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十二烷基硫酸钠毛细管电泳法分析非还原单克隆抗体药物纯度的前处理条件优化 被引量:6
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作者 刘振东 高铁 +3 位作者 徐玲丽 杨勇 王庆民 陈泓序 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期666-670,共5页
十二烷基硫酸钠毛细管电泳法因具有快速、分辨率高的优势,已成为单克隆抗体纯度分析的主流方法。在非还原单克隆抗体纯度检测中,其样品前处理过程对于结果有显著影响。为优化样品前处理,考察了以碘乙酰胺和N-乙基马来酰亚胺为巯基封闭剂... 十二烷基硫酸钠毛细管电泳法因具有快速、分辨率高的优势,已成为单克隆抗体纯度分析的主流方法。在非还原单克隆抗体纯度检测中,其样品前处理过程对于结果有显著影响。为优化样品前处理,考察了以碘乙酰胺和N-乙基马来酰亚胺为巯基封闭剂,在pH 6.0~9.0的样品缓冲液条件下,不同种类和批次的单抗的纯度。发现在两种巯基封闭剂中,高pH的样品缓冲液会影响巯基封闭的效果,产生较多的抗体片段;而在低pH条件下,抗体片段较少,单抗的纯度更高。因此在进行非还原单抗的纯度检测中,pH 6.0的样品缓冲液为最佳的前处理条件。 展开更多
关键词 单克隆抗体 非还原 十二烷基硫酸钠 毛细管电泳法 碘乙酰胺 N 乙基马来酰亚胺
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酒石酸长春瑞滨长循环脂质体的包封率测定及药效研究 被引量:7
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作者 赵利刚 杨清敏 +4 位作者 杨光丽 王栋海 严守升 张慧 王晶翼 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期508-512,共5页
以超滤法对酒石酸长春瑞滨(VBT)长循环脂质体包封率的测定方法进行研究,并观察VBT脂质体注射液的体内抗肿瘤作用。采用薄膜蒸发-高压乳匀法制备VBT长循环脂质体,以超滤法分离脂质体和游离药物检测其包封率,并建立了小裸鼠实体瘤HT-29抗... 以超滤法对酒石酸长春瑞滨(VBT)长循环脂质体包封率的测定方法进行研究,并观察VBT脂质体注射液的体内抗肿瘤作用。采用薄膜蒸发-高压乳匀法制备VBT长循环脂质体,以超滤法分离脂质体和游离药物检测其包封率,并建立了小裸鼠实体瘤HT-29抗肿瘤模型,脂质体组给药剂量为3mg/kg和6mg/kg,阳性VBT注射液对照组为6mg/kg,阴性对照组为0.9%NaCl,尾静脉给药。结果发现,超滤法能将脂质体与游离药物很好地分离,游离药物回收率为99.3%~101.1%,加样回收率为97.2%~98.7%。VBT长循环脂质体以6和3mg/kg给药后,对实体瘤HT-29的抑瘤率分别为84.9%和54.4%,阳性VBT注射液对照组抑瘤率为27.6%,二者有显著性差异(P<0.01)。采用超滤-HPLC法能有效测定VBT长循环脂质体的含量及包封率;高剂量及低剂量组VBT长循环脂质体的体内抗肿瘤作用均显著优于高剂量VBT注射液。 展开更多
关键词 长春瑞滨 脂质体 超滤法 包封率 抑瘤率
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白喉毒素突变体CRM197在大肠杆菌中表达纯化及性质研究 被引量:4
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作者 赵雪娜 董相陈 +3 位作者 侯登勇 孙丽霞 王晶翼 王庆民 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期153-156,共4页
CRM197是一种白喉毒素突变体,作为载体蛋白广泛用于疫苗开发。将合成的CRM197基因片段克隆到表达载体pET25b中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,CRM197获得高效表达,达到菌体总蛋白的20%。目的蛋白主要以包涵体形式存在,变性、复性后... CRM197是一种白喉毒素突变体,作为载体蛋白广泛用于疫苗开发。将合成的CRM197基因片段克隆到表达载体pET25b中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,CRM197获得高效表达,达到菌体总蛋白的20%。目的蛋白主要以包涵体形式存在,变性、复性后经DEAE阴离子交换、S-100分子筛纯化获得纯度高于95%的CRM197样品,用该蛋白样品免疫新西兰大白兔,免疫兔血清中检测到特异性抗体应答。急性毒性试验中,每只豚鼠皮下注射200μgCRM197纯化样品,未出现明显毒性反应症状,与之相比较,注射后48h内,20ng白喉毒素阳性对照组动物全部死亡。结果表明,利用本试验的表达策略,CRM197得到高效表达,并且具有良好的免疫原性和安全性,为其进一步生产及应用奠定基础。 展开更多
关键词 CRM197 白喉毒素 包涵体免疫原性 急性毒性
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三氮唑类化合物的合成及抗真菌活性研究 被引量:3
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作者 胡晓燕 孙翠兰 +3 位作者 冷传新 朱屹东 初乐玲 王晶翼 《化学研究与应用》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1573-1577,共5页
To study the antifungal mechanism and structure-activity relationship of the azole compounds,four triazole compounds were designed and synthesized.All of them were confirmed by 1H-NMR.Antifungal activities of title co... To study the antifungal mechanism and structure-activity relationship of the azole compounds,four triazole compounds were designed and synthesized.All of them were confirmed by 1H-NMR.Antifungal activities of title compounds were evaluated.And the results of the preliminary antifungal test showed that all compounds exhibited inhibitory effects on C.albicans and C.neoformans,especially the effects of 8d and 8b showed more potent than fluconazole. 展开更多
关键词 三氮唑类化合物 化学合成 抗真菌活性
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毕赤酵母表达去氨普酶及其突变体的溶栓活性研究
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作者 严守升 宫新江 +6 位作者 郭永起 李剑凤 武国栋 王庆民 孙丽霞 杨清敏 王晶翼 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2010年第6期646-650,共5页
目的:研究毕赤酵母表达野生型去氨普酶(DSPAwt)及其突变体F195和QNRR的溶栓活性,为开发新型溶栓类药物奠定基础。方法:以阿替普酶(rt-PA)和中国仓鼠卵巢细胞表达野生型DSPAα1为阳性对照,采用大鼠动-静脉旁路血栓模型,通过对血栓重量、... 目的:研究毕赤酵母表达野生型去氨普酶(DSPAwt)及其突变体F195和QNRR的溶栓活性,为开发新型溶栓类药物奠定基础。方法:以阿替普酶(rt-PA)和中国仓鼠卵巢细胞表达野生型DSPAα1为阳性对照,采用大鼠动-静脉旁路血栓模型,通过对血栓重量、出血时间、大鼠凝血指标凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶原时间(APTT)和纤维蛋白降解产物D-二聚体的测定考察毕赤酵母表达DSPAwt及其两种突变体的溶栓活性。结果:DSPAwt及其突变体F195和QNRR在0.7mg/kg和1.5mg/kg剂量下均有一定的溶栓活性,其中DSPAwt溶栓作用较弱,有效动物数少,溶栓率较低,相同剂量突变体F195和QNRR溶栓作用显著增强,溶栓效果与DSPAα1接近。此外,不同剂量各样品均能在一定程度上延长大鼠出血时间,延长大鼠血浆TT、PT和APTT,提高血浆中D-二聚体含量。结论:通过酵母表达系统有望获得具有高溶栓活性的突变型DSPA,从而开发成新一代溶栓类药物。 展开更多
关键词 去氨普酶 溶栓活性 动-静脉旁路血栓模型 纤溶酶原激活剂
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重组人角质细胞生长因子对放射性和放疗性口腔黏膜炎的防治作用 被引量:11
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作者 宫新江 严守升 +7 位作者 孙春艳 韩景宾 齐林 任建平 刘克玲 王克波 孙丽霞 王晶翼 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期551-557,共7页
目的评价重组人角质细胞生长因子(rhKGF)对口腔黏膜炎(OM)的预防和治疗作用。方法以MTT法检测rhKGF对32D-KGFR细胞体外增殖的促进作用。大鼠头部经15.3 Gy 60Co辐射制备放射性OM模型,预防组在照射前3 d iv给予rhKGF 0.75,1.5和3 mg.kg-... 目的评价重组人角质细胞生长因子(rhKGF)对口腔黏膜炎(OM)的预防和治疗作用。方法以MTT法检测rhKGF对32D-KGFR细胞体外增殖的促进作用。大鼠头部经15.3 Gy 60Co辐射制备放射性OM模型,预防组在照射前3 d iv给予rhKGF 0.75,1.5和3 mg.kg-1或帕利非明1.5 mg.kg-1,每天1次,共3次;预防+治疗组在照射前3 d及照射后第2天和第4天iv给予rhKGF 1.5 mg.kg-1,共5次。小鼠iv给予5-氟尿嘧啶50 mg.kg-1,每天1次,连续4 d,制备化疗性OM模型,预防组在化疗开始前3 d iv给予rhKGF1.25,2.5,5 mg.kg-1或帕利非明2.5 mg.kg-1,每天1次,共3次;预防+治疗组在化疗开始前3 d及末次化疗后第2天和第4天iv给予rhKGF 2.5 mg.kg-1,共5次。通过观察临床症状、进食量、体质量变化、死亡率和OM发生率以及组织形态变化评价对OM的预防和治疗作用。结果 rhKGF 6.25~100μg.L-1可促进32D-KGFR细胞增殖反应。在放射性OM模型中,正常对照组、模型组、rhKGF 0.75,1.5和3 mg.kg-1预防组、预防+治疗组及帕利非明预防组大鼠OM发生率分别为0/12,12/12,8/12,6/12,5/12,5/12和5/12,rhKGF 1.5和3.0 mg.kg-1预防组、预防+治疗组和帕利非明预防组在放疗后第6天大鼠进食量显著高于模型组(P<0.05),第6和12天时各给药组体质量均显著高于模型组(P<0.05);另外,各给药组OM症状积分均降低,出现时间延迟,病程缩短。在化疗模型中,正常对照组、模型组、rhKGF预防1.25,2.5,5 mg.kg-1组、预防+治疗组及帕利非明预防组小鼠OM发生率分别为0/16,16/16,10/16,8/16,5/16,10/16和6/16,各给药组在末次化疗后第3和6天能显著缓解化疗引起的进食量减少;与模型组比较,rhKGF和帕利非明预防组小鼠肠黏膜厚度增加,绒毛膜上皮细胞增加,杯状细胞饱满粗大,小肠隐窝深度可见,绒毛形态正常,尤以rhKGF 2.5 mg.kg-1预防组作用最明显;rhKGF预防+治疗组的作用不及同剂量rhKGF预防组。结论rhKGF可预防放射性或化疗所致OM。 展开更多
关键词 角质细胞生长因子 放射疗法 化学治疗学 口腔黏膜炎 化学预防 治疗
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抗促胃液素疫苗mG17-CRM197单用及联合5-FU抑制小鼠结肠癌的生长
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作者 宫新江 王栋海 +7 位作者 赵娥 郑庆梅 王克波 高永宏 范传文 朱屹东 杨清敏 王晶翼 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期510-513,共4页
目的:观察抗促胃液素(gastrin,又称胃泌素)疫苗mG17-CRM197(mG17)单用及联合氟尿嘧啶(fluorouracil,5-FU)对小鼠结肠癌C38移植瘤的抑制作用。方法:采用Western blotting法检测结肠癌细胞促胃液素受体(CCKBR)的表达情况,磺酰罗丹明B(SRB... 目的:观察抗促胃液素(gastrin,又称胃泌素)疫苗mG17-CRM197(mG17)单用及联合氟尿嘧啶(fluorouracil,5-FU)对小鼠结肠癌C38移植瘤的抑制作用。方法:采用Western blotting法检测结肠癌细胞促胃液素受体(CCKBR)的表达情况,磺酰罗丹明B(SRB)法检测mG17-NH2对C38细胞增殖的影响。C57BL/6小鼠随机分为PBS组、CRM197组、mG17组、5-FU组和mG17/5-FU组,ELISA法检测小鼠血清中抗G17抗体水平;免疫后的小鼠皮下进行肿瘤移植,5-FU组和mG17/5-FU组给予5-FU(20 mg/kg,q2d×5),其他组给予生理盐水,通过肿瘤生长曲线和瘤质量评价不同治疗方案对C38移植瘤生长的影响。结果:小鼠结肠癌C38细胞表达CCKBR,mG17-NH2浓度依赖性上调CCKBR的表达,且能促进C38细胞增殖(细胞增殖率为115.7%~133.5%)。mG17疫苗免疫3次后,小鼠血清抗mG17抗体水平依次升高。mG17组、5-FU组和mG17/5-FU组对C38移植瘤有显著抑制作用,抑瘤率分别为58.0%、60.5%和80.7%;按金氏法计算,mG17与5-FU联用的Q值为0.97,两药联用出现相加作用。结论:mG17-CRM197疫苗对小鼠结肠癌C38移植瘤治疗有效,与5-FU联用增强对小鼠结肠癌的抑制。 展开更多
关键词 促胃液素 疫苗 结肠癌 5-氟尿嘧啶
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