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稳定过表达TOX3的乳腺癌MDA-MB-231细胞系的建立 被引量:3
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作者 韩翠翠 岳丽玲 +3 位作者 杨莹 简白羽 马立威 刘吉成 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1154-1158,共5页
目的构建人TOX高迁移率蛋白家族成员3(TOX3)基因慢病毒表达载体并建立稳定过表达TOX3的MDA-MB-231人乳腺癌细胞系。方法通过全基因合成法合成TOX3基因序列片段,并进行PCR扩增。将TOX3基因克隆到pLVEF-1a/GFP-Puro载体中,构建pLVEF-1a/GF... 目的构建人TOX高迁移率蛋白家族成员3(TOX3)基因慢病毒表达载体并建立稳定过表达TOX3的MDA-MB-231人乳腺癌细胞系。方法通过全基因合成法合成TOX3基因序列片段,并进行PCR扩增。将TOX3基因克隆到pLVEF-1a/GFP-Puro载体中,构建pLVEF-1a/GFP-Puro-TOX3慢病毒载体。经酶切和测序鉴定后,将构建好的慢病毒载体进行病毒包装和病毒滴度检测。用获得的慢病毒液转染MDA-MB-231人乳腺癌细胞系,通过嘌呤霉素选择性培养,用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达,采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测MDA-MB-231细胞中TOX3 mRNA的表达,Western blot法检测MDA-MB-231细胞中TOX3蛋白的表达。结果经酶切和测序鉴定,成功构建了pLVEF-1a/GFP-Puro和pLVEF-1a/GFP-Puro-TOX3慢病毒表达载体,病毒包装后检测病毒滴度分别为2×108TU/mL和1×108TU/mL,转染MDA-MB-231细胞后,GFP表达的细胞达95%以上。与阴性对照组相比,qRT-PCR和Western blot结果显示,MDA-MB-231-TOX3细胞中TOX3的mRNA和蛋白表达水平均明显升高。结论成功构建了TOX3慢病毒表达载体并建立了稳定过表达TOX3的MDA-MB-231细胞系。 展开更多
关键词 TOX高迁移率蛋白家族成员3 慢病毒表达载体 MDA-MB-231细胞
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水稳定的镁掺杂ZnO量子点:一锅法合成及细胞成像应用(英文) 被引量:1
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作者 张立平 吴山 +2 位作者 刘丹 万永刚 刘道森 《无机化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1644-1650,共7页
一锅法合成了镁掺杂的ZnO量子点,利用APTES对其进行表面包覆,并采用XRD、TEM、UV-Vis、PL和FTIR等对材料进行了表征。结果表明镁掺杂能明显增强荧光发光强度,在合适的掺杂浓度(30%)下其量子产率由11%增加到33%。通过APTES的表面包覆使... 一锅法合成了镁掺杂的ZnO量子点,利用APTES对其进行表面包覆,并采用XRD、TEM、UV-Vis、PL和FTIR等对材料进行了表征。结果表明镁掺杂能明显增强荧光发光强度,在合适的掺杂浓度(30%)下其量子产率由11%增加到33%。通过APTES的表面包覆使镁掺杂的ZnO量子点具有良好的水溶性和荧光稳定性,可用于MCF-7细胞成像研究。 展开更多
关键词 ZnO量子点 镁掺杂 APTES包覆 水稳定性
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FUT8基因RNAi慢病毒载体的构建及对MCF-7细胞增殖的影响 被引量:1
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作者 温宪春 韩翠翠 +3 位作者 赵月生 于海涛 李成冲 岳丽玲 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期231-236,共6页
旨在构建FUT8基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体并观察其对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响。针对FUT8基因设计3组短发夹RNA序列,退火合成双链DNA,通过连接线性化的p GC-LV-GFP载体,构建mi RNA慢病毒载体质粒,并将其转化至感受态细胞DH5α;测序... 旨在构建FUT8基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体并观察其对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响。针对FUT8基因设计3组短发夹RNA序列,退火合成双链DNA,通过连接线性化的p GC-LV-GFP载体,构建mi RNA慢病毒载体质粒,并将其转化至感受态细胞DH5α;测序验证正确后进行FUT8基因慢病毒载体的包装及病毒滴度测定,将获得的重组慢病毒p GC-sh FUT8转染MCF-7细胞,利用Real time-PCR、Western blot分别验证转染后MCF-7细胞中FUT8 m RNA及蛋白的表达,MTT法及克隆形成实验检测sh FUT8对MCF-7细胞增殖能力的影响。测序证实成功构建针对FUT8基因的RNAi慢病毒载体;慢病毒载体经293T细胞包装成功,测定病毒悬液滴度>5×108 TU/m L;荧光显微镜下观察各转染组细胞GFP的表达,转染效率达90%以上;Real-time PCR、Western blot结果显示干扰组FUT8的m RNA及蛋白表达水平较对照组显著降低,其中p GC-sh FUT8-2序列对FUT8基因的干扰效率可达80%,干扰效果最佳,FUT8沉默后MCF-7细胞增殖能力下降。 展开更多
关键词 FUT8基因 慢病毒载体 RNA干扰 MCF-7细胞
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丹参酮Ⅱ_A纳米结构脂质载体3种包封率测定方法的筛选 被引量:7
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作者 钱佳怡 韩翠艳 +2 位作者 韩翠翠 杨莹 刘吉成 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期1637-1639,共3页
目的对丹参酮ⅡA纳米结构脂质载体的3种包封率测定方法进行筛选。方法 HPLC法测定丹参酮ⅡA含有量,以超滤离心法、聚结过滤法及正己烷萃取法为包封率测定方法,分离丹参酮ⅡA与纳米粒,并进行方法学考察。结果 3种方法的回收率分别为26.25... 目的对丹参酮ⅡA纳米结构脂质载体的3种包封率测定方法进行筛选。方法 HPLC法测定丹参酮ⅡA含有量,以超滤离心法、聚结过滤法及正己烷萃取法为包封率测定方法,分离丹参酮ⅡA与纳米粒,并进行方法学考察。结果 3种方法的回收率分别为26.25%、56.32%、94.52%。结论正己烷萃取法可用于测定丹参酮ⅡA纳米结构脂质载体的包封率。 展开更多
关键词 丹参酮ⅡA 纳米结构脂质载体 包封率 超滤离心法 聚结过滤法 正己烷萃取法 HPLC法
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