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稳定过表达TOX3的乳腺癌MDA-MB-231细胞系的建立
被引量：
3
1
作者
韩翠翠
岳丽玲
+3 位作者
杨莹
简白羽
马立威
刘吉成
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第11期1154-1158,共5页
目的构建人TOX高迁移率蛋白家族成员3(TOX3)基因慢病毒表达载体并建立稳定过表达TOX3的MDA-MB-231人乳腺癌细胞系。方法通过全基因合成法合成TOX3基因序列片段,并进行PCR扩增。将TOX3基因克隆到pLVEF-1a/GFP-Puro载体中,构建pLVEF-1a/GF...
目的构建人TOX高迁移率蛋白家族成员3(TOX3)基因慢病毒表达载体并建立稳定过表达TOX3的MDA-MB-231人乳腺癌细胞系。方法通过全基因合成法合成TOX3基因序列片段,并进行PCR扩增。将TOX3基因克隆到pLVEF-1a/GFP-Puro载体中,构建pLVEF-1a/GFP-Puro-TOX3慢病毒载体。经酶切和测序鉴定后,将构建好的慢病毒载体进行病毒包装和病毒滴度检测。用获得的慢病毒液转染MDA-MB-231人乳腺癌细胞系,通过嘌呤霉素选择性培养,用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达,采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测MDA-MB-231细胞中TOX3 mRNA的表达,Western blot法检测MDA-MB-231细胞中TOX3蛋白的表达。结果经酶切和测序鉴定,成功构建了pLVEF-1a/GFP-Puro和pLVEF-1a/GFP-Puro-TOX3慢病毒表达载体,病毒包装后检测病毒滴度分别为2×108TU/mL和1×108TU/mL,转染MDA-MB-231细胞后,GFP表达的细胞达95%以上。与阴性对照组相比,qRT-PCR和Western blot结果显示,MDA-MB-231-TOX3细胞中TOX3的mRNA和蛋白表达水平均明显升高。结论成功构建了TOX3慢病毒表达载体并建立了稳定过表达TOX3的MDA-MB-231细胞系。
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关键词
TOX高迁移率蛋白家族成员3
慢病毒表达载体
MDA-MB-231细胞
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职称材料
FUT8基因RNAi慢病毒载体的构建及对MCF-7细胞增殖的影响
被引量：
1
2
作者
温宪春
韩翠翠
+3 位作者
赵月生
于海涛
李成冲
岳丽玲
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第5期231-236,共6页
旨在构建FUT8基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体并观察其对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响。针对FUT8基因设计3组短发夹RNA序列,退火合成双链DNA,通过连接线性化的p GC-LV-GFP载体,构建mi RNA慢病毒载体质粒,并将其转化至感受态细胞DH5α;测序...
旨在构建FUT8基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体并观察其对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响。针对FUT8基因设计3组短发夹RNA序列,退火合成双链DNA,通过连接线性化的p GC-LV-GFP载体,构建mi RNA慢病毒载体质粒,并将其转化至感受态细胞DH5α;测序验证正确后进行FUT8基因慢病毒载体的包装及病毒滴度测定,将获得的重组慢病毒p GC-sh FUT8转染MCF-7细胞,利用Real time-PCR、Western blot分别验证转染后MCF-7细胞中FUT8 m RNA及蛋白的表达,MTT法及克隆形成实验检测sh FUT8对MCF-7细胞增殖能力的影响。测序证实成功构建针对FUT8基因的RNAi慢病毒载体;慢病毒载体经293T细胞包装成功,测定病毒悬液滴度>5×108 TU/m L;荧光显微镜下观察各转染组细胞GFP的表达,转染效率达90%以上;Real-time PCR、Western blot结果显示干扰组FUT8的m RNA及蛋白表达水平较对照组显著降低,其中p GC-sh FUT8-2序列对FUT8基因的干扰效率可达80%,干扰效果最佳,FUT8沉默后MCF-7细胞增殖能力下降。
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关键词
FUT8基因
慢病毒载体
RNA干扰
MCF-7细胞
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职称材料
题名
稳定过表达TOX3的乳腺癌MDA-MB-231细胞系的建立
被引量：
3
1
作者
韩翠翠
岳丽玲
杨莹
简白羽
马立威
刘吉成
机构
黑龙江中
医药
大学基础
医学院
齐齐哈尔医学院医药科学研究中心
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第11期1154-1158,共5页
基金
国家自然科学基金(81374021)
文摘
目的构建人TOX高迁移率蛋白家族成员3(TOX3)基因慢病毒表达载体并建立稳定过表达TOX3的MDA-MB-231人乳腺癌细胞系。方法通过全基因合成法合成TOX3基因序列片段,并进行PCR扩增。将TOX3基因克隆到pLVEF-1a/GFP-Puro载体中,构建pLVEF-1a/GFP-Puro-TOX3慢病毒载体。经酶切和测序鉴定后,将构建好的慢病毒载体进行病毒包装和病毒滴度检测。用获得的慢病毒液转染MDA-MB-231人乳腺癌细胞系,通过嘌呤霉素选择性培养,用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达,采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测MDA-MB-231细胞中TOX3 mRNA的表达,Western blot法检测MDA-MB-231细胞中TOX3蛋白的表达。结果经酶切和测序鉴定,成功构建了pLVEF-1a/GFP-Puro和pLVEF-1a/GFP-Puro-TOX3慢病毒表达载体,病毒包装后检测病毒滴度分别为2×108TU/mL和1×108TU/mL,转染MDA-MB-231细胞后,GFP表达的细胞达95%以上。与阴性对照组相比,qRT-PCR和Western blot结果显示,MDA-MB-231-TOX3细胞中TOX3的mRNA和蛋白表达水平均明显升高。结论成功构建了TOX3慢病毒表达载体并建立了稳定过表达TOX3的MDA-MB-231细胞系。
关键词
TOX高迁移率蛋白家族成员3
慢病毒表达载体
MDA-MB-231细胞
Keywords
TOX high mobility group box family member 3
lentiviral expression vector
MDA-MB-231 cells
分类号
R392.33 [医药卫生—免疫学]
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
FUT8基因RNAi慢病毒载体的构建及对MCF-7细胞增殖的影响
被引量：
1
2
作者
温宪春
韩翠翠
赵月生
于海涛
李成冲
岳丽玲
机构
齐齐哈尔医学院医药科学研究中心
齐齐哈尔
医学院
附属第三医院乳腺外科
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第5期231-236,共6页
基金
国家自然科学基金项目(81202084)
教育部科学技术研究重点项目(212047)
文摘
旨在构建FUT8基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体并观察其对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响。针对FUT8基因设计3组短发夹RNA序列,退火合成双链DNA,通过连接线性化的p GC-LV-GFP载体,构建mi RNA慢病毒载体质粒,并将其转化至感受态细胞DH5α;测序验证正确后进行FUT8基因慢病毒载体的包装及病毒滴度测定,将获得的重组慢病毒p GC-sh FUT8转染MCF-7细胞,利用Real time-PCR、Western blot分别验证转染后MCF-7细胞中FUT8 m RNA及蛋白的表达,MTT法及克隆形成实验检测sh FUT8对MCF-7细胞增殖能力的影响。测序证实成功构建针对FUT8基因的RNAi慢病毒载体;慢病毒载体经293T细胞包装成功,测定病毒悬液滴度>5×108 TU/m L;荧光显微镜下观察各转染组细胞GFP的表达,转染效率达90%以上;Real-time PCR、Western blot结果显示干扰组FUT8的m RNA及蛋白表达水平较对照组显著降低,其中p GC-sh FUT8-2序列对FUT8基因的干扰效率可达80%,干扰效果最佳,FUT8沉默后MCF-7细胞增殖能力下降。
关键词
FUT8基因
慢病毒载体
RNA干扰
MCF-7细胞
Keywords
FUT8 gene
Lentiviral vector
RNA interference
MCF-7cells
分类号
R737.9 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
稳定过表达TOX3的乳腺癌MDA-MB-231细胞系的建立
韩翠翠
岳丽玲
杨莹
简白羽
马立威
刘吉成
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
FUT8基因RNAi慢病毒载体的构建及对MCF-7细胞增殖的影响
温宪春
韩翠翠
赵月生
于海涛
李成冲
岳丽玲
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2015
1
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