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铜绿假单胞菌外膜蛋白Ⅰ载体疫苗构建及免疫效果研究
1
作者
张艳琪
胡基华
曲晓军
《安徽农业科学》
2025年第7期86-91,101,共7页
[目的]构建表达铜绿假单胞菌外膜蛋白I的重组乳酸乳球菌载体疫苗,评价构建的载体疫苗免疫效果,为研发可防治铜绿假单胞菌感染的疫苗奠定基础。[方法]根据GenBank中铜绿假单胞菌OprI基因序列设计引物,扩增、鉴定OprI基因,将OprI基因扩增...
[目的]构建表达铜绿假单胞菌外膜蛋白I的重组乳酸乳球菌载体疫苗,评价构建的载体疫苗免疫效果,为研发可防治铜绿假单胞菌感染的疫苗奠定基础。[方法]根据GenBank中铜绿假单胞菌OprI基因序列设计引物,扩增、鉴定OprI基因,将OprI基因扩增产物与pMG36c质粒双酶切、连接,构建重组质粒pMG36c-OprI;对乳酸乳球菌MG1363菌株感受态细胞制备和电转化方法优化,将重组质粒电转化MG1363感受态细胞,酶切和PCR反应及测序鉴定转化情况,SDS-PAGE电泳检测OprI蛋白表达情况;采用灌胃、皮下注射和鼻腔喷雾接种小鼠方式评价载体疫苗安全性和异常毒性,采用免疫小鼠、攻毒试验评价免疫效果。[结果]重组载体疫苗构建成功;感受态细胞制备和电转化优化条件:细菌OD_(600)=0.5,复壮时间3 h,质粒添加量100 ng和转化电压2.5 kV时,转化效率可达到425 CFU/μg DNA;载体疫苗安全性、异常毒性试验合格;载体疫苗对小鼠的保护率为76.67%;免疫后,小鼠血清抗体IgG和IgE水平显著高于免疫前(P<0.01),载体疫苗免疫组水平显著高于MG1363菌株免疫组(P<0.01)。[结论]构建了安全、无异常毒性、免疫效果较好的表达铜绿假单胞菌外膜蛋白I的乳酸乳球菌重组载体疫苗,为有效防治铜绿假单胞菌感染提供了坚实的技术支撑。
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关键词
铜绿假单胞菌
外膜蛋白I
乳酸乳球菌
重组载体疫苗
免疫效果
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职称材料
小鼠对表达铜绿假单胞菌外膜蛋白Ⅰ乳酸乳球菌载体疫苗的免疫应答研究
2
作者
陈青妍
曲晓军
《安徽农业科学》
2025年第15期62-66,共5页
[目的]评价清洁级小鼠对表达铜绿假单胞菌外膜蛋白Ⅰ的重组乳酸乳球菌载体疫苗的免疫应答效果,以期为研发可防治铜绿假单胞菌感染的疫苗奠定基础。[方法]载体疫苗和乳酸乳球菌菌悬液分别灌胃免疫小鼠,首免后第35天用铜绿假单胞菌攻毒,...
[目的]评价清洁级小鼠对表达铜绿假单胞菌外膜蛋白Ⅰ的重组乳酸乳球菌载体疫苗的免疫应答效果,以期为研发可防治铜绿假单胞菌感染的疫苗奠定基础。[方法]载体疫苗和乳酸乳球菌菌悬液分别灌胃免疫小鼠,首免后第35天用铜绿假单胞菌攻毒,颈椎脱臼处死小鼠,无菌取出小鼠肺和脾脏并称重;将小鼠鼻腔冲洗液和肺组织匀浆物稀释涂布PIA培养基,计算活菌数量;小鼠肺部插管固定,苏木精-伊红染色,细胞成像系统成像;小鼠心脏穿刺分离血液,全自动动物血液分析仪定量总白细胞、中性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞;肺组织匀浆物过滤分离,裂解红细胞,与荧光标记抗体混合物4℃孵育,流式细胞分析仪分析;脾细胞匀浆物过滤,表面染色和细胞内染色,流式细胞分析仪分析;肺组织匀浆物上清液,用检测试剂盒检测IFN-γ、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、KC-GRO、IL-10、IL-17和TNF-α;ELISA法检测小鼠血清中病原特异性抗体水平。[结果]与乳酸乳球菌MG1363菌株免疫组相比,载体疫苗免疫组小鼠鼻腔和肺部因攻毒引起的铜绿假单胞菌载量明显减少,载体疫苗可减少铜绿假单胞菌在呼吸道定殖;载体疫苗可有效减少因攻毒引发的小鼠肺部重量增加;铜绿假单胞菌攻毒导致小鼠肺部中性粒细胞招募反应,载体疫苗可减少肺组织多形核白细胞招募,增加循环中性粒细胞比例;攻毒后载体疫苗免疫组小鼠诱导了Th1型免疫反应,增加了脾脏中Th17细胞占CD4+细胞的比例,并可有效诱导小鼠产生明显的IgG和IgA抗体。[结论]探究了小鼠对前期构建的载体疫苗的免疫应答反应,证实了载体疫苗可有效防治铜绿假单胞菌感染,为研制铜绿假单胞菌疫苗提供了技术支持。
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关键词
载体疫苗
免疫
组织学
血液学
流式细胞术
细胞因子
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职称材料
题名
铜绿假单胞菌外膜蛋白Ⅰ载体疫苗构建及免疫效果研究
1
作者
张艳琪
胡基华
曲晓军
机构
黑龙江省科学院微生物研究所/微生物药物学创新研究中心
出处
《安徽农业科学》
2025年第7期86-91,101,共7页
基金
黑龙江省科学院科学研究基金项目(KY2022SW01)。
文摘
[目的]构建表达铜绿假单胞菌外膜蛋白I的重组乳酸乳球菌载体疫苗,评价构建的载体疫苗免疫效果,为研发可防治铜绿假单胞菌感染的疫苗奠定基础。[方法]根据GenBank中铜绿假单胞菌OprI基因序列设计引物,扩增、鉴定OprI基因,将OprI基因扩增产物与pMG36c质粒双酶切、连接,构建重组质粒pMG36c-OprI;对乳酸乳球菌MG1363菌株感受态细胞制备和电转化方法优化,将重组质粒电转化MG1363感受态细胞,酶切和PCR反应及测序鉴定转化情况,SDS-PAGE电泳检测OprI蛋白表达情况;采用灌胃、皮下注射和鼻腔喷雾接种小鼠方式评价载体疫苗安全性和异常毒性,采用免疫小鼠、攻毒试验评价免疫效果。[结果]重组载体疫苗构建成功;感受态细胞制备和电转化优化条件:细菌OD_(600)=0.5,复壮时间3 h,质粒添加量100 ng和转化电压2.5 kV时,转化效率可达到425 CFU/μg DNA;载体疫苗安全性、异常毒性试验合格;载体疫苗对小鼠的保护率为76.67%;免疫后,小鼠血清抗体IgG和IgE水平显著高于免疫前(P<0.01),载体疫苗免疫组水平显著高于MG1363菌株免疫组(P<0.01)。[结论]构建了安全、无异常毒性、免疫效果较好的表达铜绿假单胞菌外膜蛋白I的乳酸乳球菌重组载体疫苗,为有效防治铜绿假单胞菌感染提供了坚实的技术支撑。
关键词
铜绿假单胞菌
外膜蛋白I
乳酸乳球菌
重组载体疫苗
免疫效果
Keywords
Pseudomonas aeruginosa
Outer membrane protein I
Lactobacillus lactis
Recombinant vector vaccines
Immune effect
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
小鼠对表达铜绿假单胞菌外膜蛋白Ⅰ乳酸乳球菌载体疫苗的免疫应答研究
2
作者
陈青妍
曲晓军
机构
黑龙江省科学院微生物研究所/微生物药物学创新研究中心
出处
《安徽农业科学》
2025年第15期62-66,共5页
基金
黑龙江省科学院科学研究基金项目(KY2022SW01)。
文摘
[目的]评价清洁级小鼠对表达铜绿假单胞菌外膜蛋白Ⅰ的重组乳酸乳球菌载体疫苗的免疫应答效果,以期为研发可防治铜绿假单胞菌感染的疫苗奠定基础。[方法]载体疫苗和乳酸乳球菌菌悬液分别灌胃免疫小鼠,首免后第35天用铜绿假单胞菌攻毒,颈椎脱臼处死小鼠,无菌取出小鼠肺和脾脏并称重;将小鼠鼻腔冲洗液和肺组织匀浆物稀释涂布PIA培养基,计算活菌数量;小鼠肺部插管固定,苏木精-伊红染色,细胞成像系统成像;小鼠心脏穿刺分离血液,全自动动物血液分析仪定量总白细胞、中性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞;肺组织匀浆物过滤分离,裂解红细胞,与荧光标记抗体混合物4℃孵育,流式细胞分析仪分析;脾细胞匀浆物过滤,表面染色和细胞内染色,流式细胞分析仪分析;肺组织匀浆物上清液,用检测试剂盒检测IFN-γ、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、KC-GRO、IL-10、IL-17和TNF-α;ELISA法检测小鼠血清中病原特异性抗体水平。[结果]与乳酸乳球菌MG1363菌株免疫组相比,载体疫苗免疫组小鼠鼻腔和肺部因攻毒引起的铜绿假单胞菌载量明显减少,载体疫苗可减少铜绿假单胞菌在呼吸道定殖;载体疫苗可有效减少因攻毒引发的小鼠肺部重量增加;铜绿假单胞菌攻毒导致小鼠肺部中性粒细胞招募反应,载体疫苗可减少肺组织多形核白细胞招募,增加循环中性粒细胞比例;攻毒后载体疫苗免疫组小鼠诱导了Th1型免疫反应,增加了脾脏中Th17细胞占CD4+细胞的比例,并可有效诱导小鼠产生明显的IgG和IgA抗体。[结论]探究了小鼠对前期构建的载体疫苗的免疫应答反应,证实了载体疫苗可有效防治铜绿假单胞菌感染,为研制铜绿假单胞菌疫苗提供了技术支持。
关键词
载体疫苗
免疫
组织学
血液学
流式细胞术
细胞因子
Keywords
Vector vaccine
Immunity
Histology
Hematology
Flow cytometry
Cell factor
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
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1
铜绿假单胞菌外膜蛋白Ⅰ载体疫苗构建及免疫效果研究
张艳琪
胡基华
曲晓军
《安徽农业科学》
2025
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职称材料
2
小鼠对表达铜绿假单胞菌外膜蛋白Ⅰ乳酸乳球菌载体疫苗的免疫应答研究
陈青妍
曲晓军
《安徽农业科学》
2025
0
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