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Egr1介导的人截短型凋亡诱导因子表达载体的构建及其在乳腺癌MCF-7细胞中的辐射诱导表达规律
被引量：
3
1
作者
王剑锋
方芳
+3 位作者
刘扬
吴嘉慧
龚守良
王志成
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第3期521-527,共7页
目的:克隆人截短型凋亡诱导因子(AIF)cDNA序列,并构建早期生长反应因子1(Egr1)介导的重组表达载体pcDNA3.1-Egr1-AIFΔ1-480(pEgr1-AIFΔ1-480),观察其在人乳腺癌MCF-7细胞中的辐射诱导表达规律。方法:以人白血病Jurkat细胞mRNA为模板,R...
目的:克隆人截短型凋亡诱导因子(AIF)cDNA序列,并构建早期生长反应因子1(Egr1)介导的重组表达载体pcDNA3.1-Egr1-AIFΔ1-480(pEgr1-AIFΔ1-480),观察其在人乳腺癌MCF-7细胞中的辐射诱导表达规律。方法:以人白血病Jurkat细胞mRNA为模板,RT-PCR法扩增获得人AIFΔ1-480,与pMD18T载体连接后行全自动测序,限制性内切酶切取pMD19T-Egr1中Egr1片段,并利用基因重组技术构建Egr1启动子介导的人AIFΔ1-480表达质粒pEgr1-AIFΔ1-480。实验分为对照组、pcDNA3.1组、pAIFΔ1-480组和pEgr1-AIFΔ1-480组。各组质粒分别转染MCF-7细胞,Western blotting法检测AIF及AIFΔ1-480蛋白的辐射诱导表达时程-效应(2.0Gy照射后0、2、4、12、24和48h)和剂量-效应(0、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0Gy照射后24h)规律。结果:经测序证实,RT-PCR获得的人AIFΔ1-480基因与预期一致,pEgr1-AIFΔ1-480经PCR和酶切鉴定完全正确;各组MCF-7细胞经2.0Gy照射后0～48h,AIF蛋白在各组中均有表达,从4h开始显著增加,4、12、24和48h各组AIF表达与0h组比较差异有统计学意义(P<0.05),48h达到最大;而在pAIFΔ1-480和pEgr1-AIFΔ1-480组,AIFΔ1-480从2h开始表达,4、12、28和48h各组AIFΔ1-480表达与2h比较差异有统计学意义(P<0.05),24h达到峰值;而且24和48h时pEgr1-AIFΔ1-480组AIFΔ1-480表达较pAIFΔ1-480组显著增加(P<0.05)。各组MCF-7细胞经0～5.0Gy照射后24h,各组均有AIF蛋白表达,而AIFΔ1-480只在pAIFΔ1-480和pEgr1-AIFΔ1-480组表达,二者均随着剂量增加而增加,0.2、0.5、1.0、2.0和5.0Gy照射后各组AIF表达与0Gy比较差异有统计学意义(P<0.05),在5.0Gy照射时达到最大,相同照射剂量pEgr1-AIFΔ1-480组AIFΔ1-480表达高于pAIFΔ1-480组。结论:成功构建Egr1介导的人截短型AIF重组表达载体pEgr1-AIFΔ1-480,AIF和AIFΔ1-480蛋白在MCF-7细胞中的表达随照射时间延长和照射剂量增加而增加。
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关键词
Egr1
截短型凋亡诱导因子
辐射
乳腺肿瘤
基因重组
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职称材料
题名
Egr1介导的人截短型凋亡诱导因子表达载体的构建及其在乳腺癌MCF-7细胞中的辐射诱导表达规律
被引量：
3
1
作者
王剑锋
方芳
刘扬
吴嘉慧
龚守良
王志成
机构
吉林大学中日联谊医院放疗科
吉林大学
公共
卫生
学院
卫生
部放射生物学重点
实验
室
吉林大学
公共
卫生
学院
营养与食品
卫生
学教研室
吉林大学
公共
卫生
学院
放射
医学
教学
实验
中心
齐齐哈尔医学院公共卫生学院实验中心
出处
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第3期521-527,共7页
基金
国家自然科学基金资助课题(30970681)
吉林大学科学前沿与交叉学科创新项目资助课题(201103258)
文摘
目的:克隆人截短型凋亡诱导因子(AIF)cDNA序列,并构建早期生长反应因子1(Egr1)介导的重组表达载体pcDNA3.1-Egr1-AIFΔ1-480(pEgr1-AIFΔ1-480),观察其在人乳腺癌MCF-7细胞中的辐射诱导表达规律。方法:以人白血病Jurkat细胞mRNA为模板,RT-PCR法扩增获得人AIFΔ1-480,与pMD18T载体连接后行全自动测序,限制性内切酶切取pMD19T-Egr1中Egr1片段,并利用基因重组技术构建Egr1启动子介导的人AIFΔ1-480表达质粒pEgr1-AIFΔ1-480。实验分为对照组、pcDNA3.1组、pAIFΔ1-480组和pEgr1-AIFΔ1-480组。各组质粒分别转染MCF-7细胞,Western blotting法检测AIF及AIFΔ1-480蛋白的辐射诱导表达时程-效应(2.0Gy照射后0、2、4、12、24和48h)和剂量-效应(0、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0Gy照射后24h)规律。结果:经测序证实,RT-PCR获得的人AIFΔ1-480基因与预期一致,pEgr1-AIFΔ1-480经PCR和酶切鉴定完全正确;各组MCF-7细胞经2.0Gy照射后0～48h,AIF蛋白在各组中均有表达,从4h开始显著增加,4、12、24和48h各组AIF表达与0h组比较差异有统计学意义(P<0.05),48h达到最大;而在pAIFΔ1-480和pEgr1-AIFΔ1-480组,AIFΔ1-480从2h开始表达,4、12、28和48h各组AIFΔ1-480表达与2h比较差异有统计学意义(P<0.05),24h达到峰值;而且24和48h时pEgr1-AIFΔ1-480组AIFΔ1-480表达较pAIFΔ1-480组显著增加(P<0.05)。各组MCF-7细胞经0～5.0Gy照射后24h,各组均有AIF蛋白表达,而AIFΔ1-480只在pAIFΔ1-480和pEgr1-AIFΔ1-480组表达,二者均随着剂量增加而增加,0.2、0.5、1.0、2.0和5.0Gy照射后各组AIF表达与0Gy比较差异有统计学意义(P<0.05),在5.0Gy照射时达到最大,相同照射剂量pEgr1-AIFΔ1-480组AIFΔ1-480表达高于pAIFΔ1-480组。结论:成功构建Egr1介导的人截短型AIF重组表达载体pEgr1-AIFΔ1-480,AIF和AIFΔ1-480蛋白在MCF-7细胞中的表达随照射时间延长和照射剂量增加而增加。
关键词
Egr1
截短型凋亡诱导因子
辐射
乳腺肿瘤
基因重组
Keywords
early growth response gene 1
truncated AIF
radiation
breast neoplasms
gene recombination
分类号
R737.9 [医药卫生—肿瘤]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
Egr1介导的人截短型凋亡诱导因子表达载体的构建及其在乳腺癌MCF-7细胞中的辐射诱导表达规律
王剑锋
方芳
刘扬
吴嘉慧
龚守良
王志成
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2012
3
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