哈尔医学院医药科学研究院蛋白质结构与功能研究室
齐齐哈尔
医学院
药
学院
药理学教研室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第6期507-512,共6页
基金
国家自然科学基金(31800648)
黑龙江省自然科学基金(LC2017015)
+1 种基金
黑龙江省省属本科高校基本科研业务费(2020-KYYWF-0001,2018-KYYWF-0100)
齐齐哈尔医学科学院基金(QMSI2017B-03)
文摘
目的探讨Wiskott-Aldrich综合征蛋白和富含脯氨酸同源物(WASH)与核内不均一核糖核蛋白A1(hnRNP A1)的相互作用及其生物学功能.方法利用质谱鉴定、免疫共沉淀技术,研究WASH复合体核心成员WASH/FAM21与hnRNP A1相互作用.使用实时定量PCR检测WASH沉默细胞与对照细胞中端粒长度.使用RNA-Seq检测WASH沉默细胞与对照细胞转录谱.结果质谱鉴定结果显示包括hnRNP A1在内的多种hnRNP家族成员与FAM21-d219N相互作用.免疫沉淀结果验证了内源WASH/FAM21与hnRNP A1的相互作用.WASH沉默并未对端粒的相对长度产生影响,但明显提高了外显子跳跃的数量,并且影响包括部分核因子κB(NF-κB)靶基因在内的数百基因的转录.结论细胞核内的WASH可与hnRNP A1相互作用,参与选择性剪接和基因转录的调控.
关键词
Wiskott-Aldrich综合征蛋白和富含脯氨酸同源物(WASH)
核内不均一核糖核蛋白A1(hnRNP
A1)
选择性剪接
转录
Keywords
Wiskott-Aldrich syndrome protein and SCAR homolog(WASH)
heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A1(hnRNP A1)
alternative splicing
transcription
分类号
Q7 [生物学—分子生物学]
R34 [医药卫生—基础医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
兔抗人FAM21多克隆抗体的制备与鉴定
汤拓
卢彦基
李文龙
王涛
洪鲜
邓志会
《中国免疫学杂志》
北大核心
2025
0
在线阅读
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职称材料
2
WASH通过与核内不均一核糖核蛋白A1(hnRNP A1)的相互作用调控选择性剪接和基因转录
洪瑜
都晓辉
洪鲜
王涛
邓志会
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021
3
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